羅君琴，李 麗，聶振朋，徐建國(guó)，柯甫志，孫建華

(浙江省柑橘研究所，浙江 黃巖 318020)

莖尖微芽嫁接技術(shù)通過(guò)將不帶毒的莖尖分生組織作接穗嫁接到不帶毒的幼砧上進(jìn)行試管內(nèi)培養(yǎng)，獲取完整的脫毒植株［1－4］，既能利用不帶毒莖尖進(jìn)行嫁接，又能解決果樹(shù)莖尖組培難生根問(wèn)題，為此，作者進(jìn)行不同嫁接方式、接穗品種、嫁接時(shí)期對(duì)柑橘微芽嫁接成活影響的試驗(yàn)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

柑橘試管內(nèi)微芽嫁接各品種的接穗莖尖及砧木種子均取自浙江省柑橘研究所柑橘試驗(yàn)基地。

1.2 試管內(nèi)微芽嫁接基本操作步驟

1.2.1 砧木培養(yǎng)

取枳殼種子，無(wú)菌條件下剝?nèi)?nèi)外種皮，常規(guī)表面殺菌，接種于MT固體培養(yǎng)基，(27±1)℃溫度條件下暗培養(yǎng)2～3周，獲取黃化苗用作試管內(nèi)微芽嫁接砧木。

1.2.2 接穗準(zhǔn)備

柑橘嫩梢抽發(fā)期，采集約2 cm長(zhǎng)莖尖接穗洗凈，超凈工作臺(tái)上切取約1 cm長(zhǎng)莖尖，放入已滅菌錐形瓶中表面消毒，無(wú)菌水沖洗后待用。

1.2.3 微芽嫁接

無(wú)菌條件下，取砧木苗從根莖交接處往上2～3 cm處切去頂端，同時(shí)保留實(shí)生根約3 cm。高倍體視顯微鏡下，接穗保留2～3個(gè)葉原基切取莖尖，切下的莖尖快速移至砧木“L”形或“△”形嫁接切口處，使盡可能多地粘合在一起。嫁接苗轉(zhuǎn)入MT液態(tài)培養(yǎng)基，(25±2)℃溫度、1 500～2 500 lx光強(qiáng)、12 h·d－1光照條件下試管內(nèi)培養(yǎng)。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1 不同嫁接方式

試驗(yàn)采用“L”形、 “△”形2種嫁接方式?！癓”形嫁接法在砧木去頂端切口橫截面中間往下縱切2 mm長(zhǎng)左右再橫切一刀，在砧木頂部形成“L”形切口;“△”形嫁接法在砧木根莖交接處往上1.5～2 cm位置韌皮部開(kāi)小三角形。2種嫁接方式各嫁接40個(gè)單株，接后15及30 d觀察記錄莖尖存活及萌芽率。

1.3.2 不同柑橘接穗品種

微芽嫁接莖尖接穗分別選用溫州蜜柑、本地早蜜橘、秋輝、紅玉葡萄柚×大谷伊予柑雜交后代(下文簡(jiǎn)稱雜柑)、黃皮 (柑橘亞科黃皮族品種)5個(gè)不同品種。每一品種“△”形法嫁接15個(gè)莖尖，嫁接苗培養(yǎng)于MT液態(tài)培養(yǎng)基20 d后觀察記錄各接穗品種莖尖存活和萌芽率。

1.3.3 不同嫁接時(shí)期

通過(guò)大棚條件下自然抽梢及結(jié)合修剪促發(fā)新梢萌發(fā)，分別在3－10月各月采集本地早蜜橘嫩枝莖尖進(jìn)行試管內(nèi)微芽嫁接，每次嫁接15個(gè)莖尖，嫁接后20 d觀察記錄嫁接苗莖尖存活及萌芽率。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同嫁接方式對(duì)柑橘試管內(nèi)微芽嫁接成活影響

從表1可以看出，“△”形法嫁接方式接后15 d、30 d莖尖存活率明顯高于“L”形嫁接法，這可能與“△”形嫁接切口更利于固定微芽莖尖和保濕有關(guān)。“△”形嫁接法接后30d莖尖萌芽率略高于“L”形嫁接法，但仍保持在較低水平，是否與嫁接接穗品種同砧木品種的嫁接親和性有關(guān)，有待進(jìn)一步試驗(yàn)。

表1 不同嫁接方式對(duì)本地早蜜橘微芽嫁接成活的影響

2.2 不同柑橘接穗品種試管內(nèi)微芽嫁接成活比較

秋梢抽發(fā)期，采集溫州蜜柑 (試驗(yàn)代號(hào)W)、本地早蜜橘 (試驗(yàn)代號(hào) B)、秋輝 (試驗(yàn)代號(hào) Q)、雜柑 (試驗(yàn)代號(hào)Z)、黃皮 (試驗(yàn)代號(hào) H)5個(gè)品種嫩梢莖尖進(jìn)行“△”形微芽嫁接，接后20 d觀察記錄嫁接苗莖尖存活率分別為60.0%、46.7%、20.0%、26.7%、90.0%，莖尖萌芽率分別為15.0%、6.7%、0、0、20.0%。從圖 1可知，當(dāng)嫁接砧木同為枳殼時(shí)，5個(gè)不同接穗品種試管內(nèi)微芽嫁接成活順序依次為:黃皮＞溫州蜜柑＞本地早蜜橘＞雜柑＞秋輝，其中雜柑、秋輝微芽嫁接過(guò)程中接穗莖尖切口易出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，不利于切面愈合。

圖1 柑橘接穗品種試管內(nèi)微芽嫁接成活比較

2.3 不同嫁接時(shí)期對(duì)柑橘微芽嫁接成活影響

圖2 不同嫁接時(shí)期對(duì)本地早微芽嫁接成活影響

分別于3月19日、4月9日、5月17日、6月10日、7月8日、8月12日、9月8日及10月9日采集本地早蜜橘嫩梢進(jìn)行試管內(nèi)莖尖微芽嫁接試驗(yàn)，各月接后20 d嫁接苗莖尖存活率及萌芽率如圖2所示。從圖2不難看出，本地早蜜橘7、8月份夏秋梢抽發(fā)期微芽嫁接莖尖存活率和萌芽率明顯高于3、4、5月份春梢及9、10月份晚秋梢抽發(fā)期。柑橘微芽嫁接成活一定程度上受季節(jié)影響，這可能與春梢抽發(fā)期采芽母本樹(shù)同時(shí)伴有大量的花芽生長(zhǎng)發(fā)育、晚秋時(shí)期氣溫下降柑橘莖尖自剪加速，影響到營(yíng)養(yǎng)梢莖尖內(nèi)部的生理活性有關(guān)。

3 小結(jié)

“L”形、“△”形微芽嫁接方式對(duì)柑橘試管內(nèi)微芽嫁接莖尖存活有明顯影響，“△”形嫁接方式優(yōu)于“L”形嫁接方式，這可能與“△”形嫁接切口更利于固定微芽莖尖和保濕有關(guān)。

相同砧木不同接穗莖尖進(jìn)行試管內(nèi)微芽嫁接，接芽存活、萌芽率相差較大，本試驗(yàn)中5個(gè)接穗品種微芽嫁接成活率順序依次為:黃皮＞溫州蜜柑＞本地早蜜橘＞紅玉葡萄柚×雜柑＞秋輝。

柑橘微芽嫁接成活一定程度上受季節(jié)影響，本地早蜜橘莖尖微芽嫁接存活及萌芽率以7、8月夏秋梢抽發(fā)期明顯高于3、4、5月春梢及9、10月晚秋梢抽發(fā)期。

［1］張桂芳，賀紅，徐鴻華．莖尖微嫁接技術(shù)脫毒佛手病原體的研究 ［J］．現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2010，24(2):27-30.

［2］鄧才生，胡啟燦，陳燕，等．柑橘組織培養(yǎng)與莖尖微芽嫁接試驗(yàn)初探 ［J］．福建農(nóng)業(yè)科技，2009(4):54-55.

［3］劉文榮，李進(jìn)進(jìn)，陳升云，等．柑橘試管內(nèi)微芽嫁接方法探討 ［J］．廣東輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，8(3):14-16，20.

［4］Mukhopadhyay S．Micropropagation of Darjeeling orange(Citrus reticulataBlanco)by shoot-tip grafting［J］． Journalof Hortscience，1997，72(3):493.