季志平 ,張絨仙 ,康永祥 ,康博文 ,方小艷 ,劉 欣 ,王生源

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué)林學(xué)院,陜西楊凌 712100;2.陜西省太白縣林業(yè)局產(chǎn)業(yè)發(fā)展科,陜西太白 721600;3.榆林林業(yè)科學(xué)研究所,陜西榆林 719000)

金露梅(Potentilla f ruticosa L.)又名金老梅、金蠟梅,為薔薇科萎陵菜屬落葉灌木,因花黃色、似梅而得名。金露梅喜光,耐寒,耐旱,在秦嶺主要分布在北坡的戶縣、眉縣、太白,南坡的佛坪,生于海拔2 300～3 000 m之間的高山梁坡灌叢或草地中[1-2]。其葉、花可入藥,微甘平,具有清暑熱,益腦清心,調(diào)經(jīng),健胃等功能[1,4]。太白山地區(qū)歷來就有以葉代茶的習(xí)慣,由西北農(nóng)林科技大學(xué)研制的新一代“金老梅茶”已經(jīng)獲得國家發(fā)明專利。為了進(jìn)一步確證“金老梅茶”的特殊功效及其成因,我們對金露梅葉的有效物質(zhì)進(jìn)行了分析研究,本文是其中的部分研究內(nèi)容。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 金露梅葉采自陜西秦嶺太白山蒿坪自然保護(hù)區(qū),共有 4種:第一種是采自海拔3 450 m自然生長的金露梅;第二種是采自海拔

3 150m自然生長的金露梅;第三種是采自遷移到低海拔溫棚內(nèi)正常生長的金露梅,第四種是采自遷移到低海拔溫棚內(nèi),且每日加紫外燈(30W),距離3m,照射2 h,持續(xù)時(shí)間3個(gè)月的金露梅。采集時(shí)間均為2010年7月15日。將采集到葉清理干凈,自然風(fēng)干,研磨成混合樣,備用。

1.1.2 儀器 722型光柵分光光度計(jì)(上海天普分析儀器有限公司)。

1.1.3 試藥 蘆丁對照品購于西安旭煌生物技術(shù)有限公司,實(shí)驗(yàn)所用試劑乙醇、三氯化鋁溶液、醋酸鉀溶液等均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 供試品溶液的制備 分別準(zhǔn)確稱取來自4種不同生長條件下的金露梅葉混合樣末各1.0 g,分別浸泡在100m l的70%乙醇溶液中,在水浴上加熱,回流提取2次,每次各3 h,離心濾過,兩次濾液合并,再將濾液在水浴上減壓蒸餾,除去溶劑,用石油醚脫2次,以除去樣品中的脂溶性物質(zhì)。濾液濃縮約20 m l后用20%乙醇100 m l懸浮、離心,將濾液在水浴上加熱濃縮成膏狀,用熱乙醇溶解,趁熱離心,將濾液移至25 m l容量瓶中,加乙醇稀釋至刻度,即得到4種供試品溶液。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備[4-5]準(zhǔn)確稱取蘆丁對照品14.60mg,配成25 m l的無水乙醇溶液,準(zhǔn)確吸取10 m l于25 m l的容量瓶中,用乙醇稀釋至刻度,準(zhǔn)確吸取0,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 m l,置于具塞刻度試管中,分別以乙醇稀釋至5 m l,再準(zhǔn)確加入2.5%三氯化鋁溶液3 m l和10%醋酸鉀溶液5m l,搖勻,放置40m in。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線與回歸方程 取6支具塞試管,將配制好的6個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液按順序加入試管,將各試管搖勻,用722型分光光度計(jì)在420 nm波長下比色,用1號試管(0濃度)作為空白對照液,調(diào)零,分別讀取各管的吸光度值(ABS值)。以吸光度為因變量(Y),濃度為自變量(X)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,得線性回歸方程為:Y=0.140+0.556 5X(r=0.998 9)。

1.2.4 樣品總黃酮含量測定 吸取供試品液0.1 m l置具塞試管中,加乙醇4.9m l,再加入 2.5%三氯化鋁溶液3m l,10%醋酸鉀溶液5 m l,放置40 m in,用722型分光光度計(jì)在420 nm波長下比色,讀取吸光度值(ABS值),再代入回歸方程,求算總黃酮含量。每個(gè)試樣測3次,計(jì)算平均值,即為該樣品的總黃酮含量。

2 結(jié)果與分析

采用三氯化鋁顯色比色測定法,對來源不同生長條件下的4種供試樣品溶液進(jìn)了比色測定,通過比色結(jié)果換算出4種供試樣品的總黃酮含量(見圖1)。4種供試樣品的總黃酮含量存在差異,在海拔3 450 m自然生長條件下,金露梅葉總黃酮含量為14.19mg/g;在海拔3 150m自然生長條件下,金露梅葉總黃酮含量為13.23 mg/g;在低海拔溫棚生長條件下,金露梅葉總黃酮含量為10.67mg/g;在低海拔溫棚且有紫外光照射條件下,金露梅葉總黃酮含量為13.03mg/g。

圖1 不同生長條件下的金露梅葉中總黃酮含量比較

從圖1可以看出,(1)海拔高度越高,其生長的金露梅葉總黃酮含量越高;(2)移栽于溫棚的金露梅葉總黃酮含量低于自然生長的金露梅葉;(3)同在溫棚栽培條件下,接受紫外線連續(xù)照射的金露梅葉總黃酮含量高于溫棚正常生長的金露梅葉。分析其原因,很可能是由于生長環(huán)境的改變影響到金露梅生長發(fā)育和次生代謝物的合成與積累。最確切的是光照條件,尤其是紫外線照射強(qiáng)度改變,對于金露梅葉總黃酮的積累與形成有促進(jìn)作用。當(dāng)然,不同生長環(huán)境下,其溫度、濕度和土壤等條件也有所不同,在低海拔溫棚栽植條件下,自然紫外輻射小,溫度高,金露梅生長發(fā)育快,可能不利于金露梅葉次生代謝物的合成和富集。

而同樣在溫棚條件下,采取紫外光連續(xù)照射時(shí),其葉中總黃酮含量則有所提高,紫外線連續(xù)照射時(shí)總黃酮含量為13.9 m g/g,正常溫棚生長時(shí)為11.1 mg/g,說明在其他生長條件相同的情況下,紫外光連續(xù)照射有利于金露梅葉總黃酮的形成和積累。

3 結(jié)論與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明:就金露梅葉的總黃酮含量而言,高海拔區(qū)生長的高于低海拔生長的;自然條件下生長的高于移栽到低海拔溫棚的;經(jīng)過人工紫外光連續(xù)照射的高于無紫外光照射的。其主要原因很可能是由于生長環(huán)境的改變影響到金露梅生理生化過程及其次生代謝物的合成和富集。首先,在高海拔處,光照充足,紫外線照射強(qiáng)度高,說明紫外線照射強(qiáng)度與金露梅葉總黃酮含量有一定關(guān)系,用紫外線連續(xù)照射提高了溫棚金露梅葉總黃酮的含量也進(jìn)一步說明了這一點(diǎn)。其次,從溫度、濕度、土壤等角度考慮,在低海拔大棚栽植條件下,溫度高、濕度大、條件優(yōu)越,這些因素都會(huì)不同程度地影響金露梅生長發(fā)育,如生長發(fā)育變快,但是否與金露梅葉總黃酮的形成和積累有直接關(guān)系,還有待于進(jìn)一步分析研究。

試驗(yàn)結(jié)果也表明:可以通過模擬自然生長條件,比如,采取紫外燈光照射、增加放風(fēng)時(shí)間等措施,能適當(dāng)提高人工栽培條件下金露梅葉總黃酮的含量。

[1] 中國科學(xué)院西北植物研究所.秦嶺植物志[M].北京:科學(xué)出版社,1987:548-549.

[2] 中國科學(xué)院植物研究所.中國高等植物圖鑒(二冊)[M].北京:科學(xué)出版社,1980:587.

[3] 鄭杭生,李計(jì)萍,韓 煒,等.紫外-可見分光光度法測定總黃酮含量的方法學(xué)考察要點(diǎn)[J].中成藥,2008,30(9):1364-1365.

[4] 李春雁,陳立華.金露梅葉中總黃酮含量分析[J].中醫(yī)藥信息,2001,18(4):41-42.

[5] 白東亞,不同海拔野生金露梅葉的主要成分分析[J].陜西林業(yè)科技,2007(2):1-5.