萬(wàn)維香
(江蘇省泰州市第一人民醫(yī)院,江蘇 泰州 225300)
舒冠膠囊由制何首烏、川芎、黃精(制)、紅花、淫羊藿、五靈脂(醋制)、丹參7味藥材的提取物加適宜的輔料制成,制何首烏為方中主藥,含有大黃素、大黃素甲醚、大黃酚等蒽醌類脂溶性成分和2,3,5,4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷等二苯乙烯類水溶性等成分[1]。由于大黃素、大黃素甲醚等在水提醇沉工藝中轉(zhuǎn)移率較低,而2,3,5,4'-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷遇光極不穩(wěn)定,此兩類成分不宜作為含量控制指標(biāo)。因此筆者參考文獻(xiàn)[2],選擇淫羊藿的主要成分淫羊藿苷作為指標(biāo)成分,采用準(zhǔn)確、靈敏的高效液相色譜法進(jìn)行含量測(cè)定,現(xiàn)報(bào)道如下。
Model 510型液相色譜儀(美國(guó)Waters);TG332A型電子天平(湘西儀器儀表廠)。淫羊藿苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)為0737-200111,供含量測(cè)定用);舒冠膠囊(自制,批號(hào)分別為041206,041207,041208);所用甲醇為色譜純,其余試藥與溶劑均為分析純;水為重蒸水。
色譜柱:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的Shimpack-ODS柱(150 mm×4.5 mm,5 μm);檢測(cè)波長(zhǎng):270 nm;流動(dòng)相:甲醇-0.05%磷酸溶液(55∶45);流速:1 mL/min。在此色譜條件下,色譜圖見(jiàn)圖1,淫羊藿苷峰理論板數(shù)為2518,拖尾因子 T=1.106,分離度R=1.94,符合規(guī)定。
圖1 高效液相色譜圖
取本品內(nèi)容物約0.2 g,精密稱定,置具塞三角燒瓶中,精密加入流動(dòng)相50 mL,稱定質(zhì)量,加熱使溶解,放冷,再稱定質(zhì)量,用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,即得供試品溶液。按照處方組成,取除淫羊藿以外的其余輔料,按制備工藝要求制成不含淫羊藿舒冠膠囊,按供試品溶液制備項(xiàng)下方法制備成陰性對(duì)照品溶液。取淫羊藿苷對(duì)照品適量,精密稱定,加流動(dòng)相制成每1 mL含25μg的對(duì)照品溶液。
陰性干擾試驗(yàn):照擬訂的色譜條件,精密吸取陰性對(duì)照品溶液20 μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。從圖1可知,陰性對(duì)照品溶液在淫羊藿苷峰位置無(wú)吸收峰,說(shuō)明陰性對(duì)照品溶液不干擾主藥的含量測(cè)定。
線性關(guān)系考察:取淫羊藿苷對(duì)照品,加流動(dòng)相制成47.6μg/mL的溶液,作為貯備液。分別精密吸取貯備液,加流動(dòng)相制成質(zhì)量濃度為 4.76,9.52,19.04,28.56,38.08,47.6μg/mL 的溶液,按上述色譜條件測(cè)定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)、淫羊藿苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)進(jìn)行回歸處理,得線性回歸方程 Y=2000000X+60496,r=0.9999。結(jié)果表明,淫羊藿苷進(jìn)樣量在 0.0952 ~ 0.952μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
精密度試驗(yàn):取對(duì)照品溶液,精密吸取20 μL,重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果的 RSD=0.97%(n=6),表明方法精密度良好。
重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批樣品6份,依法制備供試品溶液并測(cè)定淫羊藿苷含量,結(jié)果的 RSD=2.0%(n=6),表明方法重現(xiàn)性良好。
穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液,于室溫條件下放置8 h,每隔2 h進(jìn)樣1次,測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD=1.7%(n=5),表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。
加樣回收試驗(yàn):取已知含量的樣品(含量2.8 mg/粒)6份,每份約0.1 g,置具塞三角燒瓶中,分別精密加入淫羊藿苷對(duì)照品10 mL(55μg/mL,流動(dòng)相溶解),再精密加入流動(dòng)相 40 mL,稱定質(zhì)量,加熱使溶解,放冷,再稱定質(zhì)量,用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液,依法測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表1。
分別精密量取10批樣品適量,按溶液制備方法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液,精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各20 μL,注入液相色譜儀,依法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。
表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)
表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(mg/粒,n=10)
2000年版《中國(guó)藥典(一部)》[3]規(guī)定淫羊藿藥材含淫羊藿苷(C33H40O15)不少于0.5%,本品每粒含淫羊藿藥材0.6 g,理論上本品每粒含淫羊藿苷應(yīng)不低于3 mg。實(shí)測(cè)本品10批樣品,淫羊藿苷含量為2.0~3.6 mg/粒;穩(wěn)定性試驗(yàn)中,含量基本穩(wěn)定??紤]到生產(chǎn)上的波動(dòng)性,故暫訂本品淫羊藿苷含量不低于1.8 mg/粒[4-5]。
取淫羊藿苷對(duì)照品適量,加流動(dòng)相制成每1 mL含10μg的溶液,在250~300 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描,結(jié)果本品在269 nm波長(zhǎng)處有最大吸收,參考中國(guó)藥典淫羊藿苷的檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm,故確定270 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。
比較了 53 ∶47,56∶44,55∶45不同配比的甲醇-0.05%磷酸溶液作為流動(dòng)相,結(jié)果以55∶45所得色譜圖較優(yōu),基線回落良好。
方法學(xué)考察結(jié)果表明,所建立的含量測(cè)定方法簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng),能控制產(chǎn)品質(zhì)量。
[1]郭艷玲,王玉珍,陳再興,等.高效液相色譜法測(cè)定舒冠膠囊中丹參酮ⅡA含量[J].中藥材,2004,27(5):379-380.
[2]梁生旺,王淑美,馮素香,等.RP-HPLC測(cè)定冠心舒膠囊中丹酚酸B及芍藥苷的含量[J].中成藥,2007,29(3):462-465.
[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2000:122,229,268.
[4]權(quán)迎春,鄭光浩,關(guān)麗萍.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào)[J].延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào),2007,30(2):108-110.