蔡勝艷，王宏偉，王樂秋，董祥梅

1.牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院 a.放射科；b.五官科；c.病理科，黑龍江 牡丹江157013；2.牡丹江醫(yī)學(xué)院 病理教研室，黑龍江 牡丹江 157013

0 前言

膽脂瘤型中耳炎是耳科常見疾病，多伴有聽小骨破壞，而導(dǎo)致傳導(dǎo)性耳聾；患者的生存質(zhì)量下降，如不及時治療，將進(jìn)一步引起“硬膜外膿腫”等嚴(yán)重并發(fā)癥。其骨質(zhì)破壞作用是導(dǎo)致各種顱內(nèi)、外并發(fā)癥的主要原因，嚴(yán)重者可危及患者生命。CT掃描仍是膽脂瘤的主要檢查手段，64排CT具有良好的密度及空間分辨率，圖像清晰，解剖定位準(zhǔn)確，能清晰顯示耳部細(xì)微結(jié)構(gòu)，能對病變侵犯范圍及程度作出精確判斷。近年來隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，多種細(xì)胞因子在膽脂瘤的發(fā)生發(fā)展中的作用得到了證實(shí)，本實(shí)驗(yàn)在對TNF-α在膽脂瘤發(fā)生發(fā)展中的作用進(jìn)行了研究，并進(jìn)一步探討了TNF-α與聽小骨在CT表現(xiàn)上骨質(zhì)破壞程度的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 一般資料

病例選自牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院2008年3月～2010年3月接受64排螺旋CT檢查的膽脂瘤患者30例，常規(guī)石蠟包埋制成4μm厚的切片進(jìn)行TNF-α免疫組織化學(xué)染色?；颊吣挲g為20～50歲，平均35歲，其中，男性18例，女性12例。

1.2 64排螺旋CT掃描方法

采用Aquiline 64排螺旋CT掃描機(jī)。掃描條件：120kV，200mAs，層厚0.5mm。30例患者均行橫斷掃描，患者仰臥，先掃定位片后，設(shè)定掃描計劃。掃描范圍從外耳孔至巖骨上緣，層厚及層間距均為1mm。窗寬：3000Hu；窗位：2000Hu。64排CT所見聽小骨改變按骨質(zhì)破壞方式，程度分為：消失（全部或部分）、破壞（包括聽小骨密度降低，邊緣欠光滑）、移位、關(guān)節(jié)融合固定。

1.3 免疫組織化學(xué)染色

本研究采取Envision System通用二步法檢測TNF-α，所需材料為：兔抗人TNF-α蛋白多克隆抗體，PV6000試劑盒，DAB顯色試劑（以上試劑均購自北京中山生物技術(shù)有限公司）。

1.4 結(jié)果判斷

每個標(biāo)本隨機(jī)選3張切片計數(shù)細(xì)胞數(shù)。在光鏡200倍下進(jìn)行陽性細(xì)胞計數(shù)，每片取3個不同的清晰視野，每個視野下陽性細(xì)胞百分率(%)＝陽性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%，取其均值±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)%。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用x2檢驗(yàn)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，探討膽脂瘤臨床CT征象與TNF-α蛋白表達(dá)的相關(guān)性，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TNF-α在膽脂瘤與正常外耳道皮膚的表達(dá)比較（表1）

表1 TNF-α在膽脂瘤與正常外耳道皮膚的表達(dá)比較

2.2 膽脂瘤中聽小骨的CT破壞程度與TNF-α表達(dá)的關(guān)系比較（表2）

結(jié)果顯示TNF-α蛋白表達(dá)水平與HRCT掃描聽小骨骨質(zhì)破壞程度密切相關(guān)，隨著TNF-α蛋白表達(dá)水平增加骨質(zhì)破壞程度也隨著加重，組間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

表2 膽脂瘤中聽小骨的CT破壞程度與TNF-α表達(dá)的關(guān)系比較

3 討論

TNF-α在中耳膽脂瘤骨質(zhì)破壞中的作用及與HRCT掃描骨質(zhì)破壞程度的關(guān)系：腫瘤壞死因子（TNF）于1975年發(fā)現(xiàn)，1985年學(xué)者們根據(jù)其細(xì)胞來源和分子結(jié)構(gòu)不同，將TNF分為α型和β型，TNF-α主要由脂多糖（LPS）等激活的單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生[1]。

TNF-α是由157個氨基酸殘基組成，分子量為17kD的疏水性蛋白質(zhì)，在70℃條件下1h即失活，對蛋白酶敏感。天然TNF-α主要由激活的巨噬細(xì)胞和一些細(xì)胞系，如HL-60、U937等細(xì)胞所分泌，在另外一些條件下其本身也能產(chǎn)生TNF-α的基因。TNF-α受體分布廣泛，多種腫瘤細(xì)胞或細(xì)胞系可表達(dá)TNF-α受體，許多正常細(xì)胞，如成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、人胚肺細(xì)胞、鼠肝細(xì)胞等均表達(dá)一定水平的TNF-α受體[2]。

TNF-α的生物學(xué)活性相當(dāng)廣泛，已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過其名稱本身的含義，除了具有抗腫瘤作用外，其對免疫反應(yīng)、機(jī)體代謝、炎癥反應(yīng)具有重要的調(diào)節(jié)和介導(dǎo)作用。TNF-α可直接殺傷或抑制某些腫瘤細(xì)胞；可促進(jìn)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）表達(dá)主要組織相容性復(fù)合體I（MHC-I）類抗原并增強(qiáng)其殺傷活性；可刺激單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等分泌IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α本身及其他趨化因子等；可以增強(qiáng)中性粒細(xì)胞等的吞噬和殺傷病原體的作用，促進(jìn)肝細(xì)胞合成急性期蛋白，引起發(fā)熱等[3]。

Kinoshita[4]與Chodynik[5]分別用ELISA和免疫放射法證實(shí)了膽脂瘤上皮組織中TNF-α水平明顯高于外耳道上皮的TNF-α水平。本實(shí)驗(yàn)用免疫組化法在蛋白水平對膽脂瘤組織和正常外耳道皮膚的TNF-α表達(dá)情況進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，膽脂瘤組織的TNF-α表達(dá)水平明顯高于正常外耳道皮膚，兩者之間具有顯著性差異，結(jié)果與Kinoshita等人基本一致。

同時結(jié)果顯示，不同聽小骨骨質(zhì)破壞程度CT表現(xiàn)組間TNF-α的表達(dá)水平有差異，并且發(fā)現(xiàn)膽脂瘤組織中TNF-α的表達(dá)水平與膽脂瘤的骨質(zhì)破壞程度呈相關(guān)性，即膽脂瘤上皮中TNF-α的表達(dá)水平越高，膽脂瘤導(dǎo)致的骨質(zhì)破壞范圍越廣，累計的部位越多。因此，我們可以推斷，TNF-α是膽脂瘤引起骨質(zhì)破壞的一個關(guān)鍵因素。所以，觀察膽脂瘤組織中的TNF-α的表達(dá)水平既可以進(jìn)一步幫助明確診斷，又可以為判斷預(yù)后提供有力根據(jù)。

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