東 紅，劉 毅

(1.天津中新藥業(yè)集團股份有限公司達仁堂制藥廠，天津 300457； 2.天津藥物研究院，天津 300193)

復方益腎膠囊是由山茱萸、枸杞、熟地黃、骨碎補等多味中藥制成的復方制劑，其主要組成藥味山茱萸具有補肝腎的功效，以往選定山茱萸中的熊果酸作為含量測定指標，但根據(jù)藥理研究，熊果酸是降血糖的有效成分[1]，且專屬性不強，而馬錢苷為山茱萸中具有調(diào)節(jié)機體免疫功能的主要活性成分[2]，故選擇馬錢苷作為控制本品質(zhì)量的指標成分。有關馬錢苷的含量測定，已有報道，方法包括薄層掃描法、高效液相色譜法[2，3]等。本試驗采用高效液相色譜法對復方益腎膠囊中馬錢苷含量進行定量分析，建立了該產(chǎn)品的質(zhì)量標準定量控制方法。該方法具有專屬性強、分離效果好、靈敏準確等優(yōu)點。

1 儀器和試藥

HP1100系列高效液相色譜儀，G1310A泵，G1313A自動進樣器，G1316A柱溫箱，G1314A紫外檢測器，HP1100色譜工作站。馬錢苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，批號111640-200401 ，純度98%以上)，復方益腎膠囊(批號為090515，090518，090522)及陰性樣品由本實驗室自制。乙腈為色譜純，水為去離子水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1色譜條件 色譜柱：Kromasil-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)天和填裝；流動相：乙腈-水(12∶88)；檢測波長：238 nm；體積流量：1.0 ml/min；柱溫：室溫。

2.2對照品溶液的制備 精密稱取馬錢苷對照品11.57 mg，置50 ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成0.2314 mg/ml的溶液，作為對照品儲備液。精密吸取對照品儲備液1ml，置10 ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.3供試品溶液的制備 取復方益腎膠囊5粒，傾出內(nèi)容物，混勻，取約0.2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入50%甲醇25 ml，稱定重量，加熱回流20 min，取下，放冷，稱重，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻；濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4陰性溶液的制備 取除去山茱萸的其余藥味，按處方配比，照制備工藝制成缺山茱萸的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法處理，作為陰性溶液。按上述色譜條件測定，結果表明，陰性溶液在馬錢苷色譜峰相應位置上無色譜峰，陰性溶液無干擾，見圖1。

1．馬錢苷

2.5線性關系考察 精密量取馬錢苷對照品儲備液(0.2314 mg/ml)0.5、1.0、2.0、3.0和5.0 ml分別置10 ml量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進樣20 μl，測定峰面積。以馬錢苷的量(μg) 為橫坐標，峰面積為縱坐標，計算回歸方程Y=1 598.1X+10.2(r=0.999 9)。結果表明：在0.2314～2.314 μg范圍內(nèi)，馬錢苷峰面積值與進樣量呈良好的線性關系。

2.6精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液20 μl，重復進樣6次，記錄馬錢苷峰面積值，計算其RSD值為0.58%。

2.7穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液于0、1、2、4、8和24 h分別測定，每次進樣20 μl，記錄馬錢苷的峰面積，結果其RSD值為1.56%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.8重現(xiàn)性試驗 按供試品溶液的制備方法，對同一批號的樣品分別制備6份供試品溶液，進樣20 μl測定，計算馬錢苷的含量，結果其RSD值為0.86%。

2.9回收率試驗 采用加樣回收法。取已知馬錢苷含量的復方益腎膠囊090518批內(nèi)容物0.1 g，精密稱定6份，分別精密加入馬錢苷對照品溶液(0.231 4 mg/ml)1.0 ml，照供試品溶液制備方法制備，進樣20 μl測定，結果平均回收率為99.55%，RSD為0.91%。見表1。

2.10樣品的測定 取3批不同批號樣品，按供試品溶液制備方法操作，即得供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液20 μl，按上述色譜條件測定馬錢苷的含量，結果見表2。

表1 馬錢苷回收率試驗結果

表2 復方益腎膠囊中馬錢苷的含量測定結果(n=2)

3 討論

采用幾種樣品提取溶劑進行考察，結果，用甲醇作提取溶劑，含量較低，而且，色譜峰峰底過寬；70%甲醇、50%甲醇和30%甲醇作提取溶劑三者含量結果沒有顯著性差異，考慮到本品中有水提和醇提兩種工藝，因此采用50%甲醇作為提取溶劑。在本實驗色譜條件下，制劑中馬錢苷與其他組分間有較好的分離度，而且，樣品分析時間短，準確度、精密度均較好，完全可以用于該產(chǎn)品的定量控制方法。

1 張明發(fā)，沈雅琴．齊墩果酸和熊果酸的抗糖尿病藥理．上海醫(yī)藥，2010，31(8)：347

2 宋梅．山茱萸含量測定和藥理作用研究進展．江蘇中醫(yī)藥，2010，42(9)：80.

3 屠萬倩，張留記，劉怡，等.知柏地黃泡騰顆粒的質(zhì)量標準研究.中國新藥雜志，2010，19(5)：439