王琿， 高慧媛， 張振秋， 吳立軍*

(1.沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧 沈陽 110016;2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 大連 116600)

中藥迷迭香化學(xué)成分的分離與鑒定

王琿1，2， 高慧媛1， 張振秋2， 吳立軍1*

(1.沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院，遼寧 沈陽 110016;2.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 大連 116600)

目的:對中藥迷迭香Rosmarinus officinalisL.的化學(xué)成分進行研究。方法采用硅膠、凝膠柱色譜等方法進行分離純化，根據(jù)理化性質(zhì)和NMR波譜數(shù)據(jù)進行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果分離得到8個化合物，分別鑒定為β-谷甾醇(β-sitosterol， 1)、 4′， 5-二羥基-7-甲氧基黃酮(4′， 5-dihydroxy-7-methoxyflavone， 2)、 熊果醇(uvaol， 3)、 3， 5-二羥基-7， 3′， 4′-三甲氧基黃酮(3， 5-dihydroxy-7， 3′， 4′-trimethoxyflavone， 4)、 5-羥基-4′， 7-二甲氧基-6-甲基黃酮(5-hydroxy-4′， 7-dimethoxy-6-methylflavone， 5)、 槲皮素(quercetin， 6)、 蘆丁(rutin， 7)、 阿魏酸(ferulicacid， 8)。結(jié)論化合物2、4、5為首次從該屬植物中分離得到。

迷迭香;化學(xué)成分;結(jié)構(gòu)鑒定

迷迭香Rosmarinus officinalisL.系唇形科(Labiatae)迷迭香屬(Rosmarinus)植物，原產(chǎn)自地中海沿岸。目前，我國云南、貴州、廣西、海南和新疆等地都有大面積栽種。迷迭香性溫，味辛，具有芳香健胃、鎮(zhèn)靜安神等功效[1]。迷迭香作為天然植物，有很好的抗氧化、抗炎、抗病毒、抗腫瘤等藥理作用[2]。主要成分為黃酮類、萜類、酚類等，其中二萜酚類成分具有多種活性[3]。水溶性成分迷迭香酸在抗炎、抗血栓等方面有良好的應(yīng)用[4]。對迷迭香化學(xué)成分的深入研究，將有利于其進一步的開發(fā)和利用。作者對中藥迷迭香75%乙醇提取物的化學(xué)成分進行了研究，從提取物的醋酸乙酯層萃取部分分離鑒定了8個化合物，分別為β-谷甾醇(βsitosterol， 1)、 4′， 5-二羥基-7-甲氧基黃酮(4′， 5-dihydroxy-7-methoxyflavone， 2)、 熊果醇(uvaol， 3)、3， 5-二 羥 基-7， 3′， 4′-三 甲 氧 基 黃 酮 (3， 5-dihydroxy-7， 3′， 4′-trimethoxyflavone， 4)、 5-羥 基-4′， 7-二 甲 氧 基-6-甲 基 黃 酮 (5-hydroxy-4′， 7-dimethoxy-6-methylflavone， 5)、 槲 皮 素 (quercetin，6)、蘆丁(rutin，7)、阿魏酸(ferulic acid，8)，其中化合物2、4、5為從該屬植物中首次分離得到?；衔?～8的結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 化合物2～8的化學(xué)結(jié)構(gòu)

1 儀器和材料

Bruker ARX-300、AV-600型核磁共振儀(TMS內(nèi)標(biāo)，瑞士 Bruker公司)。柱色譜用硅膠(200～300目)、薄層色譜用硅膠GF254(10～40μm)均為青島海洋化工有限公司生產(chǎn)，其余所用試劑均為分析純。

迷迭香藥材購于安徽亳州華申藥業(yè)有限公司，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)李峰教授鑒定為迷迭香Rosmarinus officinalisL.的全草。

2 提取與分離

迷迭香干品(7 kg)粉碎，預(yù)先用石油醚加熱回流提取3次，每次2 h，除葉綠素，繼后藥渣用體積分數(shù)為75%乙醇加熱回流提取3次，每次分別為2，2，1 h，提取液過濾，合并濾液，減壓回收溶劑得到醇提物浸膏965 g，以10倍量水將浸膏分散，分別用醋酸乙酯和正丁醇進行萃取，采用硅膠、凝膠柱色譜等方法對醋酸乙酯萃取物(400 g)進行反復(fù)分離，經(jīng)不同體積比的三氯甲烷-甲醇梯度洗脫(體積比100∶1～1∶1)和重結(jié)晶等方法，分離得到化合物1(20 mg)、2(20 mg)、3(13 mg)、 4(17 mg)、5(5 mg)、 6(15 mg)、 7(12 mg)、 8(10 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1

無色針晶(丙酮)，香草醛-濃硫酸顯紫紅色，與已知對照品β-谷甾醇共薄層檢測，在3種溶劑系統(tǒng)下展開，二者薄層行為完全一致，鑒定其為β-谷甾醇(β-sitosterol)。

3.2 化合物2

黃色結(jié)晶(三氯甲烷)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)為陽性。1H-NMR(300 MHz，CDCl3) 譜中， δ12.88(1H，s)為5-OH質(zhì)子信號;δ7.94(2H，d，J=8.8 Hz)，7.01(2H， d，J=8.8 Hz) 分別為 B環(huán) 2′、 6′和 3′、5′位質(zhì)子信號; δ6.49(1H， d，J=3.8 Hz)， 6.58(1H，d，J=3.6 Hz)分別為6、8位質(zhì)子信號;δ6.37(1H，s)為C環(huán)上3位質(zhì)子信號，3.93(3H，s)為甲氧基質(zhì)子信號。13C-NMR(75 MHz，CDCl3)譜中給出16個碳信號，其中δ182.4為1個羰基碳信號;δ55.8為1個甲氧基碳信號。其碳譜數(shù)據(jù)歸屬見表1。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻[5]報道的4′，5-二羥基-7-甲氧基黃酮譜學(xué)數(shù)據(jù)一致。鑒定其為4′，5-二羥基-7-甲氧基黃酮(4′， 5-dihydroxy-7-methoxyflavone)，為首次從迷迭香屬植物中分離得到。

3.3 化合物3

白 色 粉 末 (三 氯 甲 烷)。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)顯示，δ0.80(3H，s)，0.81(3H，d，J=6.3 Hz)， 0.94(3H， d，J=6.3 Hz)， 0.95(3H， s)，0.99(3H，s)，1.00(3H，s)，1.11(3H，s) 給出7個甲基信號;δ5.14(1H，t，J=3.2 Hz)為雙鍵上的1個質(zhì)子信號，推測為烏蘇烷型三萜類化合物。結(jié)合13C-NMR(150 MHz，CDCl3)譜，δ69.9為五環(huán)三萜類化合物的28位羥甲基碳信號，δ125.0，138.7為SP2雜化碳上的信號，綜上推測為烏索醇三萜;其余碳譜信號如下δ:38.7(C-1)，27.2(C-2)，79.0(C-3)， 38.7(C-4)， 55.1(C-5)， 18.3(C-6)， 32.8(C-7)， 39.4(C-8)， 47.6(C-9)， 45.3(C-10)， 23.3(C-11)， 42.0(C-14)， 26.0(C-15)， 23.3(C-16)， 36.8(C-17)， 54.0(C-18)， 39.3(C-19)， 39.4(C-20)，35.1(C-21)， 30.6(C-22)， 28.1(C-23)， 15.6(C-24)， 15.7(C-25)， 16.7(C-26)， 23.3(C-27)， 17.3(C-29)，21.3(C-30)。以上譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻[6]報道的熊果醇譜學(xué)數(shù)據(jù)一致，鑒定其為熊果醇(uvaol)。

3.4 化合物4

黃色針晶(甲醇)，1H-NMR(300 MHz， DMSO-d6) 譜中，δ3.81(3H，s)，3.86(3H，s)，3.87(3H，s)為3組甲氧基質(zhì)子信號;6.36(1H，d，J=2.0 Hz)，6.77(1H，d，J=2.0 Hz) 為5，7二氧取代黃酮6，8位質(zhì)子信號;δ6.96(1H，d，J=8.4 Hz)， 7.62(1H， dd，J=8.5， 1.8 Hz)， 7.67(1H，d，J=1.8 Hz)為黃酮B環(huán)AMX偶合系統(tǒng)的質(zhì)子信號;δ9.98(1H，s)，12.7(1H，s)分別為3、5位羥基質(zhì)子信號。13C-NMR(75 MHz，DMSO-d6)譜中，δ178.8為1個羰基碳信號，δ56.0，56.3，59.9為3個甲氧基碳信號，其碳譜數(shù)據(jù)歸屬見表1。該化合物的譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻[7]報道基本一致，鑒定其為 3， 5-二羥基-7， 3′， 4′三甲氧基黃酮(3， 5-dihydroxy-7， 3′， 4′-trimethoxyflavone)， 為首次從迷迭香屬植物中分離得到。

表1 化合物2、4、5、7的13 C-NMR化學(xué)位移數(shù)據(jù)

3.5 化合物5

黃色針晶 (三氯甲烷)，1H-NMR(300 MHz，CDCl3)譜中，δ12.91(1H，s)為A環(huán)5-OH質(zhì)子信號; δ7.87(2H， d，J=8.9 Hz)， 7.04(2H， d，J=8.9 Hz)為B環(huán)上AA′BB′偶合系統(tǒng)質(zhì)子信號;δ6.52(1H，s)，6.61(1H，s)為A環(huán)6、8位質(zhì)子信號;δ3.95(3H，s)，3.91(3H，s)為2個甲氧基質(zhì)子信號;δ2.14(3H，s)為甲基質(zhì)子信號。13C-NMR(150 MHz，CDCl3) 譜中， δ55.9，55.5為兩個甲氧基信號，δ7.3為甲基信號，其碳譜數(shù)據(jù)歸屬見表1。該化合物的譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻[8]報道基本一致，鑒定其為5-羥基-4′，7-二甲氧基-6-甲基黃酮(5-hydroxy-4′， 7-dimethoxy-6-methylflavone)， 為首次從迷迭香屬植物中分離得到。

3.6 化合物6

黃色針晶(甲醇)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)為陽性，Molisch反應(yīng)呈陰性。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6) 譜中， δ6.20(1H， d，J=2.0 Hz)，6.40(1H， d，J=2.0 Hz)為黃酮B環(huán)6、8位質(zhì)子信號;δ6.87(1H，d，J=8.5 Hz)， 7.53(1H， dd，J=8.5， 2.2 Hz)， 7.67(1H，d，J=2.2 Hz)為B環(huán)AMX偶合系統(tǒng)質(zhì)子信號;9.30(1H，s)，10.76(1H，s)，12.48(1H，s) 分別為3、7和5位-OH質(zhì)子信號。該化合物的譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻[9]報道的槲皮素完全一致，與槲皮素對照品共薄層檢測，在3種溶劑系統(tǒng)下展開，其薄層行為完全一致，鑒定該化合物為槲皮素(quercetin)。

3.7 化合物7

黃色粉末(甲醇)，鹽酸-鎂粉反應(yīng)和Molisch反應(yīng)均為陽性，薄層酸水解檢測含有葡萄糖和鼠李糖。1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6) 譜中， δ6.18(1H， d，J=1.6 Hz)， 6.38(1H， d，J=1.6 Hz)為5，7-二氧取代黃酮 A環(huán) 6、8位質(zhì)子信號;δ6.87(1H， d，J=8.5 Hz)， 7.66(1H， dd，J=8.5，2.2 Hz)，7.52(1H，d，J=2.2 Hz) 為黃酮B環(huán)AMX偶合系統(tǒng)質(zhì)子信號;δ5.36(1H，d，J=7.7 Hz)為糖的端基質(zhì)子信號;12.68(1H，s)為A環(huán)5-OH質(zhì)子信號。13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)譜中，給出27個碳信號， 其中 δ101.2(C-1″)， 74.1(C-2″)，76.5(C-3″)， 70.4(C-4″)， 76.0(C-5″)， 67.1(C-6″) 為一組葡萄糖碳信號; δ100.9(C-1″′)， 70.6(C-2″′)，70.1(C-3″′)， 71.9(C-4″′)， 68.3(C-5″′)， 17.9(C-6″′)為一組鼠李糖碳信號。其余苷元部分碳譜數(shù)據(jù)歸屬見表1。該化合物的譜學(xué)數(shù)據(jù)與文獻[10]報道完全一致，鑒定該化合物為蘆丁(rutin)。

3.8 化合物8

無色針晶(甲醇)，溴甲酚綠反應(yīng)呈陽性，提示結(jié)構(gòu)中有羧基存在;FeCl3反應(yīng)呈陽性，提示結(jié)構(gòu)中有酚羥基存在，與對照品阿魏酸共薄層檢測，在3種溶劑系統(tǒng)下展開，其薄層行為完全一致，鑒定該化合物為阿魏酸(ferulic acid)。

[1]吳修仁.潮汕生物資源植物志略[M].廣州:中山大學(xué)出版社，1997:281.

[2]屠鵬飛，徐占輝.新型資源植物迷迭香的化學(xué)成分及其應(yīng)用[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1998，10(3):62-68.

[3]韓宏星，宋志星，屠鵬飛.迷迭香水溶性成分研究[J].中草藥，2001，32(10):877-878.

[4]王文中，王穎.迷迭香天然高效抗氧化劑的研究及其應(yīng)用[J].中國食品添加劑，1998，(4):26-28.

[5]于德泉，楊峻山.分析化學(xué)手冊(第二版，第7分冊)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2002:817-818.

[6]龔運淮.天然有機化合物13C核磁共振化學(xué)位移[M].昆明:云南科學(xué)技術(shù)出版社，1986.

[7]Eberhard K， Peter W.S.Methylation of Dihydroquercetin Acetates:Synthesis of 5-O-Methyldihydro quercetin[J].Journal of Natural Products， 2003， 66(12):1562-1566.

[8]Susana I.P， Carmen S.R.F， Carlos PN， et al.Chemical composition of the epicuticular wax from the fruits of Eucalyptus globulus[J].Phytochemical Analysis， 2005， 16(5):364-369.

[9]丁杏苞，姜巖青，仲英，等.山楂葉化學(xué)成分的研究[J].中國中藥雜志，1990，15(5):39-41.

[10]孫麗仁，何明珍，馮育林，等.山蠟梅葉的化學(xué)成分研究[J].中草藥，2009，40(8):1214-1216.

Isolation and Identification of Chemical Constituents from Rosmarinus Officinalis L.

WANG Hui1，2，GAO Hui-yuan1，ZHANG Zhen-qiu2，WU Li-jun1
(1.School of traditional Chinese Materia Medica，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang110016，China;2.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian116600，China)

Objective:To isolate the chemical constituents fromRosmarinus officinalisL.and identify their structures.Methods:The compoundswere isolated by chromatography on silica and gel column，and their structures were identified by the physico-chemical properties and NMR spectral analysis.Results:Eight compounds were obtained and identified as β-sitosterol(1)，4′，5-dihydroxy-7-methoxyflavone(2)，uvaol(3)，3，5-dihydroxy-7，3′，4′-trimethoxyflavone(4)，5-hydroxy-4′，7-dimethoxy-6-methylflavone(5)，quercetin(6)，rutin(7)，ferulic acid(8)，respectively.Conclusion:Compounds 2，4 and 5 were obtained from this genus for the first time.

Rosmarinus officinalisL.;Chemical constituents;Structural identification

*吳立軍，E-mail:wulijun-111@hotmail.com

2010-07-08)