陳聰慧，康廷國(guó)

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600）

梔子金花丸中金銀花的顯微定量研究

陳聰慧，康廷國(guó)*

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧 大連 116600）

目的：采用均勻設(shè)計(jì)方法優(yōu)選金銀花顯微定量法的優(yōu)化條件，對(duì)中成藥梔子金花丸中的金銀花進(jìn)行含量測(cè)定。方法：以被測(cè)物自身代替參比物，采用容量分析法配合顯微定量法測(cè)定金銀花的含量。結(jié)果：金銀花含量大多符合 《中國(guó)藥典》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論：用此方法測(cè)定金銀花的含量簡(jiǎn)單、快捷、可靠，可為梔子金花丸的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

梔子金花丸；金銀花；均勻設(shè)計(jì)法；顯微定量法

梔子金花丸為苦寒之藥，用于肺胃熱盛，口舌生瘡，牙齦腫痛，目赤眩暈，咽喉腫痛。由梔子、金銀花、黃芩、黃柏、大黃、黃連、知母、天花粉8味中藥組成。其中金銀花為忍冬科植物忍冬Lonicera japonicaThunb.的干燥花蕾或帶初開的花，主產(chǎn)于山東、河南，全國(guó)大部地區(qū)均產(chǎn)，自古被譽(yù)為清熱解毒的良藥。它性寒，味甘，具有清熱解毒，疏散風(fēng)熱的功能。用于癰腫疔瘡，喉痹，丹毒，熱毒血痢，風(fēng)熱感冒，溫病發(fā)熱[1]。金銀花粉末中厚壁非腺毛，單細(xì)胞，直徑14～37μm，表面有疣狀突起。金銀花粉末中的非腺毛的顯微特征明顯，不僅具有生物學(xué)穩(wěn)定的特性，而且數(shù)量眾多，易于觀察計(jì)數(shù)[2]。本實(shí)驗(yàn)采用容量分析方法[3]測(cè)定了金銀花中非腺毛的顯微特征常數(shù)，由于金銀花的非腺毛在梔子金花丸的顯微特征中具有專屬性，因此采用顯微定量法對(duì)梔子金花丸中的金銀花進(jìn)行百分含量的測(cè)定，從而為梔子金花丸的質(zhì)量控制提供了依據(jù)[4-6]。筆者采用顯微定量法，將顯微攝影、計(jì)算機(jī)圖像處理和數(shù)據(jù)分析相結(jié)合，對(duì)梔子金花丸中的金銀花含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明此法方便、快捷、耗資少。

1 儀器與材料

1.1 儀器

OLYMPUS BX-50生物顯微鏡；OLYMPUSDP-10顯微鏡數(shù)碼相機(jī)；島津 AY220電子分析天平；Agilent1100高效液相色譜儀；微量移液器（WKY型－球晶生化試劑儀器有限公司）；FW80高速萬能粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2 試劑

梔子金花丸（北京同仁堂），金銀花，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定教研室翟延君教授鑒定為正品。水合氯醛，稀甘油。

2 方法與結(jié)果

2.1 金銀花中非腺毛顯微特征常數(shù)測(cè)定優(yōu)化條件選擇

影響樣品混懸效果的因素主要有樣品重量、樣品的粉碎粒度、混懸劑的用量。考慮到各因素的考察水平有所不同，故本實(shí)驗(yàn)采用3因素6水平均勻設(shè)計(jì)法考察顯微定量法的優(yōu)化條件[7]，具體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

表1 金銀花中非腺毛顯微特征常數(shù)測(cè)定均勻設(shè)計(jì)方案 U6（63）

取金銀花樣品粉碎，分別過80目和100目篩。精密穩(wěn)定50，60，70，80，90，100 mg共6份，用水合氯醛試液多次水飛，移入25 mL量瓶中，按均勻設(shè)計(jì)表加入相應(yīng)甘油量，最后用水合氯醛液定容。充分搖勻后，精密吸取0.02 mL進(jìn)行顯微裝片，每份溶液平行裝片50張，于顯微鏡下觀察非腺毛并計(jì)數(shù)。將所得的結(jié)果隨機(jī)化分為5組，分別計(jì)算5組平均值的RSD。以每份樣品平均值的RSD為考察指標(biāo)，結(jié)果見表2。

表2 金銀花中非腺毛顯微特征常數(shù)測(cè)定均勻設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

通過SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件得出均勻設(shè)計(jì)結(jié)果：Y＝10.411－0.091X1，r＝0.931，F(xiàn)＝53.562，Ymin＝1.311（即1.31%），Y為 RSD（%），X1為樣品重量，X2為粉碎粒度，X3為加入甘油量。

X1項(xiàng)為負(fù)號(hào)，X1應(yīng)取最大值；由于X2、X3沒有進(jìn)入方程，說明X2、X3對(duì)實(shí)驗(yàn)影響不大，可根據(jù)實(shí)際情況選擇條件。

取優(yōu)化條件為樣品稱樣量100 mg，粉碎過100目篩，加入甘油10 mL。對(duì)優(yōu)化結(jié)果的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明各份樣品的變異系數(shù)均與優(yōu)化條件給出的最小變異系數(shù)（1.73%）接近，說明由SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件給出的優(yōu)化條件是科學(xué)、準(zhǔn)確的，結(jié)果見表3。

表3 金銀花中非腺毛顯微特征常數(shù)測(cè)定均勻設(shè)計(jì)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

2.2 對(duì)照樣品金銀花中非腺毛顯微特征常數(shù)值測(cè)定

精密稱定金銀花藥材粉末，按照均勻優(yōu)化條件配制，水合氯醛多次水飛，分別定容于25 mL量瓶中，精密吸取20μL溶液，分別平行裝片50張，觀察非腺毛，計(jì)數(shù)，取平均值，按照公式1計(jì)算非腺毛顯微特征常數(shù)值，結(jié)果見表4。

公式1：顯微特征常數(shù)P＝（X×V）/（V′×W）

W－藥材重量（mg，按干燥品計(jì)，V－定量藥材混懸液總體積（mL），P－定量藥材顯微特征常數(shù)（個(gè)·mg－1），V′－蓋玻片下藥材混懸液體積（mL），X－每片蓋玻片下藥材顯微特征數(shù)。

表4 各樣品非腺毛顯微特征常數(shù)測(cè)定結(jié)果

2.3 梔子金花丸中金銀花的含量測(cè)定

將成藥小心粉碎至完全過100目篩，在烘箱80℃干燥5 h。精密稱定干燥后的梔子金花丸粉末600 mg，按實(shí)驗(yàn)方法定容至25 mL量瓶中，精密吸取0.02 mL裝片，平行裝50張片，記錄非腺毛顯微特征數(shù)，按照公式2計(jì)算金銀花百分含量，結(jié)果見表5。

公式2：樣品含量% ＝（X×V）/（V′×W×P）×100%

P－定量藥材顯微特征常數(shù)（個(gè)·mg－1），X－每片蓋玻片下藥材顯微特征常數(shù)，V－定量藥材混懸液總體積（mL），V′－蓋玻片下藥材混懸液體積（mL），W－藥材重量（mg，按干燥品計(jì)）

表5 梔子金花丸中金銀花的含量測(cè)定結(jié)果

3 討論與結(jié)論

梔子金花丸中金銀花的含量測(cè)定以金銀花非腺毛為特征物計(jì)數(shù)，結(jié)果表明所選特征專屬性強(qiáng)，該法簡(jiǎn)單可靠，對(duì)含有金銀花的中成藥質(zhì)量控制有一定的推廣使用價(jià)值。

本實(shí)驗(yàn)采用容量分析法測(cè)定金銀花顯微特征常數(shù)，定容和制片很關(guān)鍵，用微量移液器裝片前槍頭要潤(rùn)洗3次，吸取前要使混懸液均勻分布，以減少誤差。蓋蓋玻片時(shí)要將載玻片上的溶液全部覆蓋，避免外溢現(xiàn)象[8-9]。

金銀花由于粉碎后過100目篩，有的非腺毛較完整，有的已破碎。觀察時(shí)對(duì)完整的計(jì)為一個(gè)單位；對(duì)于破碎的非腺毛，按毛尖數(shù)計(jì)數(shù)。

本文采用均勻設(shè)計(jì)方法對(duì)金銀花顯微定量法的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化，首次對(duì)梔子金花丸中的金銀花通過顯微特征非腺毛做了定量分析，檢測(cè)結(jié)果表明該產(chǎn)品中金銀花含量符合 《中國(guó)藥典》規(guī)定。建議《中國(guó)藥典》在藥材項(xiàng)下增加顯微常數(shù)測(cè)定項(xiàng)目，豐富藥材品質(zhì)評(píng)價(jià)的內(nèi)容；同時(shí)將含有這些藥材（原粉入藥）的中成藥項(xiàng)下增加顯微定量項(xiàng)目[10]。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：205-206.

[2]康廷國(guó).中藥鑒定學(xué)[M].北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2007：295.

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[5]潘國(guó)良，柴清軍.顯微定量法鑒別人參與西洋參[J].中國(guó)藥業(yè)，2002，11（7）：52.

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[9]苑冬敏，劉揚(yáng)，欒曉靜，等.黃柏的顯微定量研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2007，25（5）：964-966.

[10]劉歆韻，劉麗，李斌，等.白芍顯微特征常數(shù)與化學(xué)成分相關(guān)性研究[J].中藥材，2010，33（4）：559-561.

Study on Honeysuckle Contents in Zhizi Jinhua Pills by the Microscopic Quantitative Method

CHEN Cong-hui，KANG Ting-guo

（Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian116600，China）

Objective：Determine the content of honeysuckle in Chinesemedicine zhizi jinhua pills，using the optimal conditions of the microscopic quantitative method of honeysuckle by uniform design.Methods：Using the volumetric analysiswith themicroscopic quantitativemethod determinate the content of honeysuckle，measured object itself instead of the reference material.Results：The honeysuckle content reach the standard of Chinese Pharmacopoiea.Conclusion：Themethod determining the contentof honeysuckle is simple，quick，reliable for quality control of zhizi jinhua pills.

Zhizi jinhua pills；Honeysuckle；Microscopic quantitativemethod

*康廷國(guó)，E-mail：kangtg＠lnutcm.edu.cn

2011-05-03）