連金番，常 青，孫建麗，石 磊，王 倩

（西北農(nóng)林科技大學(xué)生命學(xué)院，陜西 楊凌 712100）

角質(zhì)層是覆蓋陸生植物表層組織的一層由角質(zhì)和表皮蠟組成的脂質(zhì)保護(hù)層。角質(zhì)層的重要組成成分角質(zhì)是由氧化的C16和C18脂肪酸構(gòu)成網(wǎng)狀的油脂聚酯[1]。嵌入和覆蓋網(wǎng)狀角質(zhì)層的表皮蠟是一類超長(zhǎng)鏈脂肪族疏水化合物[2]，嵌入角質(zhì)層的非晶體狀的表皮蠟稱作內(nèi)表皮蠟，而覆蓋在角質(zhì)層表面并形成晶體的表皮蠟稱為外表皮蠟[3]。

表皮蠟在植物生長(zhǎng)發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用，如防止由非氣孔蒸發(fā)造成的水分散失，抗寒[4]，抵抗紫外線輻射[5]，去除植物表皮表面外部水分，以降低溶于外部水分中的灰塵、花粉粒和其他有害物質(zhì)對(duì)植物表皮造成的傷害[6-7]。在抵御細(xì)菌、真菌病原體和昆蟲的入侵及植物-昆蟲相互作用方面表皮蠟也發(fā)揮重要作用[8-9]。另外表皮蠟還能提供一種花粉粒-柱頭相互作用信號(hào)使植物在適宜時(shí)期進(jìn)行授粉[10]。

氣相色譜-質(zhì)譜分析結(jié)果顯示，植物表皮蠟有100多種成分，主要包括長(zhǎng)鏈和超長(zhǎng)鏈脂肪族化合物、環(huán)狀化合物以及甾醇類化合物，這些化合物均由20～34個(gè)碳原子超長(zhǎng)鏈脂肪酸衍生而來[3]。某些植物表皮蠟質(zhì)組成成分還包括酚、固醇、環(huán)萜以及胡蘿卜素類化合物[3,11]。表皮蠟的化學(xué)組成成分和數(shù)量在同一株植物上的不同部位及不同的生長(zhǎng)發(fā)育階段也存在差異[12]。模式植物擬南芥的表皮蠟的化學(xué)組成成分主要是超長(zhǎng)鏈脂肪酸及其衍生物，如醇、酯、烷烴、醛、酮等[3,11]。

植物超長(zhǎng)鏈脂肪酸的合成是將質(zhì)體中合成的C16/C18的長(zhǎng)鏈脂肪酸在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中進(jìn)一步延伸。該延長(zhǎng)過程由位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的脂肪酸延長(zhǎng)酶復(fù)合體催化，此復(fù)合體由四個(gè)酶組成，依次催化四步反應(yīng)：①脂酰-CoA和丙二酰-CoA由3-酮脂酰-CoA縮合酶催化聚合反應(yīng)生成3-酮脂酰-CoA；②3-酮脂酰-CoA被3-酮脂酰-CoA還原酶還原生成3-羥脂酰-CoA；③3-羥脂酰-CoA由3-羥脂酰-CoA脫水酶催化脫水生成烯脂酰-CoA；④烯脂酰-CoA經(jīng)烯脂酰-CoA還原酶還原成比第一步脂酰-CoA多兩個(gè)碳原子的脂酰-CoA[13]。

生成的超長(zhǎng)鏈脂肪酸經(jīng)過一系列特異生物途徑衍生為蠟的不同組分。已有文獻(xiàn)報(bào)道，擬南芥中表皮蠟中脂肪族成分合成有兩條途徑：脫羧途徑和?；€原途徑[14]。脫羧途徑從脂酰-CoA還原酶催化超長(zhǎng)鏈脂肪酸前體生成醛開始，經(jīng)由醛脫羧酶催化生成奇數(shù)碳原子的烷烴[15]，烷烴再經(jīng)過一系列的氧化生成次級(jí)醇和酮；?；€原途徑始由對(duì)超長(zhǎng)鏈脂肪酸的還原生成初級(jí)醇[16]，部分初級(jí)醇進(jìn)一步和游離脂肪酸酯化生成蠟脂[17]。

角質(zhì)蠟?zāi)苡绊懼仓昵o表皮色澤，所以一旦蠟合成有關(guān)的基因發(fā)生突變導(dǎo)致蠟含量減少，肉眼即可識(shí)別到植株莖表皮色澤變化。在大麥和擬南芥中蠟缺失突變體稱為eceriferum（cer），而在玉米和甘藍(lán)型油菜被稱為gl。目前與擬南芥蠟合成有關(guān)的多個(gè)基因已被報(bào) 道 ， 如 CER1、 CER2、 CER3、 CER4、 CER5、CER6和CER10等，已從擬南芥基因組中克隆到cer1、cer2和cer3突變體蠟缺失表型顯著，但克隆的基因在蠟合成及運(yùn)輸中的具體作用尚不清楚[18-21]。CER4編碼的酶催化?；€原途經(jīng)的初級(jí)醇生成[22]。CER5編碼ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白負(fù)責(zé)表皮蠟的運(yùn)輸[23]。CER6和CER10分別編碼植物超長(zhǎng)鏈脂肪酸合成酶復(fù)合體的3-酮脂酰-CoA縮合酶和烯脂酰-CoA還原酶[24-25]。在大麥中分別克隆到與CER1、CER2基因相似性高的GL1和GL2基因。但是，目前對(duì)擬南芥蠟合成基因的研究還不十分完善。我們利用EMS化學(xué)誘變劑處理野生型擬南芥得到莖表皮蠟缺失突變體cera。該突變體莖色澤淺綠，果莢和植株較野生型短小。本研究對(duì)該突變體進(jìn)行掃描電鏡觀察植株莖表皮蠟晶體形態(tài)，遺傳分析，莖表皮角質(zhì)蠟化學(xué)組成成分和含量分析，為以后該基因的克隆及研究其在角質(zhì)蠟合成過程發(fā)揮的角色奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料

野生型擬南芥（Arabidopsis thaliana）：生態(tài)型Columbia（Col-0）；擬南芥突變體cera：由本實(shí)驗(yàn)室用EMS誘變得到的莖色突變株系。

1.1.2 數(shù)據(jù)庫

本試驗(yàn)所需數(shù)據(jù)信息來源于:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/,http://www.arabidop sis.org/（TAIR）和http://www.genevestigator.ethz.ch/。

1.2 方法

1.2.1 EMS處理野生型擬南芥

取2 g野生型種子（Col-0）于100 mL無菌水中，4℃過夜。加400 mL無菌水，磁力攪拌器攪拌，100 r·min-1離心1 h。加入EMS使其終濃度為0.3%（V/V），室溫，100 r·min-1離心16 h。4 ℃靜置3 d，種植材料。

1.2.2 材料種植

擬南芥在0.1%的瓊脂糖中4℃春化2～4 d后培養(yǎng)在黑土∶蛭石∶沙子（1∶1∶1）的混合土中。培養(yǎng)時(shí)在其上層罩一層塑料膜以保持濕度，當(dāng)擬南芥萌發(fā)出4～5片子葉后去掉塑料膜。16 h光照處理，8 h黑暗[26]，濕度保持在60%～70%，溫度控制在22～25℃，光照強(qiáng)度2 800 lx。

1.2.3 突變體的背景純化與遺傳分析

以擬南芥野生型Col-0為父本，突變體為母本進(jìn)行回交得到F1代，F(xiàn)1代自交得到F2代。種植并觀察F2代表型，統(tǒng)計(jì)F2代中莖淺綠色突變體和正常植株莖色的比例。

1.2.4 電子掃描顯微鏡觀察

取植株頂端2.5 cm莖包于錫箔紙中，-180℃真空放置5 min。樣品置于電子掃描顯微鏡（Hitachi S4700），2.5 kV加速電壓，觀察植株莖表皮蠟晶體。

1.2.5 莖表皮蠟提取及組分分析

將莖浸泡在含5 μL 1 μg·μL-1C24∶0烷烴的三氯甲烷中30 s，于液氮中干燥濃縮。濃縮后的樣品轉(zhuǎn)入到氣相色譜分析管中，加10 μL N，O-三氟乙酰胺和10 μL吡啶后，70℃加熱1 h，液氮干燥，加100 μL三氯甲烷，進(jìn)行氣相色譜氫焰離子化檢測(cè)（GC-FID）和氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 突變體cera的表型與遺傳分析

cera突變體是經(jīng)化學(xué)誘變劑EMS誘導(dǎo)野生型擬南芥（Col-0）篩選得到的莖色變化植株。該突變體莖表現(xiàn)為淺綠色，這種表型與蠟缺失cer系列突變體表型相似，因此命名為cera（見圖1）。另外，突變體果莢長(zhǎng)度也較野生型短并且低育，我們將突變體和cer6置于潮濕環(huán)境中培養(yǎng)，cer6果莢長(zhǎng)度恢復(fù)到野生型水平，而cera卻未恢復(fù)，這說明cera低育并不像cer1和cer6一樣，它們的低育是由于花粉粒水化導(dǎo)致的[14,18,27]。由花粉粒水化導(dǎo)致的低育植株，在潮濕環(huán)境中培養(yǎng)，生育能力可恢復(fù)到野生型水平。

為了探討該突變是否由于單基因隱性突變?cè)斐桑瑢⒑Y選到的cera突變體與野生型擬南芥（Col-0）雜交得到F1代，F(xiàn)1所有植株均表現(xiàn)野生型表型。F1自交后得到F2代，種植96株F2，其中73株表現(xiàn)野生型表型，23株表現(xiàn)cera表型，比例為3.17∶1（x2=0.0577，P＞0.7），證實(shí)該突變?yōu)閱位螂[性突變。

圖1 野生型(Col-0)和突變體ceraFig.1 Wild type and cera

2.2 掃描電子顯微鏡觀察cera突變體莖表皮蠟

為揭示cera突變體莖色澤變化是否與其莖表皮蠟含量變化有關(guān)，用掃描電鏡觀察cera突變體和野生型擬南芥的莖，結(jié)果顯示野生型莖表面布滿晶體狀表皮蠟，這些晶體有柱狀、錐狀、棒狀、傘狀等，然而cera突變體莖表面卻沒有觀察到晶體狀蠟（見圖2）。cera突變體莖表皮蠟缺失的表型與cer系列莖表皮蠟缺失表型相似，說明CERA基因可能與擬南芥莖表皮蠟的合成和運(yùn)輸有關(guān)。

圖2 野生型和突變體cera莖表皮蠟晶體分布Fig.2 Stem surface morphology of wild type(left)and cera(right)by cryo-SEM

2.3 氣相色譜氫焰離子化檢測(cè)和氣相色譜-質(zhì)譜分析cera突變體莖表皮蠟成分及含量

為進(jìn)一步揭示cera突變體莖表皮蠟的變化，采用氣相色譜氫焰離子化檢測(cè)（GC-FID）和氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）測(cè)量野生型和5株cera突變體（cera1～cera5）莖表皮總蠟的組分和含量（見圖3），結(jié)果顯示野生型擬南芥表皮幾乎檢測(cè)不到C24和C26脂肪酸，C30脂肪酸含量為0.39 μg·cm-2（1 cm2莖表面含有0.39 μg C30脂肪酸）；cera突變體C24脂肪酸和C26脂肪酸平均含量分別為0.09和0.06 μg·cm-2，所有cera突變體均檢測(cè)不到C30脂肪酸。然而在野生型和cera突變體中，都沒有檢測(cè)到C28脂肪酸。表皮蠟中脂肪族成分合成的兩種途徑中各組分含量的結(jié)果顯示，?；€原途徑中C24初級(jí)醇含量cera突變體比野生型增加約140%，但C26，C28和C30初級(jí)醇含量明顯減少，分別減少70%，94%和93%；在脫羧途徑中，cera突變體除C24和C26醛較野生型略增加外，大于C26的其他組分比野生型均有明顯的減少（見圖3）。但這些數(shù)據(jù)并不包含參與合成酯反應(yīng)的超長(zhǎng)鏈脂肪酸以及初級(jí)醇。

圖3 野生型和突變體cera莖表皮蠟化學(xué)組分與含量分析Fig.3 Stem wax composition of wild type and cera mutant

另外，cera突變體莖表皮中檢測(cè)到屬于固醇類的β-香樹脂醇，但野生型沒有檢測(cè)到，該物質(zhì)是合成固醇類化合物前體，但其與蠟合成的相關(guān)關(guān)系還沒有報(bào)道。值得一提的是，在5株cera突變體超長(zhǎng)鏈脂肪酸中，部分脫羧途徑代謝中間產(chǎn)物含量卻不一致，因此把這5株cera突變體分成A組（cera1，cera2和cera4）和B組（cera3和cera5），測(cè)量結(jié)果顯示B組含有比A組較多的C29的烷烴（＜94%），次級(jí)醇（＜81%）和酮（＜95%）。很難解釋造成這種差異的原因是因?yàn)檫z傳因素造成的這種差異還是由于其他因素，例如收集樣品并不是從同一植株采集的樣品，這些不同植株可能存在生長(zhǎng)狀況的差異。為此，我們重復(fù)將cera突變體與野生型回交得到F1，F(xiàn)1自交得到F2，測(cè)量F2莖表皮蠟脂肪族組成成分，結(jié)果與A組相似。

從擬南芥表皮蠟脂肪族組成成分碳鏈長(zhǎng)度來分析，并將酯含有的超長(zhǎng)鏈脂肪酸及醇計(jì)算在內(nèi)（見圖4）。由圖4可以看出，cera突變體中C24含量是野生型的222%，而C26和C28卻分別為33%和26%，由此得出CERA基因作用于延伸C24以上的超長(zhǎng)鏈脂肪酸。

圖4 野生型和突變體cera莖表皮超長(zhǎng)鏈脂肪族C24、C26和C28組分含量分析Fig.4 Sum amount of C24,C26and C28in wild type and cera stem wax components

3 討論

擬南芥中表皮蠟中脂肪族成分合成有兩條途徑：?；€原途徑和脫羧途徑，作為蠟合成底物的超長(zhǎng)鏈脂肪酸及其衍生物并不是均勻的分配到這兩個(gè)途徑中。Millar和Kunst等認(rèn)為，在蠟合成過程中，大部分C28和少部分C26、C30超長(zhǎng)鏈脂肪及其衍生物經(jīng)由?；€原途徑合成蠟；而大部分C30和小部分C28，C32超長(zhǎng)鏈脂肪及其衍生物經(jīng)由脫羧途徑合成蠟[13]。然而我們的測(cè)量結(jié)果卻發(fā)現(xiàn)野生型擬南芥初級(jí)醇含量C28（1.76）＞＞C26（0.97）＞C30（0.66），醛含量C30（0.57）＞＞C28（0.15）＞C26=C24=0，由此我們認(rèn)為大部分C28、C26、C24和小部分C30超長(zhǎng)鏈脂肪酸及其衍生物通過酰基還原途徑參與蠟合成，而大部分C30和少部分C24、C26、C28超長(zhǎng)鏈脂肪酸及其衍生物通過脫羧途徑參與蠟合成（見圖5）。

圖5 擬南芥莖表皮蠟合成途徑Fig.5 Proposed metabolic pathways for wax biosynthesis in Arabidopsis stems

cera突變體莖色澤淺綠，遺傳分析表明為單基因隱性突變，電鏡掃描顯示突變體莖表皮蠟晶體缺失，氣相色譜分析數(shù)據(jù)表明突變體莖表皮蠟減少是由C24以上超長(zhǎng)鏈脂肪酸供應(yīng)不足導(dǎo)致，這些性狀與cut1和cer6相仿。cer6中C26以上蠟組分減少，然而cut1中C24以上蠟組分就已經(jīng)減少，cut1突變體是將35S:antisense:CER6轉(zhuǎn)入擬南芥野生型中得來。cut1突變體中CER6及其同源基因的表達(dá)都可能有不同程度的抑制[27]。cut1卻和cera莖角質(zhì)蠟化學(xué)組分相似，即都是C24以上蠟組分明顯減少。雖然cera和cer6、cut1表型相似，但是cera所表現(xiàn)的由果莢短小導(dǎo)致的低育在潮濕環(huán)境中卻不能像cer6和cut1一樣得到恢復(fù)，這說明cera和cer6的功能可能存在差異。

野生型和cera莖表皮蠟化學(xué)組分和含量分析表明CERA基因在延長(zhǎng)24個(gè)碳原子以上的超長(zhǎng)鏈脂肪酸發(fā)揮作用。鑒于上述比較，我們對(duì)CERA基因的功能做以下分析。CERA可能是編碼超長(zhǎng)鏈脂肪酸合成酶復(fù)合體的3-酮脂酰-CoA縮合酶的CER6的等位基因；或者是不同于CER6的延伸C24超長(zhǎng)鏈脂肪酸的合成酶；或者編碼一種與CER6形成復(fù)合體的蛋白。CERA也可能在DNA、RNA或者蛋白水平調(diào)控延長(zhǎng)C24以上超長(zhǎng)鏈脂肪酸的合成酶方面發(fā)揮作用，在DNA水平上，CERA可能編碼一種影響DNA甲基化或者組蛋白修飾的酶，以此阻礙編碼延長(zhǎng)C24以上超長(zhǎng)鏈脂肪酸的合成酶的轉(zhuǎn)錄；在RNA水平，CERA可能是一種轉(zhuǎn)錄因子影響像CER6這樣的延伸過程中的合成酶的轉(zhuǎn)錄，也可能是一種類似于CER7的外切體亞基，能夠降解編碼合成酶的mRNAs[28]，或者通過micro RNA來降解與超長(zhǎng)鏈脂肪酸合成有關(guān)的mRNAs；在蛋白水平，CERA可能涉及合成酶的翻譯后修飾，例如泛素化，SUMO化，磷酸化和棕櫚化等。除了上面我們討論的CERA在C24以上超長(zhǎng)鏈脂肪酸的延伸可能的影響外，它也可能具有?；D(zhuǎn)移酶活性參與超長(zhǎng)鏈脂肪酸的延伸?？傊?，本文章的數(shù)據(jù)表明CERA基因在擬南芥莖表皮延長(zhǎng)24個(gè)碳原子以上的超長(zhǎng)鏈脂肪酸過程中發(fā)揮重要作用，這值得我們克隆該基因并作深入研究。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)莖色澤淺綠的cera突變體莖表皮蠟減少是由C24以上超長(zhǎng)鏈脂肪酸供應(yīng)不足導(dǎo)致，表明供應(yīng)擬南芥莖表皮蠟合成的C24以上超長(zhǎng)鏈脂肪酸是由特異的酶復(fù)合體催化生成。此外對(duì)野生型擬南芥莖表皮蠟各成分詳細(xì)分析表明大部分C28、C26、C24和小部分C30超長(zhǎng)鏈脂肪酸及其衍生物通過?；€原途徑參與蠟合成，而大部分C30和少部分C24、C26、C28超長(zhǎng)鏈脂肪酸及其衍生物通過脫羧途徑參與蠟合成。

[1]Kurdyukov S,Faust A,Nawrath C,et al.The epidermis-specific extracellular BODYGUARD controls cuticle development and morphogenesis in Arabidopsis[J].Plant Cell,2006,18:321-339.

[2]Walton T J.Waxes.cutin and suberin[M]//Harwood J L,Boyer J.Methods in plant biochemistry,Virginia:Academic Press,1990:106-158.

[3]Kunst L,Samuels A L.Biosynthesis and secretion of plant cuticular wax[J].Progr Lipid Res,2003,42:51-80.

[4]王多佳,蒼晶,牟永潮,等.植物抗寒基因研究進(jìn)展[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2009,40(10):134-138.

[5]Reicosky D A,Hanover J W.Physiological effects of surface waxes.I.Light reflectance for glaucous and nonglaucous Picea pungens[J].Plant Physiol,1978,62:101-104.

[6]Kerstiens G.Signalling across the divide:A wider perspective of cuticular structure-function relationships[J].Trends in Plant Science,1996(1):125-129.

[7]Barthlott W,Neinhuis C.Purity of the sacred lotus,or escape from contamination in biological surfaces[J].Planta,1997,202:1-8.

[8]Jenks M A,Joly R J,Peters P J,et al.Chemically induced cuticle mutation affecting epidermal conductance to water vapor and disease susceptibility in Sorghum bicolor(L.)Moench[J].Plant Physiol,1994,105:1239-1245.

[9]Eigenbrode S D,Espelie K E.Effects of plant epicuticular lipids on insect herbivores[J].Annu Rev Entomol,1995,40:171-172.

[10]Preuss D,Lemieux B,Yen G,et al.A conditional sterile mutation eliminates surface components from Arabidopsis pollen and disrupts cell signaling during fertilization[J].Genes Dev,1993(7):974-985.

[11]Greene P R,Ban C D.Total internal reflection Raman spectroscopy of barley leaf epicuticular waxes in vivo[J].Colloids Surfaces B,2005,45:174-180.

[12]Wettestein-Knowles P V.Biosynthesis and genetics of waxes[M]//Waxes:chemistry,molecular biology and functions.Hamilton R J.Dundee:The Oily Press.1995:131-174.

[13]Fehling E,Mukherjee K D.Acyl-CoA elongase from a higher plant(Lunaria annua):Metabolic intermediates of very-longchain acyl-CoA products and substrate specificity[J].Biochim Biophys Acta,1991 1082(3):239-246.

[14]Millar A A,Clemens S,Zachgo S,et al.CUT1,an Arabidopsis gene required for cuticular wax biosynthesis and pollen fertility,encodes a very-long-chain fatty acid condensing enzyme[J].Plant Cell,1999(11):825-838.

[15]Cheesbrough T M,Kolattukudy P E.Alkane biosynthesis by decarbonylation of aldehydes catalyzed by a particulate preparation from Pisum sativum[J].Proc Natl Acad Sci USA,1984,81:6613-6617.

[16]Kolattukudy P E.Enzymatic synthesis of fatty alcohols in Brassica oleracea[J].Arch Biochem Biophys,1971,142:701-709.

[17]von Wettstein-Knowles P M.Genetics and biosynthesis of plant epicuticular waxes[M]//Applequist L,Liljenberg C.Advances in biochemistry and physiology of plant lipids,The Netherlands:Elsevier/North Holland Biomedical Press,1979:1-26.

[18]Aarts M G M,Keijzer C J,Stiekema W J,et al.Molecular characterization of the CER1 gene of Arabidopsis involved in epicuticular wax biosynthesis and pollen fertility[J].Plant Cell,1995(7):2115-2127.

[19]Xia Y,Nikolau B J,Schnable P S.Cloning and characterization of CER2,an Arabidopsis gene that affects cuticular wax accumulation[J].Plant Cell,1996(8):1291-1304.

[20]Negruk V,Yang P,Subramanian M,et al.Molecular cloning and characterization of the CER2 gene of Arabidopsis thaliana[J].Plant Journal,1996(9):137-145.

[21]Hannoufa A,Negruk V,Eisner G,et al.The CER3 gene of Arabidopsis thaliana is expressed in leaves,stems,roots,flowers and apical meristems[J].Plant Journal,1996(10):459-467.

[22]Rowland O,Zheng H,Hepworth S R,et al.CER4 encodes an alcohol-forming fatty acyl-coA reductase involved in cuticular wax production in Arabidopsis[J].Plant Physiol,2006,142(3):866-877.

[23]Pighin J A,Zheng H,Balakshin L J,et al.Plant cuticular lipid export requires an ABC transporter[J].Science,2004,306:702-704.

[24]Hooker T S,Millar A A,Kunst L.Significance of the expression of the CER6 condensing enzyme for cuticular wax production in Arabidopsis[J].Plant Physiol,2002,129(4):1568-1580.

[25]Zheng H,Rowland O,Kunst L.Disruptions of the Arabidopsis enoyl-coA reductase gene reveal an essential role for very-longchain fatty acid synthesis in cell expansion during plant morphogenesis[J].Plant Cell,2005,17:1467-1481.

[26]劉守偉,劉士勇.擬南芥室內(nèi)培養(yǎng)技術(shù)研究[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2007,38(2):279-281.

[27]Fiebig A,Mayfield J A,Miley N L,et al.Alterations in CER6,a gene identical to CUT1,differentially affect long-chain lipid content on the surface of pollen and stems[J].Plant Cell,2000(12):2001-2008.

[28]Hooker T S,Lam P,Zheng H,et al.A core subunit of the RNA processing/degrading exosome specifically influences cuticular wax biosynthesis in Arabidopsis[J].Plant Cell,2007,19:904-913.