呂小波，黃春球，楊東加，鄧 林

(云南植物藥業(yè)有限公司研發(fā)中心，云南 昆明 650109)

功能失調(diào)性子宮出血(dysfunctional uterine bleeding，DUB)是指下丘腦-垂體-卵巢軸神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)機(jī)制失常所致的子宮異常出血。國外報道其發(fā)病率為22%［1］，云南紅藥(Yumnan Hongyao)是云南植物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的特色品種，處方中主要藥物為云南特產(chǎn)的民間中草藥，主要由三七、重樓、紫金龍、制黃草烏、玉葡萄根和滑葉跌打等10味中藥組成，具有止血鎮(zhèn)痛、活血散瘀和祛風(fēng)除濕等功效，對風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、胃潰瘍出血和功能性子宮出血等多種病癥有顯著的療效。本實驗用妊娠大鼠灌胃米非司酮和米索前列醇，造成早孕大鼠不完全流產(chǎn)模型［1-2］，觀察云南紅藥對子宮出血模型大鼠的影響及其對大鼠血漿血栓烷 A2(thromboxane A2，TXA2)和前列環(huán)素 (epoprostenol，PGI2)含量的影響，進(jìn)一步探討該藥物止血的作用機(jī)制，為云南紅藥的臨床用藥提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物

SD 大鼠，雌性(未孕)，體質(zhì)量250～300 g，由昆明醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，動物許可證號:SCXK(滇)2005-0008。

1.2 藥物與試劑

云南紅藥膠囊，批號:20080702，購自云南植物藥業(yè)有限公司;宮血寧膠囊，批號:20090805，購自云南白藥集團(tuán)股份有限公司;米非司酮片，批號:090503;米索前列醇片，批號:100201，均購自浙江仙琚制藥股份有限公司;大鼠TXA2酶聯(lián)免疫分析試劑盒，批號:100301，購自上海希美生物科技有限公司;大鼠前列環(huán)素酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒，批號:E90727Ra，購自武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司。

1.3 儀器

LXJ2I型離心機(jī)，上海醫(yī)用分析儀器廠產(chǎn)品;三用電熱恒溫水浴箱，北京長安科學(xué)儀器廠產(chǎn)品;旋渦混合器，浙江樂城電器廠產(chǎn)品;550酶標(biāo)儀，美國Bio-Rad公司產(chǎn)品;AT2501/10萬電子天平，瑞士Mettler公司產(chǎn)品;AMAX-200型全自動血凝分析儀，德國美創(chuàng)公司產(chǎn)品。

1.4 大鼠功能失調(diào)性子宮出血模型的制備

參照文獻(xiàn)［1-2］方法將大鼠按雌∶雄2∶1合籠，次晨檢查雌鼠陰栓與陰道涂片，以發(fā)現(xiàn)陰栓或陰道涂片有精子為妊娠第1天，于懷孕第7天8:00 ig給予米非司酮8.3 mg·kg-1，于18:00時ig給予米索前列醇100 μg·kg-1，造成早孕大鼠不完全流產(chǎn)模型。

1.5 劑量設(shè)計

云南紅藥膠囊的用量為一次2～3粒，一日3次，每粒 0.25 g，則人每天最大用量為 2.25 g，人體質(zhì)量以60 kg 計，人用劑量為0.0375 g·kg-1，大鼠等效劑量以5.5倍計算(按體表面積換算)，則大鼠劑量為0.206 g·kg-1。所以，本實驗云南紅藥劑量分別為 0.4，0.2 和 0.1 g·kg-1。

宮血寧膠囊的用量為一次1～2粒，一日3次，每粒0.13 g，則人每天最大用量為0.78 g，人體質(zhì)量以60 kg計，人用劑量為0.013 g·kg-1，大鼠等效劑量以5.5倍計算(按體表面積換算)，則大鼠宮血寧劑量為0.072 g·kg-1。

1.6 藥物的配制

稱取云南紅藥膠囊內(nèi)容物2.0 g，加少量生理鹽水使其混懸后，轉(zhuǎn)移至50 ml量瓶，加生理鹽水至刻度，搖勻，即得云南紅藥高劑量混懸液(質(zhì)量濃度為40 g·L-1);分別稱取云南紅藥膠囊內(nèi)容物1.0和0.5 g，同法制得云南紅藥 0.2 和 0.1 g·kg-1混懸液(質(zhì)量濃度分別為 20 g·L-1和 10 g·L-1)。

1.7 動物分組和給藥

將健康未孕的SD雌性大鼠100只與雄性大鼠于17:00時按2∶1比例合籠，次日上午8:00進(jìn)行陰道檢查，以涂片鏡檢發(fā)現(xiàn)精子為妊娠第1天，取受孕大鼠60只，隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為正常對照組，模型組，陽性對照組，云南紅藥0.4，0.2和0.1 g·kg-1組。除正常對照組外，其余各組動物均按1.4項方法造模。造模成功后，于妊娠第8日各組動物開始ig給藥，每天1次，連續(xù)7 d。陽性對照組大鼠ig給予宮血寧膠囊0.072 g·kg-1，云南紅藥組大鼠分別 ig給予云南紅藥 0.4，0.2和0.1 g·kg-1，正常對照組、模型組 ig給予等量生理鹽水。大鼠妊娠第14天，末次給藥后1 h，股動脈放血處死大鼠，取血檢測各項指標(biāo)。

1.8 凝血指標(biāo)的檢測

采用全自動血凝分析儀測定凝血酶原時間(prothrombin time，PT)，活化部分凝血活酶時間(activated partial thromboplastin time，APTT)，凝血酶時間(thrombin time，TT)，血漿纖維蛋白原(fibrinogen，F(xiàn)IB);血漿TXA2和PGI2均采用試劑盒測定，采用固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行檢測。

1.9 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 云南紅藥對功能失調(diào)性子宮出血模型大鼠凝血指標(biāo)的影響

如表1所示，與正常對照組相比，模型組大鼠的PT，APTT，TT和FIB有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01);與模型組比較，云南紅藥 0.4和0.2 g·kg-1組及陽性對照組能明顯縮短子宮出血模型大鼠的PT，APTT和TT，能明顯增加子宮出血模型大鼠的 FIB(P ＜0.05，P ＜0.01);云南紅藥0.1 g·kg-1組能明顯縮短子宮出血模型大鼠的 PT和TT，(P＜0.05)但對APTT和FIB沒有明顯影響。云南紅藥組與陽性對照組相比沒有明顯差異，云南紅藥0.4，0.2 和 0.1 g·kg-1組之間呈現(xiàn)一定劑量-效應(yīng)關(guān)系，但組間沒有明顯差異。

表1 云南紅藥對功能失調(diào)性子宮出血模型大鼠凝血指標(biāo)的影響Tab.1 Effect of Yunnan Hongyao on thrombin indicators in dysfunctional uterine bleeding rats

2.2 云南紅藥對子宮出血模型大鼠血漿TXA2和PGI2的影響

與正常對照組大鼠比較，模型組大鼠在造模后，血漿TXA2的含量明顯降低，而PGI2的含量明顯升高(P ＜0.01)。云南紅藥 0.4 和 0.2 g·kg-1組及陽性對照組能明顯增加子宮出血模型大鼠血漿TXA2的水平、降低PGI2的水平，與模型組相比有顯著差異(P ＜0.01，P ＜0.05)，而云南紅藥低劑量組無顯著差異。與陽性對照組相比，云南紅藥0.4，0.2和0.1 g·kg-1組沒有明顯差異。云南紅藥 0.4 和0.1 g·kg-1之間有顯著差異(P ＜0.05)，并呈現(xiàn)明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。結(jié)果見表2。

表2 云南紅藥對功能失調(diào)性子宮出血模型大鼠血漿血漿血栓烷A2(TXA2)和前列環(huán)素(PGI2)的影響Tab.2 Effect of Hunnan Hongyao on serum thromboxane A2(TXA2)and epoprostenol(PGI2)in dysfunctional uterine bleeding rats

3 討論

TXA2是由前列環(huán)素 H2(prostaglandin H2，PGH2)經(jīng)血栓素合成酶的作用生成，主要在血小板微粒體合成與釋放，亦有報道TXA2的合成來源于血管內(nèi)皮細(xì)胞(vascular endothelial cell，VEC)釋放的花生四烯酸(AA)轉(zhuǎn)移至血小板微粒體內(nèi)合成TXA2再釋放出來［3］。TXA2是目前所知體內(nèi)合成的最強(qiáng)的縮血管物質(zhì)之一，同時TXA2可抑制血小板膜上的腺苷環(huán)化酶，使cAMP的生成減少，促進(jìn)血小板活化、聚集，促進(jìn)血栓形成。另一種是PGI2，它是由PGH2在前列環(huán)素合酶的作用下生成。PGI2主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，能抑制ADP、膠原、AA等誘導(dǎo)的血小板聚集和釋放，同時擴(kuò)張血管。PGI2在防止血小板在血管局部的聚集和血栓形成方面有重要的作用［4］。當(dāng)血小板活化后釋放 TXA2，通過刺激TXA2受體，升高胞內(nèi)Ca2+離子濃度，產(chǎn)生各種生物學(xué)效應(yīng):血小板激活與積聚，血細(xì)胞黏附、血管收縮等。因此，TXA2和PGI2的平衡維持了適當(dāng)?shù)墓诿}張力和血小板內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，對控制正常的止血機(jī)制及防止血栓形成具有重要的病理生理意義［5-9］。當(dāng)TXA2生成增加或PGI2產(chǎn)生減少時，就可導(dǎo)致血小板活化，促進(jìn)血栓形成，產(chǎn)生止血作用。

本實驗結(jié)果顯示，云南紅藥對功能失調(diào)性子宮出血模型大鼠的凝血指標(biāo)具有顯著作用，充分顯示出其止血的功效，其作用機(jī)制可能與促進(jìn)TXA2的合成和抑制PGI2的合成有關(guān)。

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