王烯冬，德 力，陳 珂，陳 峰，張 飛，高小平

(內蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院普外二科，呼和浩特 010017)

Cripto-1可作為細胞膜表面受體接受多種信號刺激，是重要的癌基因生長因子，參與致癌、癌細胞的增殖和轉移。研究發(fā)現(xiàn)，Cripto-1基因在許多實體瘤中過度表達［1-3］，而正常組織表達極低或者不表達，但國內目前對此基因研究甚少。體外實驗證明，Cripto-1作為重要的癌基因生長因子，在腫瘤細胞遷移、上皮-間質轉化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)、分支形態(tài)的發(fā)生以及促進腫瘤血管形成等方面發(fā)揮著重要的作用［4，5］。EMT是胚胎發(fā)生、慢性炎癥和纖維化以及腫瘤進展中的一個重要過程，以上皮細胞極性的喪失及其間質特性的獲得為主要特征。近年來，EMT被提出同樣參與了腫瘤侵襲與轉移的過程，而其最重要的特征之一表現(xiàn)為鈣黏蛋白(E-cadherin)的缺失［6，7］。E-cadherin 的表達下調和基因突變時，可導致細胞黏附力的降低、移動力加強和發(fā)生侵襲。這些研究表明，Cripto-1與E-cadherin在腫瘤侵襲轉移過程中發(fā)揮作用及可能存在內在聯(lián)系。

在本研究中，聯(lián)合檢測了Cripto-1與E-cadherin在胃癌組織中的表達情況，以探討兩者與腫瘤侵襲轉移可能發(fā)揮的作用。

1 材料與方法

1.1 組織標本與臨床資料 選用2005年1月至2010年12月期間內蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院收治的75例胃癌患者標本，所有標本均經病理檢查證實。患者平均年齡58歲(27～80歲)。選用的病例有完整的基本資料統(tǒng)計，如腫瘤分化等級、腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移情況、肝臟轉移情況及TNM分期。除了75例原發(fā)性胃癌，選取配對的切除的斷端作為正常胃黏膜對照標本。

1.2 免疫組織化學染色免疫組化技術采用EnVision二步法。鼠抗人的單克隆抗體 Cripto-1(1∶100，R＆D 公司)或鼠抗人的單克隆抗體E-cadherin(1∶100，Zymed公司)4℃孵育過夜;滴加二抗，室溫孵育30 min;二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine，DAB)顯色。

Cripto-1或E-cadherin陽性染色為淡黃色、棕黃色或棕褐色。陽性細胞數(shù)＞20%的為免疫組化Cripto-1表達陽性。而陽性細胞數(shù)＞60%，且定位于細胞膜的為E-cadherin表達陽性(E-cad+);相反，＜60%陽性細胞定位于細胞膜或定位于細胞質的為E-cadherin表達下調(E-cad－)。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 12.0進行統(tǒng)計分析，Cripto-1或E-cadherin的表達與臨床病理學特征的關系采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 Cripto-1及E-cadherin在胃癌組織及正常胃黏膜中的表達情況 在正常胃黏膜中，Cripto-1在細胞質中有弱表達。與正常組織相比，Cripto-1在腫瘤細胞質(48%，36/75)中高表達(圖 1和圖 2)。與Cripto-1的表達不同，E-cadherin在腫瘤組織中的表達呈不均一性的特點(圖4)，68%(51/75)的腫瘤細胞膜表現(xiàn)為E-cadherin的完全性或不完全性缺失表達。部分腫瘤細胞質中出現(xiàn)E-cadherin的表達。而在正常組織中，E-cadherin有細胞膜呈高表達(圖3)。

圖1 Cripto-1在正常胃黏膜中呈細胞質弱表達(×100)

圖2 Cripto-1在胃癌細胞質呈高表達(×400)

圖3 E-cadherin在正常胃黏膜中呈細胞膜高表達(×100)

圖4 E-cadherin在胃癌細胞膜呈不均一性表達(×400)

2.2 Cripto-1及E-cadherin的表達情況與臨床病理特征的關系 由表1顯示了Cripto-1和 E-cadherin與臨床病理特征的相關性分析結果。統(tǒng)計結果發(fā)現(xiàn)，Cripto-1高表達與遠處轉移(P=0.028)以及TNM分期(P=0.025)有關。而E-cadherin缺失表達則與淋巴結轉移(P=0.010)、以及TNM分期(P=0.022)有關。聯(lián)合分析Cripto-1和E-cadherin在胃癌組織中的表達情況，將75例患者分為以下三組:①同時Cripto-1低表達和E-cadherin高表達(Cripto-1－/E-cadherin+，n=14);②Cripto-1+/E-cadherin+或Cripto-1－/E-cadherin－(n=35);③Cripto-1+/E-cadherin－(n=26)。統(tǒng)計結果顯示，Cripto-1+/E-cadherin－的腫瘤與淋巴結轉移(P=0.014)、遠處轉移(P=0.028)以及 TNM 期(P=0.007)相關性更強(表2)。

表1 75例胃癌患者Cripto-1及E-cadherin表達與臨床病理因素的關系

表2 聯(lián)合分析75例胃癌患者Cripto-1及E-cadherin表達與臨床病理因素的關系

3 討論

Cripto-1是一種自分泌型腫瘤生長因子，是表皮生長因子(epidermal growth factor，EGF)家族重要成員之一，是一個具有多功能的信號分子蛋白，參與調節(jié)了多種信號轉導通路，從而在促進細胞轉化以及腫瘤發(fā)生發(fā)展方面上發(fā)揮著重要的作用［8，9］。體內/外實驗證明，Cripto-1在多種腫瘤中發(fā)揮著潛在癌基因的作用［1，10，11］。E-cadherin 是腫瘤轉移和擴散的抑制性分子，普遍存在于各種上皮細胞中起著介導同種細胞黏附和維持正常細胞形態(tài)完整性的作用。E-cadherin的下調或缺失使其不能與細胞質內β-catenin形成復合物，從而不能與細胞骨架肌動蛋白相連，導致細胞易于由原發(fā)病灶脫落移動到鄰近組織及血管、淋巴管，發(fā)生局部浸潤和遠處轉移。

EMT是從具有極性的上皮細胞轉換成具有活動能力的細胞的一個正常的生理學過程，表現(xiàn)為上皮細胞失去極性，與周圍細胞和基質的接觸減少，細胞黏附力下降，遷移和運動能力增加，同時細胞表型發(fā)生改變，表現(xiàn)出具有移行能力的間質細胞的特性。Cripto-1可作為細胞膜表面受體，間接參與EMT相關的信號通路蛋白的上調［12］。研究發(fā)現(xiàn)，當β-catenin的酪氨酸磷酸化后即與E-cadherin-β-catenin復合體分離，由于E-cadherin失去與β-catenin的錨連接而形成一種“活動”形式，因而從細胞內連接處重分布到別的區(qū)域，失去黏附功能，導致細胞分散增加，移動力加強，腫瘤細胞運動能力提高，增強其侵襲力。而Cripto-1高表達的細胞可以抑制β-catenin的酪氨酸磷酸化，E-cadherin-β-catenin復合體不能分離，從而游離 E-cadherin 減少［13，14］。

由本研究結果可以假設，Cripto-1高表達的同時E-cadherin的下調在腫瘤侵襲轉移中發(fā)揮著重要的作用。本研究結果也顯示，與Cripto-1－/E-cad+的胃癌組相比，Cripto-1+/E-cadherin－的胃癌組的侵襲性更加明顯。由此，Cripto-1的上調同時E-cadherin的下調可能在促進腫瘤侵襲轉移方面發(fā)揮協(xié)同作用，但有關的作用機制有待進一步的研究。根據(jù)本實驗結果顯示，聯(lián)合檢測Cripto-1和E-cadherin的表達可能更好地分析胃癌轉移情況，具體情況需要更深一步的研究證實。

［1］ Wu Z，Li G，Wu L，et al.Cripto-1 overexpression is involved in the tumorigenesis of nasopharyngeal carcinoma［J］.BMC Cancer，2009，9:315.

［2］ Hong SP，Lee EK，Park JY，et al.Cripto-1 overexpression is involved in the tumorigenesis of gastric-type and pancreatobiliarytype intraductal papillary mucinous neoplasms of the pancreas［J］.Oncol Rep，2009，21(1):19-24.

［3］ Sun Y，Strizzi L，Raafat A，et al.Overexpression of human Cripto-1 in transgenic mice delays mammary gland development and differentiation and induces mammary tumorigenesis［J］.Am J Pathol，2005，167(2):585-597.

［4］ Watanabe K，Meyer MJ，Strizzi L，et al.Cripto-1 is a cell surface marker for a tumorigenic，undifferentiated subpopulation in human embryonal carcinoma cells［J］.Stem Cells，2010，28(8):1303-1314.

［5］ de Castro NP，Rangel MC，Nagaoka T，et al.Cripto-1:an embryonic gene that promotes tumorigenesis［J］.Future Oncol，2010，6(7):1127-1142.

［6］ Chao YL，Shepard CR，Wells A.Breast carcinoma cells re-express E-cadherin during mesenchymal to epithelial reverting transition［J］.Mol Cancer，2010，9:179.

［7］ Gravdal K，Halvorsen OJ，Haukaas SA，et al.A switch from E-cadherin to N-cadherin expression indicates epithelial to mesenchymal transition and is of strong and independent importance for the progress of prostate cancer［J］.Clin Cancer Res，2007，13(23):7003-7011.

［8］ Hamada S，Watanabe K，Hirota M，et al.beta-Catenin/TCF/LEF regulate expression of the short form human Cripto-1［J］.Biochem Biophys Res Commun，2007，355(1):240-244.

［9］ Harrison CA，Gray PC，Vale WW，et al.Antagonists of activin signaling:mechanisms and potential biological applications［J］.Trends Endocrinol Metab，2005，16(2):73-78.

［10］ Strizzi L，Bianco C，Normanno N，et al.Cripto-1:a multifunctional modulator during embryogenesis and oncogenesis［J］.Oncogene，2005，24(37):5731-5741.

［11］ Strizzi L，Postovit LM，Margaryan NV，et al.Emerging roles of nodal and Cripto-1:from embryogenesis to breast cancer progression［J］.Breast Dis，2008，29:91-103.

［12］ Strizzi L，Bianco C，Normanno N，et al.Epithelial mesenchymal transition is a characteristic of hyperplasias and tumors in mammary gland from MMTV-Cripto-1 transgenic mice［J］.J Cell Physiol，2004，201(2):266-276.

［13］ Saloman DS，Bianco C，Ebert AD，et al.The EGF-CFC family:novel epidermal growth factor-related proteins in development and cancer［J］.Endocr Relat Cancer，2000，7(4):199-226.

［14］ Howard S，Deroo T，F(xiàn)ujita Y，et al.A positive role of cadherin in Wnt/β-catenin signalling during epithelial-mesenchymal transition［J］.PLoS One，2011，6(8):e23899.