寇晉萍，方 穎，余 立，王俊秋（北京市藥品檢驗(yàn)所，北京市 100035）

哌拉西林屬青霉素類廣譜抗生素，通過(guò)干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成而起殺菌作用，主要用于銅綠假單胞菌和各種革蘭陰性桿菌所致的感染。但哌拉西林易被細(xì)菌產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶水解而產(chǎn)生耐藥性；舒巴坦除對(duì)奈瑟菌科和不動(dòng)桿菌有抗菌活性外，對(duì)其他細(xì)菌無(wú)抗菌活性，但是舒巴坦對(duì)耐藥菌株產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶具有不可逆性的抑制作用，因此可防止耐藥菌對(duì)青霉素類和頭孢菌素類抗生素的破壞，與青霉素類和頭孢菌素類具有明顯的協(xié)同作用[1]。注射用哌拉西林鈉/舒巴坦鈉作為一種能有效降低細(xì)菌耐藥作用，且具有良好協(xié)同作用的復(fù)方廣譜抗生素制劑，在臨床上被廣泛應(yīng)用，但隨之而來(lái)的是其不良反應(yīng)日益顯現(xiàn)[2]。該品種在北京地區(qū)也有若干生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品在售，為有效監(jiān)控藥品質(zhì)量，保證用藥安全，并為臨床醫(yī)師選擇藥品提供依據(jù)，2010年北京市藥品監(jiān)督管理局對(duì)注射用哌拉西林鈉/舒巴坦鈉進(jìn)行了評(píng)價(jià)性抽驗(yàn)。本次抽驗(yàn)，從各醫(yī)療機(jī)構(gòu)及經(jīng)營(yíng)企業(yè)共得到4個(gè)生產(chǎn)企業(yè)的21批次樣品，涵蓋1.25、1.5、2.5、3.0 g 4種規(guī)格。筆者分別按現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)及非標(biāo)文獻(xiàn)[3]方法進(jìn)行了質(zhì)量考察，詳細(xì)如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20A高效液相色譜（HPLC）系統(tǒng)，包括LC-20AT泵、SIL-20AC自動(dòng)進(jìn)樣器、CBM-20A控制器、SPD-M 20A檢測(cè)器、CTO-20A柱溫箱及LC-Solution工作站（日本島津公司）；BP211D電子天平（德國(guó)Sartorius公司）。

1.2 試藥

哌拉西林標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：130419-200103，純度：90.5%）、舒巴坦標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：130430-200906，純度：89.7%）均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；乙腈、甲醇均為色譜純，四丁基氫氧化銨、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、醋酸、磷酸均為分析純；注射用哌拉西林鈉/舒巴坦鈉由國(guó)內(nèi)A、B、C和D企業(yè)生產(chǎn)，具體情況詳見(jiàn)表1。

表1 樣品概況Tab 1 General information of samp les

2 方法與結(jié)果

2.1 采用現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)情況

注射用哌拉西林鈉/舒巴坦鈉各國(guó)藥典均未收載，因此沒(méi)有統(tǒng)一的法定標(biāo)準(zhǔn)。目前國(guó)內(nèi)批準(zhǔn)生產(chǎn)的企業(yè)有8家，批準(zhǔn)文號(hào)17個(gè)，各自有相應(yīng)的國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)。本次抽驗(yàn)涉及4個(gè)生產(chǎn)企業(yè)、5個(gè)批準(zhǔn)文號(hào)，對(duì)應(yīng)使用5個(gè)國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)[4～8]的比較詳見(jiàn)表2；各標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置的檢驗(yàn)項(xiàng)目和方法基本一致，限度要求略有差異，經(jīng)分別檢驗(yàn)后，具體結(jié)果詳見(jiàn)表3（注：所有批次的鑒別（液相色譜、鈉鹽）及一般檢查項(xiàng)目（酸度、溶液的澄清度與顏色、平均裝量、可見(jiàn)異物、不溶性微粒、無(wú)菌、熱原、細(xì)菌內(nèi)毒素等）均符合規(guī)定，故在表中未列出；Y4、YG4、Y3、YG3指標(biāo)準(zhǔn)比色編號(hào)）。

經(jīng)檢驗(yàn)，所有批次的樣品均符合現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 采用非標(biāo)文獻(xiàn)方法的檢驗(yàn)情況

哌拉西林為β-內(nèi)酰胺類抗生素，該類化合物由于結(jié)構(gòu)中含有β-內(nèi)酰胺環(huán)，非常容易開環(huán)而形成開環(huán)物，造成分子間和分子內(nèi)的聚合而形成高分子聚合物。研究[9]顯示，β-內(nèi)酰胺類抗生素引發(fā)的速發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)與藥物中存在的高分子雜質(zhì)有密切的關(guān)系，其含量的高低與臨床不良反應(yīng)發(fā)生率相關(guān)性很高。通過(guò)對(duì)藥品中高分子雜質(zhì)的控制，可以有效減緩速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)第2階段的進(jìn)行，減少臨床不良反應(yīng)的發(fā)生[10]。β-內(nèi)酰胺類抗生素中存在的高分子雜質(zhì)主要包括外源性高分子雜質(zhì)（主要為生產(chǎn)過(guò)程中引入的蛋白類或肽類大分子物質(zhì)）和內(nèi)源性高分子雜質(zhì)（即聚合物）2大類，外源性的高分子雜質(zhì)可以通過(guò)控制生產(chǎn)原料有效排除，因此控制聚合物這類高分子雜質(zhì)的含量是降低過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生率的有效手段?，F(xiàn)行檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)的檢查方法均不能有效地檢測(cè)到聚合物這類高分子雜質(zhì)，因此現(xiàn)采用王成剛等[3]建立的高效分子排阻色譜法考察注射用哌拉西林鈉/舒巴坦鈉中高分子雜質(zhì)的含量，測(cè)定方法及結(jié)果如下：

表2 注射用哌拉西林鈉/舒巴坦鈉各檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)比較Tab 2 Comparison of the specification standard of Piperacillin sodium/sulbactam sodium for injection

表3 不同生產(chǎn)企業(yè)樣品的質(zhì)量考察結(jié)果Tab 3 Evaluation results of the products from different manufacturers

2.2.1 色譜條件。色譜柱：TSK-GEL G2000SWXL（30 cm×7.8mm，5μm）；流動(dòng)相：0.01mol·L－1醋酸銨（用稀氨溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0）-乙腈＝90∶10，流速：0.6m L·m in－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm。

2.2.2 測(cè)定方法及結(jié)果。精密稱取本品適量，加水溶解制成每1m L中含哌拉西林1mg的溶液，作為供試品溶液；另精密稱取哌拉西林標(biāo)準(zhǔn)品適量，加甲醇適量使溶解，加水稀釋制成每1m L中約含10μg的溶液，作為對(duì)照溶液。精密量取對(duì)照溶液20μL，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%～25%，立即精密量取供試品溶液與對(duì)照溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，保留時(shí)間小于哌拉西林的各高分子雜質(zhì)總量以哌拉西林計(jì)。所有樣品的測(cè)定結(jié)果詳見(jiàn)表4。

從表4可見(jiàn)，不同生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品中高分子雜質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果具有明顯差異。

3 討論

（1）2010年北京地區(qū)市售的復(fù)方抗生素制劑注射用哌拉西林鈉/舒巴坦鈉，經(jīng)考察所有批次樣品均符合現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，不同企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量略有差異，主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：①性狀不同：不同的生產(chǎn)工藝造成產(chǎn)品的性狀不同，主要分為直接無(wú)菌分裝生產(chǎn)的粉末狀固體和溶解后冷凍干燥制成的疏松塊狀物。②水分差異：各生產(chǎn)企業(yè)工藝控制的程度以及包裝不同，造成藥品水分含量的差異。③有關(guān)物質(zhì)含量差異：與生產(chǎn)工藝有關(guān)，根據(jù)樣品性狀與有關(guān)物質(zhì)含量之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系，可以看出冷凍干燥的制備工藝使成品中雜質(zhì)含量水平較低，似更適合本品的生產(chǎn)。④無(wú)水物含量：由于各生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品中哌拉西林和舒巴坦的比例不同（生產(chǎn)企業(yè)A二者比例為2∶1，其他各生產(chǎn)企業(yè)二者比例為4∶1），因此每1mg中的含量水平不同。

表4 不同生產(chǎn)企業(yè)樣品中高分子雜質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果比較Tab 4 Results of content determ ination of high molecular im purities in products from differentmanufacturers

（2）我國(guó)現(xiàn)行法定檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中均未控制哌拉西林中高分子雜質(zhì)的含量，而此次在21批產(chǎn)品中均檢出了高分子雜質(zhì)，含量在0.42%～2.66%之間，不同生產(chǎn)企業(yè)的樣品存在明顯差異。根據(jù)前述，高分子雜質(zhì)是引起不良反應(yīng)中過(guò)敏反應(yīng)的主要原因。通過(guò)10 000例臨床試驗(yàn)[10]結(jié)果顯示，同類抗生素的高分子雜質(zhì)含量低于某一限度時(shí)（青霉素V鉀＜0.2%、阿莫西林＜0.1%、氟氯西林＜1.5%等），對(duì)于青霉素過(guò)敏史患者的過(guò)敏反應(yīng)發(fā)生率處于較低水平，為0.2%～0.7%。注射用哌拉西林鈉/舒巴坦鈉的不良反應(yīng)發(fā)生率日漸上升，據(jù)統(tǒng)計(jì)[2]，其中有1/3的不良反應(yīng)為過(guò)敏反應(yīng)，因此更應(yīng)該嚴(yán)格控制樣品中易引起過(guò)敏反應(yīng)的高分子雜質(zhì)含量。建議在檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中增加哌拉西林高分子雜質(zhì)含量檢查項(xiàng)。

[1]孫明杰，呂華沖，王 霆.注射用哌拉西林鈉/舒巴坦鈉（2∶1）[J].中國(guó)新藥雜志，2007，16（13）：1 061.

[2]董 濤.32例注射用哌拉西林舒巴坦鈉（2∶1）不良反應(yīng)分析[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，6（29）：121.

[3]王成剛，劉海濤，王俊秋，等.不同生產(chǎn)企業(yè)注射用哌拉西林鈉/舒巴坦鈉的質(zhì)量考察[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志，2010，26（11）：839.

[4]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBH21102005[S].2005.

[5]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBH21472005[S].2005.

[6]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBH02642004[S].2004.

[7]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBH04382005[S].2005.

[8]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBH16532005[S].2005.

[9]金少鴻，胡昌勤.β-內(nèi)酰胺類抗生素過(guò)敏反應(yīng)研究進(jìn)展[J].中國(guó)新藥雜志，1994，3（4）：38.

[10]胡昌勤.抗菌藥中高分子雜質(zhì)的特性和抗菌藥過(guò)敏反應(yīng)（上）[J].中國(guó)藥師，2006，9（3）：238.