魏述永 史麗娟 吳俊偉 蔣智鋼 喬培紅

（西南大學(xué)榮昌校區(qū)動物醫(yī)學(xué)系 重 慶 402460）

雞大腸桿菌病是由禽致病性大腸桿菌(avian pathgenicity Escherichia coli，APEC)引起的急性或慢性細(xì)菌性傳染病，對養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展構(gòu)成了越來越嚴(yán)重的威脅[1]。禽致病性大腸桿菌的血清型復(fù)雜，僅國內(nèi)報道的就有80余種之多，尚無理想的疫苗預(yù)防，臨床多采用有效的抗菌藥物進(jìn)行防治。由于抗菌藥物特別是飼料藥物添加劑的持續(xù)、廣泛及不合理使用，雞源大腸桿菌耐藥現(xiàn)象已十分嚴(yán)重[2-5]。本試驗(yàn)進(jìn)行飼料添加金霉素預(yù)混劑對雞源大腸桿菌金霉素敏感性影響的監(jiān)測，為雞源大腸桿菌耐藥性控制提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物

選擇隔離飼養(yǎng)1周后的健康榮昌本地土雞9只（11日齡），編號，依據(jù)隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)隨機(jī)分為無藥對照組、正常劑量組和高劑量組，每組3只。根據(jù)《飼料藥物添加劑使用規(guī)范》規(guī)定的使用劑量，以每10kg飼料中添加金霉素預(yù)混劑（以金霉素含量計(jì)算）2.5g為正常組劑量、5g為高劑量組，充分混勻飼喂動物。

1.2 主要試劑

麥康凱瓊脂、營養(yǎng)肉湯為杭州天和微生物試劑有限公司產(chǎn)品；金霉素為浦城正大生化有限公司產(chǎn)品；金霉素預(yù)混劑為文登市雨澤銀豐動物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品。

1.3 大腸桿菌分離與鑒定

按微生物學(xué)常規(guī)方法進(jìn)行[6]。分別于飼喂后 0、1、5、10、15、20、25、30、35、40 和45天無菌操作采集雞泄殖腔糞便，進(jìn)行大腸桿菌分離鑒定。

1.4 金霉素敏感性測定

采用試管二倍稀釋法，每個樣品取3株細(xì)菌進(jìn)行金霉素敏感性測定。

2 試驗(yàn)結(jié)果

不同飼喂時間金霉素對雞源大腸桿菌MIC值測定結(jié)果見表1。

3 分析與討論

3.1 用藥時間對藥物敏感性的影響

從結(jié)果上可以看出，隨著飼喂時間的延長，用藥組雞源大腸桿菌的耐藥性從第20天開始呈現(xiàn)不同程度的上升趨勢，對照組無明顯變化。曾有專家懷疑國內(nèi)動物源細(xì)菌耐藥性的泛濫與飼料藥物添加劑不合理使用有關(guān)，但迄今為止仍未見相關(guān)研究報道。從本研究結(jié)果來看，當(dāng)按金霉素預(yù)混劑規(guī)定使用的正常劑量及高劑量添加飼喂后，20天內(nèi)，雞源大腸桿菌對金霉素的敏感性無明顯變化，說明20天內(nèi)，如果臨床嚴(yán)格遵守《飼料藥物添加劑使用規(guī)范》的要求使用，使用金霉素預(yù)混劑引起大腸桿菌耐藥性的風(fēng)險較小，而如果延長使用時間，耐藥性風(fēng)險就會加大。臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）規(guī)定的耐藥性產(chǎn)生標(biāo)準(zhǔn)為MIC值升高4倍。從本研究結(jié)果來看，從飼喂后第25天開始，每次采樣受試的18株細(xì)菌中約有10株MIC值升高4倍，當(dāng)然，由于樣本數(shù)量較小，還不足以判定大多數(shù)細(xì)菌已經(jīng)產(chǎn)生耐藥性，但已經(jīng)可以說明隨著金霉素預(yù)混劑的使用，大腸桿菌對金霉素的敏感性有降低的趨勢，應(yīng)當(dāng)引起有關(guān)部門重視。

3.2 使用劑量對敏感性的影響

本試驗(yàn)設(shè)定預(yù)混劑使用劑量分別為正常劑量及加倍劑量。從試驗(yàn)結(jié)果來看，對于無藥對照組和正常劑量組，給定假設(shè)平均差為0（即H。：μ1=μ2）t=-6.838236697，P 雙尾 （T≤t）=6.91839×10-10＜0.01，表明無藥對照組與正常劑量組差異極顯著；對于無藥對照組和高劑量組，給定假設(shè)平均差為0（即H。：μ1=μ2）t=-6.118523741，P 雙尾（T≤t）=1.94435×10-8＜0.01，表明無藥對照組與高劑量組差異極顯著；對于正常劑量組和高劑量組，給定假設(shè)平均差為0（即 H。：μ1=μ2）t=0.474462701，P 雙尾 （T≤t）=0.636225527＞0.05，差異不顯著。說明金霉素預(yù)混劑使用后，與對照組相比，無論是正常劑量還是加倍劑量，都會導(dǎo)致大腸桿菌對金霉素的敏感性顯著降低，而兩個劑量組之間沒有顯著差異，說明用藥劑量的多少與細(xì)菌對金霉素敏感性的變化沒有密切的關(guān)系。加大劑量使用飼料藥物添加劑不是導(dǎo)致細(xì)菌敏感性降低的主要原因，而延長使用時間引起耐藥性的風(fēng)險更大。

表1 受試菌MIC值結(jié)果

[1]師福山,趙德明.禽大腸桿菌的分離與16S rRNA的鑒定[J].中國畜牧獸醫(yī),2009,36(2):1l1-l13.

[2]羅玲,楊峻,艾地云,等.湖北省部分肉雞場致病性大腸埃希菌的分離鑒定及耐藥性分析[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2011,32(3):128-131.

[3]何敏,陳敏,黃立,等.河南信陽地區(qū)集約化雞場大腸桿菌耐藥性調(diào)查[J].養(yǎng)禽與禽病防治,2010,12:2-4.

[4]孟志敏,李連缺.河北省雞源大腸桿菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)分析[J].養(yǎng)禽與禽病防治,2010,10:7-9.

[5]王春光,蔣桂娥,劉廷玉,等.雞源大腸桿菌對24種抗菌藥的藥敏監(jiān)測 [J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2008,7:84-84.

[6]姚火春.獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2006:36-42.