段瓊芬,李 欽,林 青,段小花,楊 蓮,張重權(quán),馬李一,王有瓊

1中國林業(yè)科學(xué)研究院資源昆蟲研究所,昆明 650224;2云南中醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室,昆明 650200;3云南省中醫(yī)中藥研究院,昆明 650223

辣木油對家兔皮膚創(chuàng)傷的保護作用

段瓊芬1＊,李 欽3,林 青2,段小花2,楊 蓮2,張重權(quán)1,馬李一1,王有瓊1

1中國林業(yè)科學(xué)研究院資源昆蟲研究所,昆明 650224;2云南中醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室,昆明 650200;3云南省中醫(yī)中藥研究院,昆明 650223

觀察辣木油對家兔皮膚創(chuàng)傷愈合的影響。取健康大耳白兔 18只,隨機分為空白對照組、京萬紅組和辣木油組,將背部左右側(cè)各切取直徑 2.35 cm大小的皮膚,深及皮下筋膜,造成創(chuàng)傷模型,每天涂藥 1次,測定創(chuàng)面面積,計算愈合率和愈合時間;于術(shù)后的第 3 d、7 d、10 d,切取涂藥部位和空白未涂藥部位皮膚全層,制片,作HE染色后鏡下觀察創(chuàng)面組織形態(tài)學(xué)的改變并進行皮膚病變程度的分級。結(jié)果顯示辣木油可加速創(chuàng)面愈合,縮短愈合時,減輕組織的病理變化。提示了辣木油能夠促進家兔皮膚創(chuàng)傷的愈合。

辣木油;家兔;皮膚;創(chuàng)面;愈合

Abstract:To investigate the protection effect of external use ofMoringa oil on skin injury of rabbit,18 rabbitswere randomly divided into 3 groups as negative control,Jinwanhong oil treatment,and Moringa oil treatment.A piece of skin deep to subcutaneous fascia with a diameter of 2.35cm was cut on both side of the back of the rabbits to construct the wound model,then the wound were treated with the oil everyday,and the wound area was measured to deter mine the healing rat and the healing time;thewhole der ma of thewound skinwas cut after 3 d,7 d,and 10 d,dyed byHE and observed with microscope to deter mine the corresponding pathogenic degree.The results showed that external use ofMoringa oil can accelerate wound healing,shorten healing time,and alleviating pathogenic changeswhich remind thatMoringa oil can promote rabbit skin wounds restoration and healing.

Key words:Moringa oil;rabbit;skin;wound;healing

辣木油是從辣木科 (Moringaceae)辣木屬(MoringaAdans.)辣木 (Moringa oleiferaLam.)[1]種子中提取出來的珍貴植物油,具有擴張血管、抗真菌、抗發(fā)炎等多種功效[2-5],廣泛應(yīng)用在食品、化妝品和醫(yī)藥等方面。實際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)的,用辣木油外擦可以治療人體皮膚損傷,縮短創(chuàng)面的愈合時間,減輕傷口感染,消腫止痛,但未檢索到相關(guān)的研究報道。因此,本試驗選用與臨床創(chuàng)傷修復(fù)和愈合過程基本一致的家兔背部皮膚全層缺損傷模型[6],就辣木油對

1 材料與方法

1.1 動物

新西蘭大耳白兔 18只,雌雄各半,體重 2.0～2.5 kg,購自四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所,動物質(zhì)量合格證編號:SCXK(川)2004-18。

1.2 藥品與試劑

辣木油試樣的制備:取云南元江產(chǎn)辣木籽(seeds ofMoringa oleiferaLam)2500 g,經(jīng)挑選除雜后用小錘破殼取仁,用自制小型液壓機壓榨得油與油餅,將油餅重復(fù)壓榨 2次后收存。合并粗油,過濾除去殘渣,得深棕色清亮的粗制辣木油將粗制辣木油經(jīng)脫色處理得供試油樣,油樣質(zhì)量為 500 g,淺黃促進家兔皮膚創(chuàng)傷愈合的作用進行了研究。色,凝固點 16℃,密度 (24℃)0.9223 mg/mL;京萬紅膏:天津達仁堂達二藥業(yè)有限公司生產(chǎn),批號211516;碘伏:昆明天亙消毒制品有限公司生產(chǎn),批號20070119。

1.3 試驗方法

1.3.1 分組

將 18只大耳白兔隨機分成 3組,分別是空白對照組、京萬紅組和辣木油組,每組 6只,單籠常規(guī)飼養(yǎng)。

1.3.2 造模

方法[7],用 8%硫化鈉將家兔背部脫毛,暴露出約 12cm×10 cm的皮膚,2 d后用 10%水合氯醛麻醉并用碘酒、酒精消毒,避開肩胛骨和髂骨,在距脊柱 2 cm的左右兩側(cè),由前到后分別做左1、左 2、右 1、右 2共 4個直徑約為 2.35 cm的圓形創(chuàng)面,切除創(chuàng)面全層皮膚至淺筋膜組織。

1.3.3 給藥

空白組按 0.3 g/wound給予醫(yī)用凡士林;京萬紅組按 0.3 g/wound給予京萬紅軟膏;辣木油組按0.3 g/wound給予辣木油。自手術(shù)日起,按以上劑量將藥物均勻涂于創(chuàng)面,用消毒凡士林油紗布覆蓋并用無菌干紗布包扎,以后每天換藥 1次,直至創(chuàng)面愈合。

1.3.4 創(chuàng)面愈合情況觀察

參考文獻方法[8],肉眼觀察創(chuàng)面的愈合情況,觀察指標為:滲出物量的多少、創(chuàng)緣皮膚收縮、結(jié)痂和皮膚顏色的變化。

1.3.5 創(chuàng)面愈合率及愈合時間的測定

在術(shù)后的第 3、6、10、13 d,采用描計稱重法測量面積,即用透明薄膜覆蓋創(chuàng)面,沿創(chuàng)面邊緣作標記,畫出所需面積范圍并剪下,用分度值為 0.1 mg的分析天平稱質(zhì)量并以質(zhì)量代替面積,按創(chuàng)面愈合率 =(原始創(chuàng)面面積 -未愈合創(chuàng)面面積)/原始創(chuàng)面面積,計算創(chuàng)面愈合率。以 95%的創(chuàng)面愈合率為愈合時間的標準,記錄每個創(chuàng)面的愈合時間。

1.3.6 創(chuàng)傷組織病變程度分級檢驗

參考文獻方法[9]進行分級。組織切片方法:于術(shù)后的第 3、7、10 d,切取創(chuàng)面組織,經(jīng) 10%中性福爾馬林固定,脫水、包埋制成石蠟切片,切片厚度為20μm,作 HE染色。鏡下病變程度分級:顯微鏡下觀察切片的病理學(xué)改變情況,將病變程度分為 4級,記為:–、+、++、+++,其中“–”為表皮再生 ＞75%,其余創(chuàng)面被新生的肉芽組織所修復(fù),少量炎細胞浸潤,可見較多膠原纖維;“+”為表皮再生 50%～75%,可見大量肉芽組織,但肉芽組織尚未將創(chuàng)面填平,較多炎細胞浸潤,無壞死,可見少量膠原纖維;“++”為表皮再生 25%～49%,可見較多肉芽組織,大量炎細胞浸潤,少量出血,無壞死,偶見少量膠原纖維;“+++”為表皮再生 ＜25%,伴大量出血、壞死,甚至化膿,未見肉芽組織及膠原纖維。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用 SPSS13.0統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據(jù)進行單因素方差分析以及 Dunnet-t兩兩比較,對等級數(shù)據(jù)進行 Ridit檢驗,P＜0.05時為差異顯著;P＜0.01時為差異非常顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 家兔皮膚創(chuàng)面的愈合情況

肉眼觀察到各組動物在術(shù)后的第 1 d和第 2 d,所有動物的創(chuàng)面基本上都有滲出液,傷口未開始愈合。術(shù)后第 3 d,空白組 6只動物中有 2只的滲出液基本消失,并開始結(jié)痂,其余創(chuàng)緣皮膚收縮不明顯,2只傷口開始出現(xiàn)少許紅暈;京萬紅組全部創(chuàng)面的滲出液基本消失,創(chuàng)緣皮膚開始收縮,并開始結(jié)痂,其中 5只傷口開始出現(xiàn)少許紅暈;辣木油組 6只動物中有 5只的滲出液基本消失,創(chuàng)緣皮膚開始收縮,并開始結(jié)痂,有 4只傷口開始出現(xiàn)少許紅暈。術(shù)后第7 d,空白組仍有 3只創(chuàng)面濕潤,有滲出物,傷口收縮不明顯,未見明顯的新生上皮;京萬紅組與辣木油組的創(chuàng)面干燥、無感染,創(chuàng)緣皮膚收縮明顯。術(shù)后第14 d,空白組創(chuàng)面修復(fù)欠佳,仍有 4只未愈合,京萬紅組創(chuàng)面基本愈合,辣木油組有 2只未愈合。

試驗結(jié)果顯示,辣木油能有效促進家兔皮膚創(chuàng)面的愈合,防止傷口感染,功效與京萬紅相似。

2.2 創(chuàng)面愈合率和創(chuàng)面愈合時間

在 1.3.2節(jié)所述的 4個創(chuàng)面中,其中“左 1”創(chuàng)面被用來測量面積,剩下的“左 2”等 3個創(chuàng)面則用于后面試驗所需的病理取材 (所有組均按此順序操作)。當(dāng)給藥劑量為 0.3 g/wound時,測得各組試驗動物的創(chuàng)面愈合率測的平均值、創(chuàng)面愈合時間的總平均值見表 1。

表1結(jié)果顯示,辣木油組家兔的創(chuàng)面愈合率在術(shù)后第 3 d時,與空白對照組相比差異非常顯著 (P＜0.01),表明辣木油對家兔皮膚創(chuàng)傷有非常明顯的修復(fù)作用,能夠促進創(chuàng)面的愈合,且見效比京萬紅快,但第 3 d后的影響不再有統(tǒng)計學(xué)意義,說明當(dāng)用辣木油來治療家兔皮膚的機械創(chuàng)傷時,應(yīng)在傷后前3 d內(nèi)抓緊治療。而京萬紅的藥效則比辣木油的緩慢一些,一直到了第 10 d時才有很明顯的效果 (P＜0.01),但與辣木油不同的是,從第 10 d后一直到第13 d,它對創(chuàng)面的愈合率仍然有影響,仍然能明顯地促進創(chuàng)口的愈合,總的效果顯得更好些。此外,若將表 1中各組動物總創(chuàng)面愈合時間的平均值進行成對比較的話,則可知道辣木油組和京萬紅組與空白對照組相比具有明顯的差異 (P=0.031;P=0.013),說明兩者均對家兔皮膚機械損傷的創(chuàng)面愈合具有明顯的促進作用,而辣木油組和京萬紅組之間的差異則無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.135),說明辣木油的藥效與京萬紅相近。

表1 辣木油對家兔皮膚創(chuàng)面愈合率和愈合時間的影響±s,n=6)Table 1 Effects ofmoringa oil on skin wound healing rate and healing t ime of rabbit(±s,n=6)

表1 辣木油對家兔皮膚創(chuàng)面愈合率和愈合時間的影響±s,n=6)Table 1 Effects ofmoringa oil on skin wound healing rate and healing t ime of rabbit(±s,n=6)

注:與空白組比較,＊P＜0.05,＊＊P＜0.01。＊P＜0.05,＊＊P＜0.01vscontrol group

組別Group創(chuàng)面愈合率Wound healing rate/% 創(chuàng)面愈合時間Wound healing(time/d)3 d 6 d 10 d 13 d空白對照組 control group 11.5±6.0 16.70±12.67 41.03±14.31 75.18±11.55 16.50±2.07京萬紅組 jingwanghong group 17.0±9.36 24.60±13.73 57.75±7.52＊＊ 91.13±4.74＊ 13.67±1.21＊辣木油組 moringa oil group 2.0±13.34＊＊ 26.14±8.21 48.02±10.27 79.79±14.10 14.83±1.47＊

2.3 創(chuàng)傷組織病變程度分級檢驗

鏡下觀察到施行手術(shù)以后,各組動物的傷口均有局部上皮缺損,形成深達真皮層的潰瘍,伴大量出血、壞死,甚至化膿,未見肉芽組織明顯增生,其中以空白組炎癥最重,化膿最為明顯 (空白組 control group、京萬紅組 jingwanghong group、辣木油組moringa oil group:圖 1 a～c)。術(shù)后第 7 d,空白組上皮細胞增生不明顯,出血較前明顯減少,仍可見大量壞死、膿腫及炎細胞浸潤,可見少量肉芽組織,未見膠原纖維 (空白組 control group圖 1 d);京萬紅組上皮細胞增生明顯,創(chuàng)面未見明顯出血、壞死,炎細胞浸潤較前減少,可見較多肉芽組織及少量膠原纖維(京萬紅組 jingwanghong group圖 1e);辣木油組上皮細胞增生明顯,創(chuàng)面仍有較多量的出血及少量壞死,炎細胞浸潤比空白組少比京萬紅組多,可見較多肉芽組織,偶見少量膠原纖維 (辣木油組 moringa oil group圖 1f)。術(shù)后第 10 d,空白組上皮細胞增生明顯,創(chuàng)面出血,壞死、膿腫較前減少,仍有大量炎細胞浸潤,可見少量肉芽組織和膠原纖維 (空白組 control group圖 1 g);京萬紅組創(chuàng)面修復(fù)明顯,少量炎細胞浸潤,從傷口底部及邊緣長出的肉芽組織已填平傷口,膠原纖維形成較多 (京萬紅組 jingwanghong group圖 1 h);辣木油組炎細胞浸潤比空白組少比京萬紅組多,從傷口底部及邊緣長出的肉芽組織已填平大部分傷口,膠原纖維形成較多 (辣木油組moringa oil group圖 1i)。

圖1 家免皮膚創(chuàng)面組織切片F(xiàn)ig.1 Slice of a skin injuries tissue of rabbit

將 6份病理試樣按照 1.4.6節(jié)皮膚組織病變程度的分級方法來分級,得出了不同時間內(nèi)不同級別的組織病變分級數(shù)據(jù)記錄于表 2中,分析各組病變程度在各個階段的統(tǒng)計學(xué)差異性,從病理學(xué)的角度來觀察創(chuàng)面愈合過程中的病理變化趨勢。

由表 2可見,隨著時間的推移,所有組別的動物都有減輕創(chuàng)傷病理變化的趨勢,京萬紅組及辣木油組在第 7天減輕病理變化的趨勢與空白組比較均有顯著性的區(qū)別 (P＜0.05),說明辣木油與京萬紅一樣,都具有抑制創(chuàng)傷組織病理變化的功效,而且在所有的試驗時間范圍內(nèi),兩者的藥效都沒有顯著性的區(qū)別 (P＞0.05),提示了辣木油可以用來治療皮膚創(chuàng)傷。

3 討論

創(chuàng)傷修復(fù)期表皮的生長、傷口的收縮對創(chuàng)面的愈合起著非常重要的作用,傷口收縮既能減少感染的機會,又能使機體用少量的組織就能修復(fù)傷口,同時,肉芽組織在創(chuàng)傷修復(fù)過程中起抗感染及保護創(chuàng)面、清除凝血塊及壞死組織、填補傷口等作用,因此,有無健康肉芽組織生長是傷口愈合的關(guān)鍵,另一方面,膠原纖維的增生也是影響創(chuàng)面愈合的重要因素[10]。

本試驗觀察到辣木油能促進傷口邊緣組織的收縮及創(chuàng)面壞死組織和異物的清除,促進創(chuàng)面炎性滲出物吸收,提高創(chuàng)面愈合率,加速創(chuàng)面愈合。同時鏡下觀察還發(fā)現(xiàn),在辣木油涂藥部位皮膚組織內(nèi),炎性細胞減少、上皮細胞增生明顯、肉芽組織與膠原纖維的生長均明顯優(yōu)于空白組未涂藥部位,統(tǒng)計學(xué)處理結(jié)果亦顯示出二者間有顯著性的差異,其上皮細胞增生、肉芽組織數(shù)量增多與膠原纖維數(shù)量增加呈正相關(guān)性,這說明辣木油的藥效作用與上皮細胞、肉芽組織和膠原纖維的參與密切相關(guān)。

實驗中,辣木油在第 3 d時對促進創(chuàng)面愈合具有很好的作用,能明顯降低創(chuàng)傷所致的皮膚炎性反應(yīng),對皮膚具有保護作用,但延時給藥不能明顯縮小創(chuàng)面的炎性面積,說明創(chuàng)傷在早期就可能已經(jīng)形成了某種致炎物質(zhì),并產(chǎn)生了損傷,延時給藥對已形成的損傷無治療作用,可能對已形成的致?lián)p傷物質(zhì)無明顯的拮抗作用,故給藥未能明顯降低炎性面積,提示了辣木油用于皮膚損傷的治療時應(yīng)及早給藥。

結(jié)論:辣木油外用能促進家兔皮膚創(chuàng)面的愈合,對家兔皮膚機械損傷有明顯的保護作用,其機制可能與促進傷口邊緣組織的收縮、創(chuàng)面壞死組織和異物的清除,加速肉芽組織的生長,膠原纖維的增生形成瘢痕,保護傷口,防止感染等有關(guān)。

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Protection Effect of Moringa Oil on Skin Injury of Rabbit

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1Institute of Resource Insects,Chinese Acade my of Forestry,Kun ming 650224,China;2Yunnan College of Traditional Chinese Medicine,Kun ming 650200,China;3Yunnan Institute of Chinese Medicine,Kun ming650223,China

R285.5

A

1001-6880(2011)01-0159-04

2009-07-10 接受日期:2010-07-06

“十一五”國家科技支撐計劃項目 (2006BAD18B04);林業(yè)公益性行業(yè)科研專項項目(200704007)

＊通訊作者 Tel:86-871-3860033;E-mail:qiongfend@hotmail.com