王威 韓楓 魏磊

（河南水文水資源局 鄭州 450003）

揮發(fā)酚測定中4-氨基安替比林純化方法探討

王威 韓楓 魏磊

（河南水文水資源局 鄭州 450003）

用4-氨基安替比林分光光度法測定水中揮發(fā)酚時，4-氨基安替比林的純度對實驗空白值影響顯著，影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確度。本文通過不同的純化方法對4-氨基安替比林進行處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用無水乙醇對試劑晶體進行洗脫的方法適應(yīng)性較強，可使實驗空白顯著降低，同時不降低方法靈敏度，用氯仿對4-氨基安替比林溶液進行萃取對方法靈敏度影響較大，應(yīng)注意氯仿使用量。

4-氨基安替比林 乙醇 氯仿 實驗空白 靈敏度

4-氨基安替比林（4-AAP）分光光度法因具有選擇性高而又穩(wěn)定的特點被確定為我國測定飲用水、地表水、地下水和工業(yè)廢水中揮發(fā)酚的標(biāo)準(zhǔn)方法。在4-AAP萃取比色法中，要求實驗空白的吸光度應(yīng)在0.100A（2cm比色皿）以下，新方法改用3cm比色皿后，其空白吸光度應(yīng)不高于0.150A，研究結(jié)果表明4-AAP的純度是影響吸光度的主要因素。4-AAP（結(jié)構(gòu)式見圖1）易氧化變質(zhì)，在潮濕環(huán)境下，其右側(cè)-NH2可以被空氣中的O2氧化為-NO，產(chǎn)生氧化產(chǎn)物安替比林紅，安替比林紅可以被氯仿萃取，且在460nm處有較強吸收，從而使實驗空白值偏高。筆者所用天津科密歐公司的產(chǎn)品,使用3cm比色皿測定時,空白值往往在0.300以上。

由于目前藥品質(zhì)量不均衡，此問題一直嚴重困擾揮發(fā)酚的測定。于是產(chǎn)生了各種各樣提純4-AAP的方法。

1 提純方法概述

目前主要純化方法有兩大類：一類是通過萃取、吸附過濾等方法對配制好的4-AAP溶液進行提純處理；一類是直接對4-AAP晶體進行洗脫處理。

液體提純法主要有氯仿萃取法、活性炭吸附法、硅鎂型吸附劑吸附法等。氯仿萃取法原理基于4-AAP氧化產(chǎn)物可以被氯仿選擇性萃取?；钚蕴课椒ê凸桄V型吸附劑法類似，主要基于活性炭和硅鎂型吸附劑對4-AAP氧化產(chǎn)物的選擇吸附能力。

晶體洗脫法主要有苯洗脫法和乙醇洗脫法等，其原理基于4-AAP和其氧化產(chǎn)物在洗脫劑中有不同的溶解度。

以上方法中，氯仿萃取法、活性炭吸附法、硅鎂型吸附劑吸附法對4-AAP溶液的提純效果類似，均可以有效降低實驗空白值，但是活性炭吸附法需要長時間靜置，硅鎂型吸附劑則需要長時間的烘制，且二者選擇性較差，以氯仿萃取法使用最為廣泛；苯洗脫法和乙醇洗脫法均是對試劑晶體進行處理，由于苯有毒，操作不當(dāng)對人體有較大傷害，新的國標(biāo)方法中已將其棄用，而乙醇具有操作簡便快速，且無毒高效的特點，可以普遍應(yīng)用。本文選擇了氯仿萃取法和乙醇洗脫法進行實驗，以驗證兩種提純方法的試用范圍。

2 實驗方法

2.1 實驗儀器與試劑

T6可見分光光度計；苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液：500mg/L；苯酚標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：1.00mg/L；8%鐵氰化鉀溶液，臨用新配；氨水—氯化銨緩沖溶液（pH=10±0.2）。

2.2 實驗方法

揮發(fā)酚測定方法采用HJ503-2009規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)方法。

分別取用未提純的4-AAP配置的2%的溶液100ml加入6 只分液漏斗中，分別加入1ml、2ml、4ml、6ml、8ml、10ml氯仿，保持頻率和幅度一致，劇烈震搖2min，靜置，放出下層氯仿，保留上層溶液備用，在實驗中發(fā)現(xiàn)上層溶液變成乳濁液且較長時間內(nèi)無法澄清，因此將上層溶液用快速濾紙過濾，使其破乳澄清，儲存于棕色試劑瓶中備用。

將約25g4-AAP放入置有雙層濾紙的漏斗中，加入無水乙醇至剛沒過晶體，邊攪拌邊過濾，并用少量無水乙醇沖洗幾次，直至濾液接近無色。收集濾餅，在通風(fēng)背陰處使乙醇揮發(fā)，將干燥后的4-APP研磨成粉末，配制成2%的溶液，儲存于棕色試劑瓶中備用。由于4-AAP在乙醇中有一定溶解度，沖洗時應(yīng)遵循少量多次的原則，避免試劑損失過大。筆者實驗大約回收了50%的試劑。

3 實驗結(jié)果及討論

3.1 空白和靈敏度實驗

取8支500ml分液漏斗,分別加入250ml無酚水，2.0ml緩沖溶液，搖勻。前兩個分別加入未提純的4-AAP溶液和用乙醇洗脫后配制的4-AAP溶液，編號記做1和2，后6支分別加入上述經(jīng)過不同量氯仿處理過的4-AAP溶液，混勻,編號依次記做3～8，然后分別加入1.5ml鐵氰化鉀溶液，混勻，10min后準(zhǔn)確加入10ml氯仿萃取，測定吸光度，結(jié)果見圖2。

表1 兩種純化方法標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測定結(jié)果

另取8支分液漏斗，分別加入1.00mg/L揮發(fā)酚標(biāo)液5ml，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，此時揮發(fā)酚溶液濃度為20μg/L。將定容好的溶液轉(zhuǎn)移到8支500ml分液漏斗中，加2.0ml緩沖溶液，混勻，同上分別加入8種不同的4-AAP溶液1.5ml，混勻，編號同樣記做1～8，再加1.5ml鐵氰化鉀溶液，混勻10min后準(zhǔn)確加入10ml氯仿萃取測定吸光度，以測出的揮發(fā)酚溶液吸光度減去空白值，得到20μg/L揮發(fā)酚吸光度響應(yīng)值，相關(guān)結(jié)果見圖2。

由圖2可以看出，2號即用乙醇洗脫后配制的4-AAP溶液，空白吸光度在0.1A左右，完全滿足實驗要求；用氯仿萃取的溶液，在氯仿用量達到2ml以后即4～8號均可滿足實驗空白值要求，氯仿用量超過2ml以后，空白吸光度下降趨勢逐漸趨緩，直至穩(wěn)定在0.09A左右；測定20μg/L揮發(fā)酚樣品時，2號對揮發(fā)酚樣品的響應(yīng)值最高，僅有2號對20μg/L揮發(fā)酚樣品吸光度響應(yīng)值達到了0.31A以上，使用乙醇洗脫4-AAP所得溶液測定的靈敏度最高；3～8號，隨著氯仿用量的加大，響應(yīng)值下降較為明顯，且一定程度上有擴大的趨勢。這是因為經(jīng)氯仿純化的4-AAP溶液其有效成分濃度有所揮發(fā)且不確定，而該溶液的濃度對方法靈敏度有較大影響。而使用乙醇洗脫的4-AAP配制的溶液，其濃度是確定的，不存在方法靈敏度隨實驗空白值降低的情況。實驗表明使用2ml氯仿處理空白值滿足實驗要求，靈敏度也較高，氯仿用量增加到5ml時，標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率下降了38%，其他的實驗結(jié)果表明，5ml氯仿萃取空白值才可滿足要求?？梢?，使用氯仿對配制的4-AAP溶液進行萃取，有以下兩個問題：一是由于藥劑差異，氯仿用量差異較大，每批提純后的空白值也不穩(wěn)定，表明純化后的試劑并不穩(wěn)定。二是4-AAP純化后方法靈敏度有所下降，下降幅度應(yīng)該有所控制，在空白值和靈敏度之間做出平衡選擇尤為重要。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線對比和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測試

由于使用2ml氯仿萃取的4-AAP空白值符合測定要求，且相對其余更大量氯仿用量其靈敏度最高，一次用該溶液配制的4-AAP溶液和用乙醇洗脫后配制的4-AAP溶液分別按照標(biāo)準(zhǔn)方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，曲線及相關(guān)系數(shù)見圖3。

由圖3中可以看出，二者所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)相當(dāng)，均滿足實驗要求。在二者測定空白值相當(dāng)?shù)那闆r下，采用2ml氯仿萃取過的4-AAP繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線其斜率較用乙醇洗脫后配制的溶液低，約低10%，在方法靈敏度上，采用乙醇洗脫具有優(yōu)勢。

使用兩種溶液對已知濃度保準(zhǔn)物質(zhì)進行測定，結(jié)果見表1。

由表1可以看出，兩種4-AAP溶液對揮發(fā)酚的測定準(zhǔn)確度和精密度相當(dāng)，均可以滿足揮發(fā)酚測定要求。

4 結(jié)論

對4-AAP溶液進行純化，優(yōu)點是節(jié)省試劑，但是節(jié)省試劑的同時降低了4-AAP溶液的濃度，使方法靈敏度有一定程度降低。用氯仿萃取時，因萃取的程度不可能完全相同，造成空白值和方法靈敏度也不同，對使用不同批號試劑、需加入不同量的氯仿來處理4-AAP溶液，氯仿用量需要通過實驗確定，尋找實驗空白和方法靈敏度的平衡點。同時，萃取后造成溶液乳化，也給萃取分離帶來一定干擾。

對4-AAP晶體進行純化，優(yōu)點是操作方法簡單快捷，對操作條件要求不高，適合失效程度不同的試劑；僅對固體藥品進行處理，對藥品性質(zhì)幾乎沒有影響，所配溶液的濃度確定和方法靈敏度高；而且固體試劑穩(wěn)定性更好，消除了萃取方法因萃取程度不同造成的差異,便于長期儲存；由于可以一次進行大批量處理，避免了每個實驗周期均需對4-AAP進行提純，總體上節(jié)約了時間。缺點是由于4-AAP在溶劑中有一定溶解度，試劑損失較大，經(jīng)濟性較差。

對于兩種提純方法，可以根據(jù)實際需要選用，如果經(jīng)濟上可以承受，筆者建議選擇對4-AAP晶體進行洗脫，可以獲得更加穩(wěn)定高效的試劑，使實驗達到最佳效果