黃洪勇，呂路線，王金寶，錢東麗，師天元（.新鄉(xiāng)醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院，新鄉(xiāng)市45300；.河南省生物精神病學重點實驗室，新鄉(xiāng)市 45300）

齊拉西酮（Ziprasidone，ZIP）是一種新型的非典型廣譜抗精神病藥，和其他非典型抗精神病藥相比，ZIP與5-羥色胺（5-HT）2A的親和力較強，對H1、α1受體有適度的親和力，與D1、α2受體的親和力較弱，幾乎不與M1受體結(jié)合，臨床適用于治療急性及慢性精神分裂癥以及其他各種精神疾病所引起的明顯陽性癥狀、明顯的陰性癥狀和改善患者認知功能[1]。同時，其還能減輕精神分裂癥伴隨的情感障礙。ZIP不增加患者的體重和血清泌乳素水平，無代謝異常的危險，錐體外系反應(yīng)發(fā)生率低，性功能障礙不良反應(yīng)較低，QTc間期延長不明顯[2]。國外曾以監(jiān)測患者體內(nèi)齊拉西酮的血藥濃度來指導臨床用藥、預警不良反應(yīng)和規(guī)避風險。本文建立以反相高效液相色譜（RP-HPLC）法測定人體血漿中齊拉西酮濃度的方法，該方法快速、簡便、靈敏度高、重現(xiàn)性好，適用于齊拉西酮的臨床研究和不良反應(yīng)監(jiān)測。

1 材料

1.1 儀器

1100高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；XT-120A電子分析天平（瑞士普利賽斯公司）；ULTRE FREEZE-3410超低溫冰箱（丹麥HETO公司）；XK96-A快速渦旋混合器（姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司）；LXJ-Ⅱ離心沉淀機（上海醫(yī)用分析儀器廠）。

1.2 試藥

齊拉西酮對照品（徐州恩華藥業(yè)集團有限責任公司，批號：20080101，含量：98.96%）；內(nèi)標：地昔帕明（Desipramine，美國Sigma公司，批號：065K1340，含量：98.00%）；乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：美國Diamonsil?C18反相柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：30℃；流動相：乙腈-甲醇-緩沖液（5 mL三乙胺加入1 000 mL水中，冰醋酸調(diào)節(jié)pH值3.2）＝28∶12∶60；流速：1.3 mL·min－1；檢測波長：254 nm；進樣量：20 μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液：取齊拉西酮對照品約10 mg，準確稱定，加甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，定容，即得。于冰箱4℃保存?zhèn)溆?，臨用前用甲醇稀釋成所需濃度。

2.2.2 內(nèi)標溶液：依法制備出10 μg·mL－1地昔帕明甲醇溶液為內(nèi)標溶液。

2.3 血漿樣品處理

取400 μL含藥血漿，加至10 mL具塞錐形玻璃離心管中，加入內(nèi)標溶液100 μL，渦旋振蕩1 min，加入二氯甲烷5 mL，渦旋振蕩提取2 min，4 000 r·min－1離心10 min，取有機層置于一干燥具塞尖底試管中，離心管中再加入二氯甲烷5 mL，同法操作。振蕩混合2次提取液，40℃水浴氮氣吹干，殘渣用100 μL流動相復溶后，4 000 r·min－1離心10 min，取20 μL進樣。

2.4 專屬性考察

在“2.1”項色譜條件下，血漿內(nèi)源性物質(zhì)、代謝物及其他雜質(zhì)不干擾主峰的分離和測定，齊拉西酮和內(nèi)標保留時間分別為6.45 min和11.15 min。齊拉西酮的有效板數(shù)為10 000，分離度19.6，拖尾因子1.02。高效液相色譜圖見圖1。

2.5 線性關(guān)系考察及靈敏度試驗

取空白血漿300 μL共8份，分別加入齊拉西酮系列對照品溶液100μL，使血漿中藥物濃度分別相當于0.022、0.044、0.088、0.176、0.352、0.704、1.408、2.816 μg·mL－1，振蕩混勻，然后按“2.3”項下方法處理，記錄色譜。以齊拉西酮血漿濃度（c）對齊拉西酮峰面積/內(nèi)標峰面積的比值（F）進行線性回歸，得標準曲線方程為c＝2.760 3F－0.073 8（r＝0.999 2，n＝8），結(jié)果表明，齊拉西酮血藥濃度在0.022～2.816 μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。當信噪比（S/N）≥10時，最低定量限為0.022 μg·mL－1。

圖1 高效液相色譜圖A.空白血漿；B.齊拉西酮對照品溶液+內(nèi)標溶液；C.血漿樣品+齊拉西酮對照品溶液+內(nèi)標溶液；D.患者血樣+內(nèi)標溶液；1.齊拉西酮；2.地昔帕明Fig1 HPLC chromatogramsA.blank plasma；B.ziprasidone reference standard+internal standard；C.plasma sample+ziprasidone reference standard+internal standard；D.plasma sample of patient+internal standard；1.ziprasidone；2.desipramine

2.6 回收率及精密度試驗

取空白血漿3份，分別按“2.5”項下方法制備濃度為0.044、0.352、1.408 μg·mL－1的齊拉西酮血漿對照品溶液，然后按“2.3”項下方法處理。每種濃度日內(nèi)平行測定5次；3種濃度隔日測定1次，一共5次。分別計算日內(nèi)、日間精密度，并根據(jù)同一天內(nèi)低、中、高3個濃度血漿對照品結(jié)果計算相對回收率；另配0.044、0.352、1.408 μg·mL－1對照品溶液，以此為標準，計算齊拉西酮的絕對回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率及精密度試驗結(jié)果（n＝5）Tab 1Results of recovery and precision tests（n＝5）

2.7 凍融穩(wěn)定性試驗

分別按“2.5”項下方法制備低、中、高濃度（0.044、0.352、1.408 μg·mL－1）的齊拉西酮血漿質(zhì)控樣品若干份，分別在室溫放置0、2、4、6、12 h，反復凍融0、1、2、3、4次，于－20 ℃冰箱保存0、5、10、20 d后，按“2.3”項下方法處理，進行樣品的色譜測定。結(jié)果，齊拉西酮測定含量的RSD≤8.25%，表明血漿中齊拉西酮在室溫下12 h、凍融4次、－20℃冷凍20 d條件下穩(wěn)定。

2.8 患者血樣含量測定

取患者上肢靜脈血5 mL，離心分取血漿，按“2.5”項下平行處理3份，避光低溫保存至測定。RP-HPLC法測定血漿中齊拉西酮的含量，結(jié)果重現(xiàn)性比較好，詳見表2。

表2 患者血樣的測定結(jié)果（n＝3）Tab 2Results of the determination of blood sample（n＝3）

3 討論

精神分裂癥患者在藥物治療上大多聯(lián)用了一些鎮(zhèn)靜劑如地西泮，因此，這些物質(zhì)不易作為內(nèi)標的首選[3]。本文建立的方法選用了患者不常聯(lián)用的地昔帕明作為內(nèi)標，避免了患者血樣本身對分析過程的影響，擴大了方法現(xiàn)實應(yīng)用中的患者范圍。

有關(guān)齊拉西酮體內(nèi)分析方法主要有高效液相色譜法、液-質(zhì)聯(lián)用法、熒光法等，然而現(xiàn)有的高效液相色譜法保留時間不太合適[4，5]，基線漂移[6]；液-質(zhì)聯(lián)用法儀器昂貴、色譜柱壽命有限[7]；熒光法需要專門設(shè)備[8]。筆者建立的RP-HPLC法既可顯著改善峰形，又可使保留時間適中，減少工作量，具有樣品前處理簡單、分析儀器普及率高、簡便、快速、準確、靈敏度高等優(yōu)點，適用于齊拉西酮的臨床研究和不良反應(yīng)監(jiān)測。

（本研究在河南省生物精神病學重點實驗室（新鄉(xiāng)醫(yī)學院）完成，特此致謝！）

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