朱 丹 潘 穎 柴新燕 李妞妞 王鐵延 (吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院婦產(chǎn)科，吉林 長春 30033)

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率現(xiàn)逐年升高，已占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的第2位;而子宮內(nèi)膜癌的病因目前尚不十分清楚。研究表明，Maspin(mammary serine protease inhibitor)是一種新的候選腫瘤抑制基因，屬于絲氨酸蛋白酶抑制劑(serpin)超家族。C-erbB-2則被認(rèn)為是一種原癌基因，又稱neu基因或HER2，有表皮生長因子受體的活性與功能〔1〕。近年來，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這兩種基因及其表達(dá)的蛋白產(chǎn)物maspin蛋白和C-erbB-2蛋白在許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，且與宮頸癌、卵巢癌、乳腺癌等腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切〔2〕，但其與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系鮮見文獻(xiàn)報道。我們對此進(jìn)行了研究，旨在通過檢測maspin蛋白和C-erbB-2蛋白在不同的組織分級和臨床分期子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)，探討其在腫瘤轉(zhuǎn)移中的意義，為進(jìn)一步研究利用基因調(diào)整的方法抑制子宮內(nèi)膜樣腺癌的轉(zhuǎn)移奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取本院婦科2009年7月至2010年7月住院患者手術(shù)切除的子宮標(biāo)本50例。年齡46～72(平均62.2)歲。子宮內(nèi)膜樣腺癌組織30例，正常子宮內(nèi)膜組織20例。根據(jù)FIGO手術(shù)-病理分期:Ⅰ期17例，Ⅱ期8例，Ⅲ期5例。組織學(xué)分級:1級9例，2級15例，3級6例。肌層浸潤深度≤1/2者22例，肌層浸潤深度＞1/2者8例。無淋巴轉(zhuǎn)移23例，有淋巴轉(zhuǎn)移7例。術(shù)前均未行放療、化療及各種激素治療。

1.2 試劑及實驗 鼠抗人Maspin單克隆抗體(工作效價1:50)，由福建邁新生物技術(shù)有限公司提供;鼠抗人C-erbB-2單克隆抗體及免疫組化(Immuno-Bridge+)超敏PV-90000檢測試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司;DBA酶底物顯色試劑盒(DBA-0031)用已知Maspin、C-erbB-2蛋白陽性染色的乳腺癌石蠟切片為陽性對照。采用免疫組織化學(xué)S-P方法(鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化酶法)檢測Maspin、C-erbB-2蛋白在正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中的表達(dá)情況。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片4張，厚4 μm，1張行HE染色;1張用PBS液代替一抗作為陰性對照。2張分別作Maspin及C-erbB-2免疫組織化學(xué)染色。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 采用SP免疫組織化學(xué)法，均設(shè)陰性及陽性對照，采用雙盲法觀察結(jié)果。Maspin蛋白陽性表達(dá)是細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)黃色、棕黃色或棕褐色顆粒。C-erbB2蛋白陽性表達(dá)是細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色、棕黃色或棕褐色顆粒。蛋白表達(dá)結(jié)果采用半定量積分法判定，每張切片均為高倍鏡下(400×)隨機(jī)觀察10個視野，計數(shù)100個細(xì)胞，計算其平均陽性百分率。以陽性細(xì)胞百分率和染色強(qiáng)度為判定標(biāo)準(zhǔn)。按染色強(qiáng)度評分:無色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分;按平均陽性細(xì)胞百分率評分:0分為陽性細(xì)胞≤25%，1分為陽性細(xì)胞26% ～50%，2分為陽性細(xì)胞51% ～75%，3分為陽性細(xì)胞＞75%。綜合評分為將染色強(qiáng)度和平均陽性細(xì)胞百分率兩者積分的乘積結(jié)果評分:0分為陰性(－)，1和2分為弱陽性(+)，3和4分為中度陽性()，6和9分為強(qiáng)陽性()。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SAS9.1.3統(tǒng)計軟件進(jìn)行χ2檢驗和非參數(shù)Spearman等級相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 Maspin蛋白在不同子宮內(nèi)膜組織中表達(dá) Maspin蛋白在正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中陽性表達(dá)率分別為85%、43.33%，呈下降趨勢，兩組間差異顯著(P＜0.05)。

2.2 C-erbB-2蛋白在不同子宮內(nèi)膜組織中表達(dá) C-erbB-2蛋白在正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中陽性表達(dá)率分別為10%、56.67%，呈升高趨勢，兩組間差異顯著(P＜0.05)。

2.3 Maspin蛋白、C-erbB-2蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌臨床病理特征的關(guān)系 Maspin蛋白與子宮內(nèi)膜樣腺癌的手術(shù)-病理分期、組織學(xué)分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05);C-erbB-2蛋白與子宮內(nèi)膜樣腺癌的手術(shù)-病理分期、組織學(xué)分級及肌層浸潤深度有關(guān)(P＜0.05)，見圖1及表1。

圖1 免疫組織化學(xué)染色陽性結(jié)果(SP，×200)

表1 Maspin與C-erbB-2蛋白陽性表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌臨床病理特征的關(guān)系〔n(%)〕

2.4 Maspin和C-erbB-2蛋白在子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 在30例子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中Maspin蛋白陽性表達(dá)而C-erbB-2陰性表達(dá)者占11例，Maspin蛋白陰性表達(dá)而C-erbB-2陽性表達(dá)者占15例，二者同為陽性表達(dá)者占2例，二者同為陰性表達(dá)者占2例。經(jīng)非參數(shù)Spearman等級相關(guān)分析表明，二者呈負(fù)相關(guān)(r= －0.728 5，P＜0.01)。

3 討論

Maspin蛋白在正常子宮內(nèi)膜細(xì)胞中高表達(dá)，而癌細(xì)胞中不表達(dá)或僅少量表達(dá)〔3〕。本研究結(jié)果同樣證實Maspin蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織中的陽性表達(dá)率高于子宮內(nèi)膜樣腺癌組織，提示Maspin蛋白可能發(fā)揮腫瘤抑制的作用。Secord等〔4〕通過對晚期上皮性卵巢癌中Maspin蛋白的研究，認(rèn)為腫瘤的Maspin蛋白表達(dá)缺失是進(jìn)展和死亡風(fēng)險增加的一項獨立預(yù)后指標(biāo)。提示Maspin蛋白的表達(dá)缺失可能在子宮內(nèi)膜癌變中起作用，其可能作為子宮內(nèi)膜癌早期診斷有價值的分子生物學(xué)指標(biāo)。

有學(xué)者研究表明Maspin蛋白與子宮內(nèi)膜樣腺癌的臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)〔5〕。本研究證實Maspin蛋白與子宮內(nèi)膜樣腺癌的手術(shù)-病理分期、組織學(xué)分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05);提示Maspin蛋白可能與子宮內(nèi)膜樣腺癌的演變有關(guān)，并在一定程度上可反映腫瘤的惡性程度。此外，本研究還證實，子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中，Maspin蛋白陰性表達(dá)或低表達(dá)者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移傾向較高，肌層侵襲能力較強(qiáng)，由此可以推測Maspin蛋白的低表達(dá)可能增加了腫瘤細(xì)胞通過基底膜的能力，促進(jìn)了子宮內(nèi)膜樣腺癌的進(jìn)展、侵襲和轉(zhuǎn)移，但其與肌層浸潤深度無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。支持了maspin蛋白發(fā)揮腫瘤抑制作用的論點，并且提示其在腫瘤演變進(jìn)展中起一定作用。

研究顯示正常子宮內(nèi)膜組織中C-erbB-2蛋白表達(dá)率明顯低于子宮內(nèi)膜癌組織〔6〕。本研究結(jié)果與上述文獻(xiàn)一致。說明C-erbB-2蛋白可能在子宮內(nèi)膜樣腺癌的演變過程中起一定作用。提示maspin蛋白、C-erbB-2蛋白的檢測可能作為子宮內(nèi)膜癌早期診斷有價值的分子生物學(xué)指標(biāo)。

Loffe〔7〕等發(fā)現(xiàn)C-erbB-2蛋白陽性表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床分期、組織學(xué)分級有關(guān)。本研究證實C-erbB-2蛋白與子宮內(nèi)膜樣腺癌的手術(shù)-病理分期、組織學(xué)分級及肌層浸潤深度有關(guān)(P＜0.05)。這與文獻(xiàn)報道結(jié)論一致。提示其陽性表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌的分化程度及惡性程度有關(guān)。因此，其可作為預(yù)測子宮內(nèi)膜樣腺癌惡性程度的一個指標(biāo)。

有關(guān)Maspin蛋白和C-erbB-2蛋白在腫瘤組織中表達(dá)的相關(guān)性已有文獻(xiàn)對其進(jìn)行報道。研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌細(xì)胞中Maspin蛋白表達(dá)與C-erbB-2蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)〔8〕。孫永杰等〔9〕對乳腺癌相關(guān)特異基因的研究顯示乳腺組織中CerbB-2蛋白表達(dá)與Maspin蛋白表達(dá)有顯著差異，CerbB-2蛋白陰性組Maspin蛋白表達(dá)率高。Maspin蛋白陽性表達(dá)與C-erbB-2蛋白陽性表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。本研究結(jié)果提示兩者與子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移過程有關(guān)。其可能機(jī)制如下:①腫瘤發(fā)展依靠血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)促進(jìn)腫瘤新生血管生成，C-erbB-2原癌基因的激活能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分泌VEGF〔10〕，Maspin則通過血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、成纖維細(xì)胞因子(bFGF)抑制腫瘤生成血管。②Maspin蛋白通過其細(xì)胞表面作用靶點(uPA/uPAR)表達(dá)特性可直接作用于 C-erbB-2蛋白受體，阻斷C-erbB-2蛋白的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，減少VEGF釋放。③C-erbB-2蛋白擴(kuò)增和過度表達(dá)會導(dǎo)致正常細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，Maspin蛋白抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移，調(diào)節(jié)細(xì)胞對促凋亡因子的敏感性。因此，聯(lián)合檢測Maspin蛋白和C-erbB-2蛋白可作為預(yù)測子宮內(nèi)膜樣腺癌的惡性程度的指標(biāo)。

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