陶大利

（黑龍江省農(nóng)墾乳品檢測(cè)中心，黑龍江省哈爾濱 150078 ）

葉黃素（Lutein）（3,3-二羥基-α-胡蘿卜素）是一種萜，分子式：C40H56O2,分子量：568.85。［1］它是一種廣泛存在于蔬菜、花卉、水果與某些藻類生物中的天然類胡蘿卜素，其色澤鮮艷，著色力強(qiáng)，抗氧化性好，安全無(wú)毒害，具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，被廣泛的應(yīng)用于食品、保健品、化妝品、醫(yī)藥、煙草和動(dòng)禽類飼料的多個(gè)領(lǐng)域。［2］近些年的研究表明，葉黃素是幫助眼睛發(fā)育的關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)元素，它具有過(guò)濾藍(lán)光和抗氧化的作用，是嬰幼兒的“隱形太陽(yáng)鏡”。所以葉黃素被廣泛的添加到嬰幼兒配方奶粉中。本文以GB/T23209-2008（奶粉中葉黃素的測(cè)定 液相色譜-紫外檢測(cè)器）為基礎(chǔ)，對(duì)方法進(jìn)行了改進(jìn)，提高了對(duì)奶粉中葉黃素的提取效率。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑

甲醇：色譜純；甲基叔丁基醚：色譜純；丙酮：優(yōu)級(jí)純；2,6-二叔丁基對(duì)甲酚（BHT）：純度大于99%；葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品；

1.2 儀器與材料

PE高效液相色譜儀（帶鎢燈）；分析天平：感量0. 1mg；漩渦振蕩器；高速離心機(jī)；

1.3 方法

1.3.1 處理步驟

準(zhǔn)確稱取奶粉樣品0.5-1g（精確到0.1mg）到30mL的塑料離心管中，加入5mL 40℃水充分溶劑，用鋁箔紙包裹離心管外部（避光），加入10mL含0.1%2,6-二叔丁基甲酚（BHT）的丙酮溶液，分?jǐn)?shù)次渦旋震蕩5min,使水溶液和丙酮溶液能充分混合，再超聲10min,向離心管中加入4g氯化鈉，分?jǐn)?shù)次渦旋震蕩5min，以4000轉(zhuǎn)/min，離心5min,上清液過(guò)0.45μ m有機(jī)濾膜過(guò)濾，上機(jī)。樣品含量低時(shí)可吸取上清液5mL 30℃氮?dú)獯蹈蓾饪s至近干，再用含0.1%2,6-二叔丁基甲酚（BHT）的丙酮溶液定容至1mL。

1.3.2 儀器條件

a)色譜柱：C30色譜柱4.6×250,5μm；

b)柱溫：30℃；

c)流速：1.0mL/min；

d)波長(zhǎng)：445nm；

e)進(jìn)樣量：40μL；

f）流動(dòng)相：A(甲醇)，B（甲基叔丁基醚）梯度洗脫見(jiàn)表1

1.3.3 測(cè)定條件

用葉黃素標(biāo)準(zhǔn)工作液分別進(jìn)樣，葉黃素的參考保留時(shí)間為5.47min，以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算未知樣品的濃度，進(jìn)行結(jié)果計(jì)算，用以上條件得到的葉黃素色譜圖入下圖：圖1為葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品圖譜，圖2為嬰兒配方奶粉譜圖

1.3.4 計(jì)算公式

式中 X：樣品中葉黃素的含量，μg/100g；

C:由標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得的試樣中葉黃素的濃度，μg/mL

V:試樣稀釋體積，mL；

m:試樣的質(zhì)量，g；

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

在選定的色譜條件下，將葉黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成濃度為0.05、0.1、0.2、0.4、1.0、2.0μg/mL 6個(gè)濃度系列，在此濃度范圍內(nèi)，濃度與對(duì)應(yīng)的峰面積呈線性關(guān)系，線性方程為：y=379874.03X+14289.56,相關(guān)系數(shù)R2=0.9990如圖3

2.2 精密度與重現(xiàn)性

選用含有葉黃素的嬰兒配方奶粉（育兒康幼兒配方奶粉）進(jìn)行6平行試驗(yàn)。結(jié)果如表2

2.3 回收率

選用同上的樣品（育兒康幼兒配方奶粉）分別稱取1g樣品，兩個(gè)做空白，分別在樣品中加入0.5μg、 1μg、2μg、5μg三個(gè)梯度，每個(gè)梯度做4平行（n=4）結(jié)果如表3

由表2得出，加標(biāo)量在0.5～5μg，折算成奶粉的含量為50～500μg/100g時(shí)，回收率在92.8～103.5之間，RSD%在1.2～3.5之間

2.4 檢出限

當(dāng)稱樣量為1g，樣品經(jīng)濃縮5倍，進(jìn)樣量為40μL時(shí)，以3倍信噪比S/N計(jì)算，該方法的檢出限為5μg/100g。

3 討論

由于奶粉樣品呈細(xì)小的顆粒狀，如果按照標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23209-2008中的處理方法，雖然也可以獲得較高的回收率，但不能將樣品包裹的葉黃素完全釋放出來(lái)，造成樣品的測(cè)試結(jié)果偏低很多，并且因?yàn)槿~黃素在奶粉樣品中包埋的程度不一致，使測(cè)試結(jié)果的重現(xiàn)性很差。解決這一問(wèn)題可以先用溫水將樣品充分溶解，再用丙酮溶液提取，再用氯化鈉去飽和水溶液［3］，離心使水相與丙酮溶液徹底分開(kāi)。另外葉黃素遇到光照很容易損失，所以在整個(gè)處理過(guò)程中都應(yīng)盡量避光，可以在離心管外部裹上鋁箔紙來(lái)避免光照。

本方法處理簡(jiǎn)單，易操作，回收率和重現(xiàn)性好，適合嬰兒配方奶粉中葉黃素的測(cè)定。

[1]梅益，中國(guó)百科全書(shū)（化學(xué)卷）Ⅱ［M］.北京：中國(guó)百科全書(shū)出版社，1989.1098-1099

[2]孫曉霞劉云鳳，章鵬飛，葉黃素在食品中的應(yīng)用.中國(guó)食品添加劑，1006-2513（2007）4-0127-05

[3]GB/T 5009.20-2003 食品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測(cè)量，6.2凈化