馬新民 趙俊華

（吉林省白城市食品藥品檢驗所，吉林 白城 137000）

云芝肝泰顆粒由多孔菌科真菌云芝干燥子實體粗提取物制成的混懸性顆粒，收載于《衛(wèi)生部藥品標準》十三冊[1]。本品有免疫調(diào)節(jié)劑，臨床上主要用于治療慢性活動性肝炎。處方中云芝的主要成分有云芝多糖、三萜類成分，其他有核苷類、甾醇類、生物堿類等，2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷為云芝肝泰顆粒的主要指標之一[2]。高效液相色譜法有很高分離能力、所達到的靈敏度極高、應用也非常廣泛。應用高效液相色譜法測定云芝肝泰顆粒中2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，測定準確、快捷、可信。

1 儀器與材料

日本島津LC-2010A高效液相色譜儀，（包括二元梯度泵、紫外線檢測器）。甲醇為色譜純（USA DIKMA-PURE：LOT：57440）；2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品110844-200505（中國生物制品檢定所）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑：乙腈∶水（24∶76）為流動相；流速0.8mL/min；柱溫：室溫；進樣量10μL；檢測波長320nm；理論板數(shù)按2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面積計算不低于1500。

2.2 對照品溶液制備

取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成每lmL含20μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液制備

精密稱取裝量差異項下的供試品，精密稱取2.5g，置25mL棕色量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，離心，取上清液，即得。

2.4 陰性對照溶液

取本品處方缺云芝的其他組分，按“2.3”項下方法制備。

2.5 線性關(guān)系考察

圖1 干擾試驗

精密吸取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品溶液（0.02010mg/mL）4.0μL、7.0μL、10.0μL、13.0μL、16.0μL，分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，以峰面積積分值為縱坐標，進樣量為橫坐標（mg）繪制標準曲線，回歸方程為：Y=3968841.3X-2682.5，r=0.99999，結(jié)果表明2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在8.04～32.16μg/mg范圍內(nèi)具備良好的線性關(guān)系。

2.6 干擾試驗

取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液，按上述色譜條件測定，陰性樣品無干擾。結(jié)果見圖1。2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷出峰位置在3min左右，與其他組分均能達到基線分離。

2.7 精密度試驗

精密吸取同一2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品溶液（0.02010mg/mL），10μL，重復進樣5次，測定峰面積，RSD為0.4%（n：5）。結(jié)果表明，精密度較好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液（批號20080303），分別于配置后0，2，4，6，8，12，18h進樣，依次進行測定，最終結(jié)果表明，供試品溶液在18h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 重復性試驗

同一批號樣品（批號20080303）稱取5份，分別按上述方法測定，RSD為1.0%結(jié)果表明此法重復性良好。

2.10 回收試驗

采用加樣回收法，精密稱取同一批號樣品（批號20080303，含量43μg/袋，）9份各約1.25g，分別精確加入對照品適量，按“2.3”項下方法及色譜條件，進行測定，并計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗結(jié)果表

2.11 樣品測定結(jié)果

按照“2.2”、“2.3”的處理方法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定3批樣品，測定結(jié)果見表2。

表2 樣品測定結(jié)果表

3 結(jié) 論

通過紫外分光光度法與樣品HPLC法測定樣品含量對比，HPLC法更適合，方法簡便，重現(xiàn)性較好，靈敏度極高，從而準確可行。

[1]WSB-2527-97,衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑(第十三冊)[S].1997.

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:化學工業(yè)出版社,2005.