林 威 陳素娟 (福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院干部病房，福建 福州 35000)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎 (rheumatoidarthritis，RA)發(fā)病機(jī)制可能與遺傳、細(xì)菌與病毒感染、機(jī)體免疫功能紊亂、環(huán)境及激素等有關(guān)〔1〕。近年來證據(jù)表明B淋巴細(xì)胞與多種自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，但B淋巴細(xì)胞在RA發(fā)病機(jī)制中的作用一直存在爭(zhēng)議〔2〕。白細(xì)胞分化抗原 (CD)19是B細(xì)胞表面所特有的CD抗原分子，在B細(xì)胞分化及成熟的全過程中均表達(dá)〔3〕，其分子表達(dá)可代表B淋巴細(xì)胞水平。而CD23是B細(xì)胞活化和克隆性增生的標(biāo)志之一〔4〕，因此外周血CD23+/CD19+細(xì)胞的含量可代表活化B淋巴細(xì)胞的水平。本研究通過分析外周血B淋巴細(xì)胞相關(guān)表面標(biāo)記CD19、CD23的表達(dá)與RA患者疾病活動(dòng)度指標(biāo)的相關(guān)性，評(píng)估CD19+CD23+B淋巴細(xì)胞檢測(cè)在反映病情嚴(yán)重程度和監(jiān)測(cè)病情活動(dòng)性、指導(dǎo)臨床用藥方面潛在的價(jià)值，并進(jìn)一步探討B(tài)淋巴細(xì)胞在RA發(fā)病機(jī)制中的作用，為臨床治療方案的選擇提供理論依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 選擇2008年4月至2009年10月我院收治的50例RA患者為研究對(duì)象(RA組)，均符合1987年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)制定的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除其他結(jié)締組織病;其他原因引起的嚴(yán)重的肝、腎疾病;其他原因引起的血液、內(nèi)分泌系統(tǒng)病變;各種感染性疾病或惡性腫瘤等患者。其中男16例，女34例;年齡20～70〔平均(50.9±4.7)〕歲;病程 0.5～28年，平均(4.8±2.5)年。另選擇同期健康體檢者20例為對(duì)照組，性別、年齡均與RA組患者相匹配。

1.2 方法

1.2.1 B淋巴細(xì)胞相關(guān)表面標(biāo)記CD19、CD23的檢測(cè) RA組患者均于入院時(shí)抽取清晨空腹靜脈血3 ml;正常對(duì)照組于體檢時(shí)抽取清晨空腹靜脈血3 ml。3 000 r/min離心15 min，棄上清，留取沉淀細(xì)胞并打散，轉(zhuǎn)入流式管中，應(yīng)用流式細(xì)胞儀(美國(guó)貝克曼公司)檢測(cè)外周血B淋巴細(xì)胞相關(guān)表面標(biāo)記CD19、CD23的表達(dá)。淋巴細(xì)胞分離液、破膜打孔液、異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC)標(biāo)記-抗人CD19單克隆抗體、藻紅蛋白(phycoerythrin，PE)標(biāo)記-抗人CD23單克隆抗體及同型對(duì)照等均購(gòu)自美國(guó)貝克曼公司。

1.2.2 疾病活動(dòng)度指標(biāo) 收集RA組患者的臨床資料和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，包括晨僵時(shí)間、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)(個(gè)，采用28關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)法)、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)(個(gè)，采用28關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)法)、疾病活動(dòng)指數(shù)28(DAS28)、紅細(xì)胞沉降率(ESR)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)、類風(fēng)濕因子(RF)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件，資料數(shù)據(jù)以表示，兩組之間比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)資料用Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 RA組患者和對(duì)照組外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+表達(dá)率 RA組患者外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+細(xì)胞百分率均明顯較正常對(duì)照組顯著升高(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+表達(dá)率比較(，%)

表1 兩組外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+表達(dá)率比較(，%)

與對(duì)照組比較:1)P＜0.05

組別 n CD19+ CD23+ CD23+/CD19+RA組 50 12.64±2.931) 9.25±2.171) 5.84±1.481)對(duì)照組20 6.37±1.74 2.46±0.78 1.95±0.62

2.2 RA患者外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+表達(dá)率與DAS的相關(guān)性 相關(guān)性分析顯示，CD19+表達(dá)率與晨僵時(shí)間、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、RF、PLT、DAS28呈正相關(guān)(均P＜0.05)，而與ESR、CRP無明顯相關(guān)關(guān)系(均P＞0.05)。CD23+及CD23+/CD19+表達(dá)率與晨僵時(shí)間、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、ESR、CRP、RF、PLT、DAS28 呈顯著正相關(guān)關(guān)系(均P＜0.05)，見表2。

表2 RA患者外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+表達(dá)率與疾病活動(dòng)度指標(biāo)的相關(guān)性

3 討論

以往對(duì)RA發(fā)病機(jī)制的研究多集中在成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞或細(xì)胞因子等方面，而B淋巴細(xì)胞作為抗體介導(dǎo)的體液免疫反應(yīng)的始動(dòng)細(xì)胞，其與RA發(fā)病機(jī)制的關(guān)系近幾年逐漸受到重視。首先是組織病理學(xué)發(fā)現(xiàn)在RA患者滑膜組織中存在著豐富的 B細(xì)胞〔5〕，同時(shí) Brezinschek等〔6〕研究發(fā)現(xiàn)利妥昔單抗用于治療難治性RA患者取得較好的療效，其作用機(jī)制是損耗外周血中的B細(xì)胞，提示B細(xì)胞可能在RA的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。因此研究B淋巴細(xì)胞與RA的關(guān)系對(duì)進(jìn)一步認(rèn)識(shí)RA發(fā)病機(jī)制及研發(fā)新的免疫治療具有重要價(jià)值。

CD19是分子量為95 kD的Ig超家族成員，屬于B細(xì)胞限制性抗原，其表達(dá)高低可代表外周血B淋巴細(xì)胞水平，功能類似于T細(xì)胞表面的CD4/CD8，具有協(xié)同受體的作用，參與調(diào)控B細(xì)胞的活化和增殖及信號(hào)傳導(dǎo)過程。目前認(rèn)為CD19+B細(xì)胞可能在RA的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用〔7，8〕。CD23是分子量為45 kD的低親和力IgE Fc受體〔9〕，其分子結(jié)構(gòu)包括一個(gè)由23個(gè)氨基酸殘基組成的胞漿內(nèi)N末端、21個(gè)殘基的跨膜區(qū)和277個(gè)殘基的膜外區(qū)。CD23是重要的白細(xì)胞分化抗原，同時(shí)也是T細(xì)胞來源的低分子量B細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體，主要在B細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、激活的單核/巨噬細(xì)胞、部分T細(xì)胞等細(xì)胞膜上表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)CD23的持續(xù)性表達(dá)反映了B淋巴細(xì)胞克隆性增生，常作為B淋巴細(xì)胞的激活分化標(biāo)志之一〔10，11〕，而外周血CD23+/CD19+細(xì)胞的表達(dá)則代表活化B淋巴細(xì)胞水平。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn) RA組患者外周血 CD19+、CD23+及CD23+/CD19+細(xì)胞百分率均較正常對(duì)照組顯著升高，提示B淋巴細(xì)胞的異常表達(dá)在RA發(fā)病機(jī)制中可能起一定作用。同時(shí)分析RA患者外周血CD19+、CD23+及CD23+/CD19+細(xì)胞表達(dá)與疾病活動(dòng)度指標(biāo)的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)CD19+細(xì)胞表達(dá)與晨僵時(shí)間、關(guān)節(jié)壓痛數(shù)、關(guān)節(jié)腫脹數(shù)、RF、PLT、DAS28呈正相關(guān)，而與ESR、CRP無明顯相關(guān)關(guān)系，說明在一定程度上，CD19+表達(dá)反映了RA病情活動(dòng)性。CD23+及CD23+/CD19+細(xì)胞表達(dá)率與疾病活動(dòng)度指標(biāo)均呈顯著正相關(guān)關(guān)系，說明 CD23+及CD23+/CD19+與RA的病情活動(dòng)關(guān)系密切，CD23+及CD23+/CD19+檢測(cè)可為RA的病情監(jiān)測(cè)提供一定的參考。推測(cè)可能是RA患者體內(nèi)各種調(diào)控因素刺激B淋巴細(xì)胞持續(xù)增殖，CD23分子高表達(dá)，而CD23高表達(dá)對(duì)B細(xì)胞分化、增殖和成熟有促進(jìn)作用，使B細(xì)胞呈現(xiàn)高反應(yīng)性而異?；罨⒑铣珊头置诖罅孔陨砜贵w，加重RA患者的自身免疫紊亂，促進(jìn)患者病情發(fā)展。這也進(jìn)一步證明了B細(xì)胞在RA發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要作用，且與疾病活動(dòng)有關(guān)，但具體作用機(jī)制仍有待深入研究。

綜上所述，外周血中CD19+、CD23+及CD23+/CD19+淋巴細(xì)胞的異常表達(dá)在RA發(fā)病機(jī)制中可能起一定作用，且與疾病活動(dòng)性相關(guān)。因此，聯(lián)合監(jiān)測(cè)CD19+、CD23+及CD23+/CD19+細(xì)胞的表達(dá)率對(duì)RA病情監(jiān)控具有一定價(jià)值，且探討B(tài)淋巴細(xì)胞在RA發(fā)病中的具體作用機(jī)制，有望為應(yīng)用生物制劑治療RA以及新藥的開發(fā)提供理論依據(jù)。

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