王艷麗 朱繼紅 從云鳳 張小猛 王霽雪 劉 姝 (吉林大學(xué)第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，吉林 長(zhǎng)春 3002)

卵巢癌常伴有腹水的發(fā)生，卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移可能與水通道蛋白(AQP)有關(guān)，其中AQP-1與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)〔1〕。AQP-1與卵巢腫瘤的關(guān)系國(guó)內(nèi)外至今報(bào)道很少。本實(shí)驗(yàn)主要觀察AQP抑制劑乙酰唑胺是否對(duì)卵巢癌細(xì)胞有抑制作用。

1 資料與方法

1.1 主要試劑 IMDM培養(yǎng)液，Hanks液，乙酰唑胺，磷酸鹽緩沖液(PBS)，青霉素鈉，硫酸鏈霉素，胎牛血清均購(gòu)自Sigma公司;人卵巢癌細(xì)胞株由大連醫(yī)科大學(xué)饋贈(zèng)。

1.2 方法 將培養(yǎng)好的卵巢癌細(xì)胞調(diào)整濃度到1×105/ml，分成實(shí)驗(yàn)組3瓶和對(duì)照組1瓶，每3 d換液一次，待細(xì)胞生長(zhǎng)到對(duì)數(shù)期，實(shí)驗(yàn)組3瓶更換成乙酰唑胺濃度分別為1×10－8mol/L、5×10－8mol/L、10×10－8mol/L 的培養(yǎng)液，對(duì)照組培養(yǎng)液不變，分別收集24、48、72 h的細(xì)胞，用預(yù)冷的70%乙醇固定，調(diào)整細(xì)胞濃度1×106/ml，碘化丙啶(PI)染色，進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測(cè)。每組重復(fù)3次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，結(jié)果數(shù)據(jù)以表示，采用單因素方差分析進(jìn)行比較。

2 結(jié)果

對(duì)照組和3個(gè)不同濃度乙酰唑胺實(shí)驗(yàn)組分別于24、48、72 h檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，重復(fù)3次。①與對(duì)照組比較，不同濃度實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率均增加，且隨著藥物濃度增加，細(xì)胞凋亡率也在增加，差異有顯著性(P＜0.05)。②各實(shí)驗(yàn)組間比較，差異均有顯著性(P＜0.05)。③隨著時(shí)間增加，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組所有的細(xì)胞凋亡率增加，24 h與48 h之間，24 h與72 h之間，48 h與72 h之間，差異均有顯著性(P＜0.05)。見表1。

表1 對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞凋亡率(，%)

表1 對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞凋亡率(，%)

與對(duì)照組比較:1)P＜0.05;與1×10－8/L組比較:2)P＜0.05，與5×10－8/L組比較:3)P＜0.05;與24 h比較:4)P＜0.05;與48 h比較:5)P＜0.05

2.86±0.19 3.72±0.23 5.28±0.89 1×10－8/L組 12.82±1.211) 21.52±1.551)4) 30.63±2.141)4)5)5×10－8/L組 17.88±1.171)2) 39.89±3.151)2)4)51.66±3.821)2)4)5)10×10－8/L組__21.93±4.011)2)3)52.02±2.491)2)3)4)73.05±2.641)2)3)4)5)24 h 48 h 72 h對(duì)照組_____組別

3 討論

1988年Agre等首次發(fā)現(xiàn)AQP-1，1997年正式命名。多種腫瘤組織亦表達(dá)AQP-1，其可能與腫瘤細(xì)胞的起源、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)〔1～3〕。在微血管內(nèi)皮細(xì)胞也發(fā)現(xiàn)AQP-1高度表達(dá)，推測(cè)AQP-1高表達(dá)也可能與腫瘤血管新生有關(guān)〔4，5〕。

在目前發(fā)現(xiàn)的AQP中AQP-1是唯一表達(dá)于腎臟近曲小管上皮細(xì)胞的AQP，對(duì)尿液濃縮和稀釋過程起重要作用〔6〕。至今仍未發(fā)現(xiàn)AQP-1特異的調(diào)節(jié)劑。碳酸酐酶抑制劑是唯一的一類作用于腎臟近曲小管的利尿劑，乙酰唑胺是其中應(yīng)用最廣泛的一種。由于其作用位點(diǎn)與AQP-1的組織分布一致，考慮乙酰唑胺抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用系下調(diào)AQP-1表達(dá)所致。

乙酰唑胺通過下調(diào)AQP-1表達(dá)可以抑制腫瘤細(xì)胞侵襲能力和轉(zhuǎn)移。有研究將不同濃度乙酰唑胺應(yīng)用于荷瘤肺癌模型小鼠，觀察乙酰唑胺對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的影響，測(cè)定轉(zhuǎn)移瘤與小鼠體重和肺重比率及轉(zhuǎn)移瘤的數(shù)量，并利用肽質(zhì)量指紋譜分析證實(shí)荷瘤小鼠肺組織中AQP-1蛋白水平顯著高于正常組織;采用乙酰唑胺治療后，AQP-1表達(dá)明顯降低，顯著抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，肺轉(zhuǎn)移抑制率為83.9%。免疫組織化學(xué)定位也證實(shí)AQP-1在小鼠腫瘤毛細(xì)血管和小靜脈內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)，用乙酰唑胺治療后毛細(xì)血管和小靜脈內(nèi)皮細(xì)胞上AQP-1表達(dá)明顯減少〔7〕。

細(xì)胞凋亡是在細(xì)胞內(nèi)外各種信號(hào)刺激下，激活細(xì)胞自身自殺程序而引起的。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)細(xì)胞死亡是最早使細(xì)胞內(nèi)水經(jīng)水通道外溢的事件，推測(cè)AQPs的功能與細(xì)胞凋亡有密切關(guān)系〔8〕。本實(shí)驗(yàn)采用流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)卵巢癌細(xì)胞的凋亡率，對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行定量觀察。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，應(yīng)用乙酰唑胺的各實(shí)驗(yàn)組，細(xì)胞凋亡率均明顯增加，且隨著乙酰唑胺藥物濃度增加，細(xì)胞凋亡率也在增加;隨著時(shí)間增加，細(xì)胞凋亡率也增加。證明乙酰唑胺對(duì)體外培養(yǎng)的卵巢癌細(xì)胞的AQP-1有抑制作用，且與時(shí)間、濃度有關(guān)〔9〕。本實(shí)驗(yàn)與此研究結(jié)果相同。

本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用流式細(xì)胞儀方法證實(shí)乙酰唑胺可以抑制體外培養(yǎng)的卵巢癌細(xì)胞的增殖，推測(cè)應(yīng)用AQP抑制劑可以抑制腫瘤生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移，至少可能部分抑制腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移，希望為卵巢癌的臨床治療提供新的思路和方法。

1 Moon C，Soria JC，Jang SJ，et al.Involvement of aquaporins in colorectal carcinogenesis〔J〕.Oncolgene，2003;22(43):6699-703.

2 Mobasheri A，Airley R，Hewitt SM，et al.Heterogeneous expression of the aquaporin 1(AQP1)water channel in tumors of the prostate，breast，ovary，colon and lung:a study using high density multiple human tumor tissue microarrays〔J〕.Int J Oncol，2005;26(5):1149-58.

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5 Polverini PJ.Angiogenesis in health and disease:insights into basic mechanisms and therapeutic opportunites〔J〕.J Dent Educ，2002;66(8):962-75.

6 Zhang R，Skach W，Hasegawa H，et al.Cloning functional analysis and cell localization of a kidney proximal tubule water transpoter homologous to CHIP 28〔J〕.J Cell Biol，1993;120(2):359-69.

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9 母生梅，暨荀鶴，馬 兵，等.乙酰唑胺對(duì)大鼠腎臟近曲小管上皮細(xì)胞作用的差異蛋白分析及其與AQP1抑制的關(guān)系〔J〕.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2003;38(3):169-72.