嚴(yán) 倩 許天翔 杭州市蕭山區(qū)第六人民醫(yī)院 杭州 311261

周華斐 浙江省臺(tái)州醫(yī)院

童夏生 王恩智 李晨虹 狄志敏 浙江省臺(tái)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院

細(xì)菌性肺炎（bacterial pneumonia）是兒科常見(jiàn)病、多發(fā)病，是兒童死亡的最主要原因之一[1]。腺病毒或呼吸道病毒感染引起的急性呼吸道感染的嬰兒，其血清中可溶性腫瘤壞死因子受體（sTNFR）2的表達(dá)水平顯著增高[2]。但sTNFR在細(xì)菌性肺炎中的作用尚未完全闡明，尤其是與腫瘤壞死因子（TNF－α）的相關(guān)性如何目前知之甚少。本研究通過(guò)檢測(cè)細(xì)菌性肺炎兒童患者血清sTNFR1、sTNFR2和 TNF－α水平變化，探討其在細(xì)菌性肺炎發(fā)病中的作用及判斷病情的臨床意義。

1 臨床資料

41例細(xì)菌性肺炎病例選自我院2009年7月—2010年3月住院患兒，輕度36例，重度5例。所有病例均符合細(xì)菌性肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。經(jīng)痰細(xì)菌培養(yǎng)陽(yáng)性。其中男26例，女15例，年齡6個(gè)月～9歲，平均（5.5±2.0）歲；另選健康對(duì)照組22例，為同期無(wú)感染征象的健康體檢兒童，其中男15例，女7例，年齡3～9歲，平均（5.8±1.5）歲。兩組兒童性別、年齡具可比性。

2 方法

2.1 標(biāo)本采集 采集患兒入院當(dāng)時(shí)（急性期）及癥狀消失后3天（恢復(fù)期）的靜脈血各2mL，3000r/min離心15min，分離血清，－20℃冰箱貯存，集中檢測(cè)。健康對(duì)照組于體檢時(shí)抽取靜脈血。

2.2 血清sTNFR1、sTNFR2和TNF－α檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法，檢測(cè)血清sTNFR1、sTNFR2和TNF－α水平，操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Biosource公司。具體方法：試劑盒平衡于室溫20～25℃待用，取出96孔反應(yīng)板，分別加入50μL標(biāo)本于反應(yīng)孔里，吸取200μL（sTNFR1或sTNFR2或TNF－α）抗體至反應(yīng)孔里，室溫下孵育1h，吸出液體，洗板3次，加50μL顯色液，室溫孵育15min，每孔加入200μL終止液，全自動(dòng)酶標(biāo)儀（芬蘭Labsystems Dragon公司）在450nm波長(zhǎng)讀取吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)各標(biāo)本吸光度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的濃度。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)以（±s）表示。肺炎組的急性期與恢復(fù)期間比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，肺炎組與健康對(duì)照組間比較采用成組t檢驗(yàn)。兩變量的相關(guān)分析用Pearson直線相關(guān)分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 血清sTNFR1、sTNFR2和TNF－α水平 細(xì)菌性肺炎患兒急性期血清sTNFR1、sTNFR2和TNF－α水平顯著性高于對(duì)照組（P均＜0.01）。恢復(fù)期三項(xiàng)指標(biāo)則顯著性低于急性期（P＜0.01，P＜0.05）；肺炎恢復(fù)期sTNFR2和TNF－α水平高于對(duì)照組（P均＜0.01），而sTNFR1水平與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表 1。

pg/mL表 1 血清 sTNFR1、sTNFR2和 TNF－α 比較（±s）

pg/mL表 1 血清 sTNFR1、sTNFR2和 TNF－α 比較（±s）

注：與健康對(duì)照組比較，△P＜0.01；與急性期比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組 別 n/例 sTNFR1 sTNFR2 TNF－α健康對(duì)照組 22 2.07±0.86 4.75±1.68 1.96±0.86肺炎急性期 41 5.05±2.27△ 14.18±6.01△ 3.39±1.73△肺炎恢復(fù)期 41 2.67±1.28** 10.16±3.21△** 2.75±0.82 △*

3.2 相關(guān)性分析 sTNFR1與sTNFR2、TNFα表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)（n=104，r=0.389，P＜0.01；n=104，r=0.244，P＜0.05）；sTNFR2 與 TNF－α 表達(dá)水平無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。

4 討 論

TNF是一種具有多種生物學(xué)效應(yīng)的重要生理學(xué)炎癥介質(zhì)，適當(dāng)?shù)腡NF濃度可調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫及代謝功能，增強(qiáng)對(duì)入侵病原體的抵抗力，對(duì)維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定狀態(tài)及抵制各種致病因子具有重要意義，而TNF過(guò)量則可導(dǎo)致多種病理改變。研究[1，4]發(fā)現(xiàn)，TNF在肺炎患者的血清和肺泡灌洗液中表達(dá)升高，并隨著肺炎的嚴(yán)重程度而增加。但TNF的所有生物學(xué)功能都依賴(lài)于TNFR，只有在與其受體結(jié)合后，TNF才能發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。TNFR主要有兩種亞型：TNFR1和TNFR2。TNFR在細(xì)胞表面表達(dá)，稱(chēng)為膜結(jié)合型TNFR（mTNFR），mTNFR在蛋白酶等作用下，可裂解成sTNFR1和sTNFR2，釋放到血液或組織液中。mTNFR和sTNFR的生物學(xué)作用不盡相同，sTNFR仍有結(jié)合TNF的活性，從而調(diào)節(jié)TNF的生物學(xué)功能。TNFR具有重要的生理作用，包括抗炎、細(xì)胞毒作用，對(duì)細(xì)胞增殖作用的影響及Fc的抗TNF作用。sTNFR在正常個(gè)體中水平很低，而在病理狀態(tài)中則明顯升高[4－5]。臨床上已使用依那西普（一種sTNFR）治療特應(yīng)性皮炎，皮膚癥狀得到顯著改善[6]。因此對(duì)TNFR，特別是對(duì)sTNFR的研究，對(duì)疾病的診斷及治療可能有一定的指導(dǎo)作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌性肺炎急性期患者血清sTNFR1、sTNFR2和TNF－α水平顯著高于對(duì)照組，表明它們可能均參與了肺炎的炎癥過(guò)程?；謴?fù)期三項(xiàng)指標(biāo)均顯著低于急性期，表明TNF－α及其sTNFR水平隨著肺炎的炎癥程度而相應(yīng)地發(fā)生變化，在急性期炎癥較重時(shí)升高，恢復(fù)期炎癥減輕時(shí)下降，有助于肺炎的病情判斷。推測(cè)直接或間接阻滯TNF與其受體的結(jié)合可能是有效治療肺炎的途徑之一。肺炎恢復(fù)期sTNFR1和TNF－α水平仍然高于對(duì)照組，提示肺炎恢復(fù)期可能還處于炎癥過(guò)程。相關(guān)性分析表明，sTNFR1與sTNFR2水平呈顯著正相關(guān)，提示炎癥過(guò)程中兩者的表達(dá)同時(shí)升高或降低，共同起到抗炎作用，而非選擇性地以某一種受體為主。sTNFR1與TNF－α水平呈顯著正相關(guān)，表明sTNFR1表達(dá)水平隨著

變化而變化。相似的研究也表明，社區(qū)獲得性肺炎患兒血清sTNFR1水平顯著高于健康對(duì)照組[7]，而且在非感染引起的慢性肺部疾病的早產(chǎn)兒，sTNFR1水平顯著高于無(wú)慢性肺部疾病組[8]。上述均提示sTNFR在呼吸道疾病中起著重要的作用。

［1］張紹芬，鄧?yán)^巋，黃寶興，等.肺炎患兒支氣管肺泡灌洗液中TNF－α和PS水平變化研究［J］.中國(guó)兒童保健雜志，2009，17（4）：448－450.

［2］Fernández JA，Tapia L，Palomino MA，et al.Plasma interferon－gamma，interleukin－10 and soluble markers of immune activation in infants with primary adenovirus（ADV）and respiratory syncytial virus（RSV）infection［J］.Eur Cytokine Netw，2005，16（1）：35－40.

［3］胡亞美，江載芳．實(shí)用兒科學(xué)［M］．第7版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1180．

［4］周京國(guó)，郭嘵蘭，袁國(guó)華，等.腫瘤壞死因子受體p55和p57在骨關(guān)炎軟骨細(xì)胞的表達(dá)及意義［J］.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2007，11（1）：12－15.

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