何 欣，唐敏然，何光耀

（1．廣州計量檢測技術(shù)研究院，廣東 廣州 510030；2.中山大學，廣東 廣州 510080）

0 引 言

苯丁錫（fenbutatin oxide）是高效的感溫型殺螨劑，殘效期長，在國內(nèi)已經(jīng)實現(xiàn)了工業(yè)化生產(chǎn)，并投入使用[1]，其化學結(jié)構(gòu)式如圖1所示。GB 2763-2005《食品中農(nóng)藥最大殘留限量》對梨果類和柑橘類中苯丁錫的最大殘留限量為5mg/kg[2]。苯丁錫常見的分析方法主要有比色法[3]、碘容量法[4]和氣相色譜法[5]。由于苯丁錫是有機錫的氧化物，沸點高，不能直接進行氣相色譜分析，所以對苯丁錫進行測定主要是通過化學反應(yīng)將有機錫轉(zhuǎn)化成無機錫或氯化衍生物，再進行GC-FPD或GC-MSD測定[6-9]，也有采用正相高效液相色譜法對苯丁錫進行了定量分析研究的報道[10]。由于苯丁錫具有特殊的物理性質(zhì)，它難溶于大多數(shù)的有機溶劑和水，易溶于氯代烷烴、苯、丙酮，所以給反相高效液相分析帶來了很大的困難，國內(nèi)尚無苯丁錫反相高效液相分析方法的報道。反相高效液相色譜法（RP-HPLC）較正相高效液相色譜法（NP-HPLC）、氣相色譜法（GC）等其他分析方法，具有操作簡便、無需衍生化、回收率高等特點。

圖1 苯丁錫的化學結(jié)構(gòu)式

1 實驗部分

1.1 儀器和設(shè)備

Agilent 1100高效液相色譜儀，配置VWD紫外檢測器和Chemstation工作站；Mettler Toledo公司的SevenEasy型pH計；超聲波振蕩器；微孔過濾器濾膜孔徑約0.45μm。

1.2 化學試劑

苯丁錫標樣由國家標準物質(zhì)研究中心提供的農(nóng)藥標準物質(zhì)，純度為99.5%；乙腈和甲醇均為HPLC級，由Merck公司提供；二氯甲烷（色譜純），由天津市津科精細化工研究所提供；氯化鈉（分析純），由天津市塘沽化學試劑廠提供；鹽酸、磷酸、醋酸和醋酸銨均為分析純，由北京化工廠提供。全部水相均經(jīng)過安譜公司的0.45μm水相濾膜過濾。

1.3 色譜條件

Agilent色譜柱ZORBAX SB-C18，150mm×4.6mm i.d.，5 μm，流動相為乙腈/水（0.6%NaCl，HCl調(diào)節(jié)pH=3.0）=90/10（ν/ν），柱溫為 30℃，流速為 1.0mL/min，進樣量為5 μL，檢測波長為220 nm，使用外標法定量（峰面積）。

上述色譜條件是典型參數(shù)，可根據(jù)不同儀器特點，對給定的色譜條件作適當調(diào)整，以期獲得最佳效果。典型的苯丁錫高效液相色譜圖見圖2。

2 結(jié)果和討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 溶劑的選擇

由于苯和丙酮具有較強的紫外吸收，三氯甲烷與水不能任意比例互溶，所以選擇二氯甲烷作為溶劑。

圖2 苯丁錫高效液相色譜圖

2.1.2 色譜柱的選擇

試用4種C18 色譜柱：（1）Diamonsil C18 150mm×4.6mm i.d.，5μm（Dikma）；（2）XTerra RP18，150mm×4.6mm i.d.，5 μm（Waters）；（3）ZORBAX XDB-C18，150 mm×4.6 mm i.d.，5 μm （Agilent）；（4）ZORBAX SB-C18，150 mm×4.6 mm i.d.，5 μm（Agilent）。結(jié)果表明Diamonsil C18保留時間最長，抗溶劑過載能力最強，進樣量達到20 μL也沒出現(xiàn)分峰現(xiàn)象，見圖3（a）。XTerra RP18保留時間最短，抗溶劑過載能力和峰形也較差，進樣量7μL就出現(xiàn)分峰現(xiàn)象，見圖3（b）。ZORBAX XDB-C18的峰形和抗溶劑過載能力稍優(yōu)于XTerra RP18，但仍不理想，見圖3（c）。ZORBAX SB-C18在進樣量不大于5 μL時峰形最佳，抗溶劑過載能力僅次于Diamonsil C18，見圖3（d），而且使用的pH范圍比Diamonsil C18更寬。為方便下一步進行流動相的選擇，所以選擇了ZORBAX SB-C18柱。

圖3 不同的色譜柱和進樣量對峰形的影響

2.1.3 流動相的選擇

因為苯丁錫不溶于甲醇，所以有機相選擇溶解度相對較高的乙腈。分別試驗了乙腈+醋酸胺+醋酸，乙腈+醋酸，乙腈+磷酸，乙腈+氯化鈉+鹽酸作為流動相，乙腈+醋酸胺+醋酸和乙腈+醋酸體系均出現(xiàn)拖尾，乙腈+醋酸更為嚴重，隨著pH的降低而有所改善，乙腈+磷酸體系峰形較差，乙腈+氯化鈉+鹽酸體系峰形較好。分別試驗 pH=2.0，2.5，3.0（見圖 4），結(jié)果表明pH≤3時，pH對峰形影響不大。分別試驗了乙腈+水（0.6%NaCl，HCl調(diào) pH=3.0）不同的體積配比 85+15，90+10，95+5，結(jié)果表明 90+10 的比例比較適合。

圖4 乙腈+6%NaCl-HCl=90+10（pH=2.0，2.5，3.0）

2.1.4 柱溫的選擇

測試了柱溫在20～40℃范圍內(nèi)對保留時間的影響，結(jié)果表明柱溫對苯丁錫的保留時間影響不大，隨著溫度的升高，保留時間提前，抗溶劑過載能力稍微增強，大于30℃時峰形開始變差?？紤]色譜柱的耐用性，選擇了柱溫為30℃。

2.1.5 進樣量的選擇

分別進樣 3，5，7，10μL（1mg/mL 苯丁錫-二氯甲烷溶液），3μL和5μL時峰形良好，7μL和10μL時峰形變差，10μL時前傾較嚴重，見圖3（d）。該現(xiàn)象與樣品質(zhì)量濃度無直接關(guān)系，與溶劑二氯甲烷有關(guān)，試驗了質(zhì)量濃度為0.6 mg/mL和0.2 mg/mL苯丁錫溶液，也出現(xiàn)類似情況。最終選擇了進樣量為5μL。

2.1.6 檢測波長的選擇

苯丁錫的紫外光譜圖如圖5所示，最大吸收波長為 205nm，所以分別試驗了 205，210，220，254nm 時的峰高和噪聲，結(jié)果表明220nm時信噪比最高（見表1）。

圖5 苯丁錫的紫外光譜圖

表1 波長與信噪比

圖6 苯丁錫的標準曲線

2.2 線性關(guān)系的測定

配制苯丁錫質(zhì)量濃度分別為0.01，0.03，0.07，0.10，0.30，0.70，1.00，3.00，7.00，10.00 mg/mL 一系列標準溶液，各進樣 1 μL，以峰面積（mAU·s）對組分質(zhì)量濃度（mg/mL）求得回歸方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見圖6。回歸方程為Y=1364.84X-2.99，相關(guān)系數(shù)r=0.99999，按進樣1～5μL計算，該方法的線性范圍為 2μg/mL～10mg/mL。

2.3 方法的精密度試驗

在上述色譜操作條件下，對同1批試樣進行5次平行測定，測得苯丁錫的標準偏差s為0.18，變異系數(shù)為0.36%，結(jié)果見表2。

表2 測定方法的精密度試驗

2.4 方法的準確度試驗

在已知含量的試樣中加入一定量的苯丁錫標樣，在相同色譜操作條件進行測定，苯丁錫的平均回收率為99.47%，結(jié)果見表3。

表3 測定方法的準確度試驗

2.5 方法的檢出限

以3倍信噪比計算檢出限，該方法的檢出限為0.13ng。

3 結(jié)束語

經(jīng)驗證，采用反相高效液相色譜法測定苯丁錫含量，具有操作簡便、準確度高、重現(xiàn)性好等特點，是苯丁錫原藥和制劑較為理想的分析方法。

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