崔蓉，李佳川，張燕，曾勇，孟憲麗，賴先榮，張藝

點實驗室 中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 610075

研究表明，氧化應(yīng)激與2型糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，胰島β細胞功能受損，外周組織對胰島素的敏感性降低是聯(lián)系氧化應(yīng)激與糖尿病發(fā)病之間的重要紐帶［1］。中藥黃連“止消渴”，歷代本草醫(yī)籍多有記載，臨床療效確切。明《本草綱目》記載“治消渴，用酒蒸黃連”?；谇捌谝衙鞔_酒蒸黃連“止消渴”的藥效作用［2］，本實驗擬進一步觀察酒蒸黃連對2型糖尿病大鼠氧化應(yīng)激損傷的保護作用，從抗氧化應(yīng)激途徑探討酒蒸黃連對2型糖尿病的防治作用。

1 材料與方法

1.1 試驗藥物

酒蒸黃連浸膏，由成都中醫(yī)藥大學民族醫(yī)藥學院提供，批號:20100412;鹽酸二甲雙胍片，北京中惠藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號:200901049。

1.2 動物

Wistar大鼠，清潔級，雌雄各半，體重280～320 g。由四川省醫(yī)學科學院實驗動物研究所提供，動物合格證號:SCXK(川)2008－24。

1.3 試劑

鏈脲佐菌素(STZ)，Calbiochem，批號:57221780;血糖測定試劑盒，四川省邁克科技有限責任公司，批號:1209091;MDA、GSH、NO及SOD試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號:20100512。

1.4 儀器

SN－3001酶標儀(Thermo Formo公司);強生穩(wěn)豪型OneTouch UltraEasy血糖儀(強生中國醫(yī)療器材有限公司)。

1.5 方法

Wistar大鼠100只，雌雄各半，體重280～320 g。實驗時按體重分層隨機分為2組，即空白組10只和模型組90只。實驗時大鼠禁食8 h，次日晨大鼠腹腔注射STZ緩沖液40 mg·kg－1(空白組注射等量的0.1 mol·L－1枸櫞酸－枸櫞酸鈉緩沖液)，造模72 h后測定模型組大鼠空腹血糖(FBG)，選取血糖在11.1 mmol·L－1以上的動物為模型成功大鼠。

除空白組外，上述造模大鼠按血糖及體重分層隨機分為5組，即模型對照組、陽性對照組(鹽酸二甲雙胍片)、酒蒸黃連高、中、低劑量組，每組10只，按表1設(shè)計劑量灌胃給藥，連續(xù)灌胃給藥28 d，空白組給予等量蒸餾水，試驗期間除空白組外其余各組大鼠給予高脂飼料。末次給藥后30 min(禁食不禁水8 h)，大鼠股動脈取血，3000 r·min－1離心 10 min，分離血清，按試劑盒測定說明書分別測定血清空腹血糖(FBG)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH)、一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)的含量/活性。

2 結(jié)果

2.1 對2型糖尿病大鼠空腹血糖(FBG)的影響

由表1知，與空白組相比較，模型組大鼠給予STZ復(fù)合高脂飼料后，空腹血糖(FBG)含量明顯升高，表明2型糖尿病大鼠胰島素抵抗模型造模成功。與模型組相比較，酒蒸黃連各劑量組能明顯降低大鼠FBG的含量(P＜0.01～0.05)，尤其酒蒸高劑量組最高降糖率達到32.67%。

表1 酒蒸黃連對2型糖尿病大鼠空腹血糖含量的影響()

表1 酒蒸黃連對2型糖尿病大鼠空腹血糖含量的影響()

注:與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別 動物數(shù)(只) 劑量(g生藥/kg) FBG(mmol·L－1)空白 10 6.548±0.625＊＊模型 9 29.656±3.348二甲雙胍 9 0.25(g·kg－1) 10.277±2.293＊＊酒蒸高 10 0.83 16.003±1.599＊＊酒蒸中 10 0.42 17.319±2.313＊＊酒蒸低 9 0.21 23.147±2.869*

2.2 對2型糖尿病大鼠氧化應(yīng)激指標的影響

由表2知，與空白組相比較，模型組MDA的含量明顯升高，SOD、GSH的活性明顯降低，表明糖尿病模型大鼠體內(nèi)氧自由基平衡受到破壞;與模型組相比較，酒蒸黃連各劑量組能明顯提高SOD、GSH活性，并降低MDA含量(P＜0.01～0.05)。

表2 酒蒸黃連對2型糖尿病大鼠氧化應(yīng)激指標的影響)

表2 酒蒸黃連對2型糖尿病大鼠氧化應(yīng)激指標的影響)

注:與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別 動物數(shù)(只) 劑量(g·kg－1) MDA(nmol·mL－1) SOD(U·mL－1) GSH(gGSH·L－1)空白 10 3.767±0.447＊＊ 160.5±2.4＊＊ 0.561±0.104＊＊0.368±0.135模型 9 7.386±0.231 116.1±5.8 0.269±0.069二甲雙胍 9 0.25 4.820±0.350＊＊ 144.2±7.5＊＊ 0.483±0.084＊＊酒蒸高 10 0.83 4.532±0.555＊＊ 155.2±7.1＊＊ 0.466±0.063＊＊酒蒸中 10 0.42 5.421±0.510＊＊ 150.7±3.0＊＊ 0.475±0.131*酒蒸低 9 0.21 5.348±0.914＊＊ 138.5±5.6＊＊

2.3 對2型糖尿病大鼠血清中NO及NOS的影響

由表3知，與空白組相比較，模型組血清中NO的含量及NOS水平明顯升高;與模型組相比較，酒蒸黃連高、中劑量組能明顯降低血清中NO的含量和血清NOS水平(P＜0.01)。

表3 酒蒸黃連對2型糖尿病大鼠血清中NO、NOS含量的影響()

表3 酒蒸黃連對2型糖尿病大鼠血清中NO、NOS含量的影響()

注:與模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別 動物數(shù)(只) 劑量(g/生藥/kg) NO(μmol·L－1) NOS(U·mL－1)空白 10 8.848±1.272＊＊ 5.743±0.320＊＊7.267±0.388模型 9 38.391±4.914 8.135±0.743二甲雙胍 9 0.25(g·kg－1) 21.925±2.826＊＊ 5.492±0.662＊＊酒蒸高 10 0.83 15.858±2.987＊＊ 6.297±0.344＊＊酒蒸中 10 0.42 21.919±4.757＊＊ 6.576±0.451＊＊酒蒸低 9 0.21 26.401±4.976＊＊

3 討論

2型糖尿病發(fā)病的機制主要是體內(nèi)胰島素分泌絕對或相對不足以及靶細胞對胰島素敏感性降低，而胰腺的β細胞受損是最終導(dǎo)致胰島素狀態(tài)異常的主因。研究認為，氧化應(yīng)激在糖尿病的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用［3～5］，其中，氧自由基(ROS)的產(chǎn)生是氧化應(yīng)激的基本環(huán)節(jié)。與機體其他組織細胞相比，胰島β細胞內(nèi)SOD、CAT、GSH－Px等抗氧化物水平較低，因此，更容易受到ROS的損害，產(chǎn)生氧化應(yīng)激，從而使葡萄糖刺激的胰島素分泌減少，加重糖尿病［6］。

在正常情況下，氧自由基由于機體的代謝損傷，產(chǎn)生并依賴于生理需求而及時消除。在高血糖病理狀態(tài)下，這一平衡遭到破壞。一方面，胰島素β細胞內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)處于較低水平，SOD、GSH－Px等抗氧化酶活性降低，機體清除自由基的能力被明顯削弱，大量脂質(zhì)過氧化物生成，最終產(chǎn)物是MDA，故MDA含量的變化可間接反應(yīng)組織中氧自由基含量的變化［7］。另一方面，高血糖可刺激NOS活性，促進NO的生成，過量的 NO產(chǎn)生大量的過硝酶根離子(ONOO－)和OH－等自由基，發(fā)揮細胞毒性作用，損傷β細胞結(jié)構(gòu)和功能［8］。本研究顯示:血糖與 MDA、NO水平呈正相關(guān)，與SOD和GSH－Px呈負相關(guān)，可見血糖高低與氧化應(yīng)激密切相關(guān)，提示控制血糖可影響機體氧化應(yīng)激反應(yīng)的水平。

本研究結(jié)果表明，酒蒸黃連可以顯著增強大鼠體內(nèi)SOD和GSH－Px活性，并通過這一機制降低MDA水平，從而促進機體對氧自由基的代謝，在2型糖尿病的治療中發(fā)揮作用。同時，酒蒸黃連還可明顯降低血糖及NO水平，保護胰島β細胞。據(jù)此初步推測，酒蒸黃連對2型糖尿病大鼠氧化應(yīng)激損傷可起到一定的保護作用，從而為酒蒸黃連用于糖尿病的防治提供了依據(jù)。

［1］ 彭云波，顏曉東．糖尿病血糖波動與氧化應(yīng)激［J］．中國臨床新醫(yī)學，2009，2(5):519．

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