張海平,周建峰,任目瑾

(陜西省苗木繁育中心,陜西眉縣 722305)

海沃德獼猴桃,為新西蘭優(yōu)選品種,落葉藤本,生長勢強,果實長圓柱形,果皮綠褐色,密被灰白色長絨毛。果肉翠綠色,髓射線明顯。平均單果重90 g,最大單果重135 g,果實軟熟時可溶性固形物含量為14.7%,果酸1.41%。維生素C含量93.59mg/100 g。在室溫下可以貯放30 d左右,在冷藏條件下可貯藏6個月左右,為優(yōu)良的晚熟耐貯品種。

海沃德獼猴桃常規(guī)育苗方法為先播種后嫁接,育苗周期長達2年以上,而扦插繁殖成活率低,均不能滿足生產(chǎn)上的需要,致使其良種推廣受到很大的限制。隨著植物組織培養(yǎng)技術的不斷進步,獼猴桃組織培養(yǎng)快速繁育技術也得到了快速發(fā)展和普遍應用。采用獼猴桃莖段、葉片作為外植體材料進行組織培養(yǎng),可以快速繁殖但無菌系建立過程中污染率較高且植株易攜帶病菌。我們利用獼猴桃莖尖分生組織生長快,不易受病菌侵染的特點進行組織培養(yǎng)試驗研究,探索出一整套海沃德獼猴桃組織培養(yǎng)快速繁育技術,已應用于規(guī)模化生產(chǎn)。

1 菌系的建立

1.1 外植體的選擇

外植體材料選取環(huán)球園藝(西安)有限公司引進的新西蘭海沃德獼猴桃種苗,剪取海沃德獼猴桃母本穗條早春溫室催芽后長出的新芽或引種苗定植后抽生的幼嫩新梢。

1.2 清洗消毒

材料采回后,流水下沖洗干凈,將清洗后的外植體在無菌操作臺上先用75%酒精處理30 s,無菌水沖洗3次,然后用不同種類和濃度的消毒液進行滅菌試驗,再用無菌水分別沖洗5次。不同滅菌劑效果見表1。

表1中的試驗結果表明,不同滅菌劑的滅菌效果有差異,其中以有效氯濃度1%的次氯酸鈉消毒10 min效果最好,對切口無傷害,接種后感染率低。

1.3 誘導愈傷組織

在超凈工作臺上,于體視顯微鏡下,剝?nèi)～J猴桃莖尖分生組織,放入不同培養(yǎng)基中進行愈傷組織的誘導培養(yǎng)。莖尖分生組織的誘導培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基,設定6-BA(1.0、1.5、2.0)和 NAA(0.01、0.02、0.03)3 種不同激素濃度進行組合對照試驗,蔗糖、瓊脂以經(jīng)驗數(shù)據(jù)添加。莖尖分生組織的誘導培養(yǎng)結果見表2。

由表2可以看出,不同激素組合對愈傷組織誘導的效果不同,且差異明顯。以培養(yǎng)基組合MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01m g/L+30 g/L糖+5.0 g/L瓊脂(pH=5.8)為最適宜海沃德獼猴桃愈傷組織誘導培養(yǎng)基,誘導率最高可達84.37%。

1.4 誘導不定芽

無菌環(huán)境下,將愈傷組織轉接入不同的培養(yǎng)基中進行不定芽的誘導培養(yǎng)。不定芽的誘導培養(yǎng)基以MS作為基本培養(yǎng)基,設定6-BA(0.8、1.0)和NAA(0.1、0.2、0.3)的不同激素濃度組合試驗,蔗糖、瓊脂以常規(guī)經(jīng)驗數(shù)據(jù)添加。不定芽的誘導培養(yǎng)結果見表3。

表1 外植體表面消毒滅菌效果

表2 不同激素組合下海沃德獼猴桃愈傷組織生長量

表3 不同處理下海沃德獼猴桃不定芽誘導率

由表3可以看出,不同激素組合對不定芽誘導的效果不同。以培養(yǎng)基組合MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2m g/L+30 g/L糖+5.0 g/L瓊脂(pH=5.8)為最適宜海沃德獼猴桃不定芽誘導培養(yǎng)基,誘導率最高可達72%。

2 增殖分化培養(yǎng)

通過獼猴桃分生組織的分離和培養(yǎng),已得到獼猴桃再生芽,但是數(shù)量非常有限,還需要進行增殖分化培養(yǎng)。通過調(diào)節(jié)外源激素的絕對濃度及不同種類激素的相對配比,可提高增殖分化系數(shù)。培養(yǎng)基選用MS、1/2MS、1/3MS,分別附加不同激素濃度的 6-BA(1.0、1.5、2.0)和 NAA(0、0.05、0.1),組成9種組合的增殖分化培養(yǎng)基。培養(yǎng)條件為:光照 1 500～2 000 Lx,溫度 25 ℃,光照時數(shù)12～15 h/d。獼猴桃增殖分化培養(yǎng)試驗的結果見表4。

表4 增殖分化培養(yǎng)基對獼猴桃增殖率的影響

由表4可以看出,就培養(yǎng)基來說,基本培養(yǎng)基以MS最好,平均增值系數(shù)達到2.62,有效苗率達到 86.1%;從激素濃度來看,6-BA在1.0～2.0,NAA濃度在0～0.1時增殖分化系數(shù)有隨著激素濃度增大而增大的趨勢。結果表明:MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1m g/L+4 g/L瓊脂+25 g/L糖為獼猴桃增殖分化培養(yǎng)最理想培養(yǎng)基組合。

3 復壯培養(yǎng)

在繼代培養(yǎng)過程中,細胞分裂素濃度的增加有助于不定芽增殖分化系數(shù)的提高。但伴隨著不定芽增殖分化系數(shù)的提高,增殖分化的不定芽往往出現(xiàn)生長勢的減弱。不定芽短小、細弱,無法進行生根培養(yǎng),即使能夠生根,移栽成活率也不高,同時,也導致繼代培養(yǎng)過程中增殖分化系數(shù)的降低。對獼猴桃來說,經(jīng)過4～5次轉接繼代以后,總量增加,但分化系數(shù)已由最初3.31降為2.18,且瓶苗長勢較弱,需進行復壯培養(yǎng)。

復壯培養(yǎng)基為MS+25 g/L糖+4 g/L瓊脂。

培養(yǎng)條件為:光照 1 500～2 000 Lx,溫度25℃,光照時數(shù)12～15 h/d。

4 生根培養(yǎng)

獼猴桃無菌芽經(jīng)復壯培養(yǎng)后,選擇健壯的無菌芽轉入生根培養(yǎng),其余的無菌芽可進入再增殖循環(huán)。生根培養(yǎng)基為MS和1/2MS附加不同濃度的NAA(0.3)和IBA(0.1)見表5。

表5 不同培養(yǎng)基對獼猴桃生根的影響

不同的鹽濃度和不同的激素濃度組合的培養(yǎng)基生根試驗結果表明,雌株(KR)生根以1/2MS+IBA 0.1 m g/L+25 g/L糖+5.0 g/L瓊脂的培養(yǎng)基效果較好,生根率最高可達90.0%。

5 煉苗移栽

在培養(yǎng)室常規(guī)光照1 000～2 500 Lx,培養(yǎng)15～20 d后,已有2/3苗株新根生長出來,可移至溫室馴化煉苗。

在育苗溫室搭設塑料拱棚,選用6種不同種類基質(zhì)(見表6),過篩后加20%的甲基托布津懸浮劑1 000倍,72%的農(nóng)用鏈霉素可濕性粉劑1 500倍、2%阿維菌素乳油1 500倍溶液均勻噴灑基質(zhì),拌混均勻后,密封放置1星期備用。

逐步增加備煉瓶苗的光照強度,在煉苗前3 d先半開瓶塞,移栽前一天全開瓶塞,讓瓶苗逐漸適應溫室環(huán)境。

出瓶移栽至50孔或72孔的育苗穴盤,然后移入簡易拱棚。第一周內(nèi)光照由1 500～2 000 Lx逐步增加至 3 000～4 000 Lx,日溫 25～30℃,夜溫20～25℃,濕度75%～90%。第二周逐漸降低濕度,增加光照,穴盤苗生長約20～25 d后,待根系從穴盤下孔透出時可移至15 cm×13 cm的塑料容器,經(jīng)過半月緩苗即可移入大田培育建園。

表6 不同基質(zhì)配比對獼猴桃煉苗成活率的影響

獼猴桃組培苗不同基質(zhì)移栽試驗表明,不同基質(zhì)對組培苗移栽成活和生長均有顯著的影響作用。以進口泥炭和進口泥炭加珍珠巖為基質(zhì),移栽成活率最高,可達95%,根系發(fā)育良好,植株生長旺盛。

6 結論

(1)獼猴桃(海沃德)分生組織的選取材料為新梢莖尖,MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.01mg/L+30 g/L糖+5.0 g/L瓊脂(pH=5.8)為最適宜的海沃德獼猴桃愈傷組織誘導培養(yǎng)基,其誘導率最高可達84.37%。

(2)獼猴桃(海沃德)在增殖階段 MS+6-BA 2.0m g/L+NAA 0.1 mg/L+25 g/L糖+4 g/L瓊脂為比較理想的培養(yǎng)基組合,有效苗率達

86.1 %,增值系數(shù)為3.31。

(3)獼猴桃生根雌株(KR)以培養(yǎng)基1/2MS+IBA 0.1 mg/L+25 g/L糖+5.0 g/L瓊脂效果較好,生根率為90.0%,雄株(CH)以培養(yǎng)基MS+NAA 0.3mg/L+25g/L糖+5.0 g/L瓊脂效果理想,生根率為68.3%。

(4)獼猴桃生根煉苗基質(zhì)選用進口泥炭成活率較高,煉苗成活率可達95%左右。

獼猴桃分生組織培養(yǎng)微繁技術,其關鍵技術在分生組織無菌系的建立和組培苗生根馴化上,只要技術措施得當,通過精心管理,既可降低成本,又可快速繁殖出一定規(guī)模的無毒獼猴桃苗。

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