陳新武

（河北省筑始縣環(huán)保局）

稻瘟病菌株接種劑的制作及致病效果研究

陳新武

（河北省筑始縣環(huán)保局）

本文闡述了稻瘟病菌株接種劑的制作及胬病效果研究。

菌株；溫度；生長(zhǎng)量；胬病效果

一、菌株最佳培養(yǎng)基確定：

將病原菌株分別接種于PDA培養(yǎng)基、PSA培養(yǎng)基、稻瘟病分離培養(yǎng)基，測(cè)定并比較菌絲體干重，確定最佳培養(yǎng)基。

不同培養(yǎng)基條件下稻瘟病菌絲體干重測(cè)定結(jié)果(單位：g／250ml)

表格1

最佳培養(yǎng)基如圖表1所示，三種培養(yǎng)基中，最佳的培養(yǎng)基是PSA培養(yǎng)基。三種培養(yǎng)基在相同的培養(yǎng)條件下，稻瘟菌在PSA培養(yǎng)基上產(chǎn)生的菌絲體最多，達(dá)到5.2874g／250ml。說(shuō)明稻瘟病原菌的生長(zhǎng)，需要含有糖類的物質(zhì)為其提供碳元素，但如果加入一些其它的營(yíng)養(yǎng)元素，可以促進(jìn)稻瘟病原菌的生長(zhǎng)

因?yàn)榈疚敛》蛛x培養(yǎng)基中只能夠?yàn)榫晏荚?，而馬鈴薯中營(yíng)養(yǎng)豐富，不僅含有淀粉，蛋白質(zhì)，脂肪等提供碳源，氮源的物質(zhì)，而且VB、VC、鈣、鎂、鉀等微量元素也都應(yīng)有盡有，能充分促進(jìn)菌株生長(zhǎng)，所以分離培養(yǎng)基上的稻瘟病原菌生長(zhǎng)相對(duì)緩慢，菌絲體干重測(cè)定結(jié)果最少。

二、最佳培養(yǎng)溫度的確定：

利用PSA培養(yǎng)基，對(duì)稻瘟病菌株進(jìn)行培養(yǎng)，分別于20?、14?、28?、30?、32?，培養(yǎng)6d測(cè)定并比較菌絲體干重，確定最佳培養(yǎng)溫度。

不同培養(yǎng)溫度條件下稻瘟病菌絲體干重測(cè)定結(jié)果(單位：g／250ml)

表格2

由圖表2可知，在不同溫度下病原生長(zhǎng)明顯不同。在24?和28?對(duì)應(yīng)著試驗(yàn)數(shù)據(jù)中最大的兩個(gè)數(shù)值，24?之前，溫度越高，對(duì)稻瘟病原菌菌絲體的生長(zhǎng)越有利；28?之后，在越高的溫度下培養(yǎng)病原菌，其菌絲體的生長(zhǎng)越不好。所以對(duì)稻瘟病原菌的培養(yǎng)，適宜的溫度范圍是 24-28?

三、病原菌株生長(zhǎng)量測(cè)定：

稻瘟病菌絲體干重測(cè)定結(jié)果(單位：g／ 250ml)

表格3

由此表3可知，稻瘟菌培養(yǎng)到第7天時(shí)，所對(duì)應(yīng)的菌絲體的干重的數(shù)值是最大的。在培養(yǎng)的前3天，稻瘟菌株處于適應(yīng)期，菌體增殖的數(shù)量很小或者不增加。第3天過(guò)后。菌體增殖進(jìn)入了對(duì)數(shù)期，菌絲體干重急劇增加，所以此期間菌絲體的干重變化很大。第7天后，由于培養(yǎng)基內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的逐漸減少和有害代謝產(chǎn)物的不斷積累，菌體的繁殖進(jìn)入了穩(wěn)定期間。所以菌絲體的干重不再增加，甚至還少量減少。所以為了獲得大量菌絲體來(lái)產(chǎn)生分生孢子，而進(jìn)行的稻瘟菌株的培養(yǎng)的培養(yǎng)時(shí)間最好在7-9天之間

四、接種劑的制作及致病效果研究

1、接種劑的制備：

制備了液體接種劑

純菌接種劑為配備成的稻瘟病原菌孢子濃度為2．17 x 105個(gè)／ml的孢子懸浮液

混菌接種劑為配備成的稻瘟病原菌孢子濃度為2．25 x 105個(gè)／ml的孢子懸浮液

2、接種試驗(yàn)效果：

使用純菌制成的液體接種劑對(duì) 10個(gè)水稻品種進(jìn)行感病接種。東農(nóng) 415和牡丹江22號(hào)的抗性類型都為R(抗性)，但這兩個(gè)水稻品種噴霧接種后，發(fā)病的平均病情分別為1．3級(jí)和 1．1級(jí)?？剐灶愋捅慌袛酁镠R(高抗)。其余的水稻品種的抗性類型根據(jù)平均病情判斷，沒(méi)有發(fā)生變化。此接種劑對(duì)水稻品種抗性的鑒定符合程度達(dá)到了80%，而且平均病情1．3級(jí)的判定可能還包含著一定的觀察誤差，符合程度可能還要高一些。說(shuō)明了液體接種劑的有效性與準(zhǔn)確性。所以，此液體接種劑可以應(yīng)用于水稻感病的試驗(yàn)中。

五、討論：

1、道瘟病菌的分離：

稻瘟病菌的分離通常使用單孢分離方法。因?yàn)榈疚敛【谂囵B(yǎng)基上生長(zhǎng)緩慢，所以雜菌容易占優(yōu)勢(shì)。從病斑上進(jìn)行組織分離特別困難，而在病斑上形成孢子后再分離孢子則比較容易。在采集到葉，穗等罹病標(biāo)本時(shí)，為不使葉片打卷并盡快干燥，采集后要放在冰箱中保存，并要盡快分離。在高溫時(shí)雜菌將因?yàn)楦邷馗邼穸罅糠敝?，致使分離不易成功。

2、稻瘟病原菌產(chǎn)孢培養(yǎng)：

在稻瘟菌感病等實(shí)驗(yàn)中都需要其產(chǎn)生大量的孢子，利用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基，孢子形成數(shù)量少，所以一般稻瘟菌產(chǎn)孢都使用燕麥培養(yǎng)基，置于光照下培養(yǎng)24h是為了使孢子的成熟度整齊一致。如果孢子的成熟度不同的話，所形成的病斑中易混生R—S型從而難以判斷。但從多年的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)得知，對(duì)于一般的病菌生理小種鑒定和水稻品種抗性分析，用米糠培養(yǎng)基培養(yǎng)的孢子量就足以待用。多年養(yǎng)的菌株范圍很廣，一些在傳統(tǒng)大麥粒培養(yǎng)基上產(chǎn)孢效果很差的菌株，在米糠培養(yǎng)基上也可得到滿意的產(chǎn)孢效果。與燕麥片培養(yǎng)基相比，在培養(yǎng)過(guò)程中米糠培養(yǎng)基較不易被污染，而且米糠價(jià)格低，培養(yǎng)基制作過(guò)程簡(jiǎn)單。因此，米糠培養(yǎng)基是實(shí)驗(yàn)室條件下大量培養(yǎng)稻瘟菌分生孢子的首選培養(yǎng)基。

3、噴霧接種注意事項(xiàng)：

有些菌株產(chǎn)生孢子少，達(dá)不到接種孢子的最少要求濃度時(shí)，就按最少濃度接種，但要求標(biāo)明記錄。

當(dāng)恒溫恒濕接種設(shè)備條件受限制時(shí)，可以改在自然和溫室條件下進(jìn)行，為求試驗(yàn)準(zhǔn)確，要求每次試驗(yàn)前后的條件一致。

另外接種方式還可以選用離體接種，這種接種方法操作簡(jiǎn)便，且接種效果與活體植株接種基本一致，因此可代替常規(guī)活體植株接種，該方法具有占用空間少，可在田間隨時(shí)取稻葉而不影響其稻苗的正常生長(zhǎng)，操作簡(jiǎn)便，溫濕條件容易控制，可大批量、多次重復(fù)鑒定，特別是對(duì)穗瘟的鑒定，可對(duì)水稻抽穗期不一致的品種進(jìn)行分批采集接種，克服了在自然情況下，人工接種抽穗期不同而難以控制的問(wèn)題等優(yōu)點(diǎn)，是一種較理想的抗稻瘟病鑒定方法。

六、結(jié)論：

1、從發(fā)病組織及土壤中分離鑒定出14種真菌，初步了解了發(fā)病部位的種群結(jié)構(gòu)。其中稻瘟病原菌數(shù)量很多，明顯大于其他種類微生物。觀察了稻瘟病菌，青霉屬，毛霉屬，根霉屬，曲霉屬，小菌核屬，鐮刀菌屬等微生物的生物特性。

2、測(cè)得了稻瘟病原菌的最佳的培養(yǎng)溫度范圍是 24?-28?，最佳的培養(yǎng)時(shí)間段為7-9天這一稻瘟病原菌生長(zhǎng)穩(wěn)定期，從而可以通過(guò)培養(yǎng)最好地獲得了足夠的孢子來(lái)進(jìn)行稻瘟病菌的感病試驗(yàn)。

3、在相同的條件下，純菌的接種效果要好于混菌的接種效果。但相差不是非常大。純菌接種各類稻種的平均病情比混菌接種多 0．4-0．5，除少數(shù)幾個(gè)稻種。

4、對(duì)10個(gè)水稻品種進(jìn)行的抗性類型的鑒定中，液體接種劑使水稻的感病病情與水稻已知的抗病類型基本符合，說(shuō)明液體接種劑可以用于稻瘟病菌的致病試驗(yàn)。

研究方向：分子生物學(xué)

[1] 沈瑛，株培脝，袁筱萍．中國(guó)稻瘟病菌的遺傳多樣性．植物病理學(xué)報(bào)，1993，23(4)：309-313．

[2) 余脣濤．稻瘟病生理小種田間監(jiān)測(cè)及防治策略．湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003，6：16-18．

[3] 孫漱元，孫國(guó)昌．我國(guó)稻瘟病研究的現(xiàn)狀和展望．植保技術(shù)與推廣，1996，16(3)：39-40．

[4] 李憲，夏景玉．稻瘟病菌生理小種和品種抗性的研究．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，24(2)167-169．

TU987

A

1674-3954（2011）02-0192-01