李 軍 周禎祥

1廣東藥學院中藥學院（廣東廣州510006）

2湖北中醫(yī)藥大學（湖北武漢430065）

在臨床上應用生大黃口服或者保留灌腸治療肝性腦?。℉E）取得較滿意療效［1-3］。 近年研究發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和血氨（BA）參與肝性腦病的發(fā)生［4］，本實驗旨在觀察生大黃對肝性腦病大鼠TNF-α和BA的影響，為臨床應用提供實驗參考。

1 實驗材料

1.1 實驗動物清潔級雄性wistar大鼠70只，體質量（200±20）g，購自湖北省醫(yī)學科學院動物實驗中心，合格證號：2009A052。

1.2 試劑及藥品生大黃煎制成含生藥質量濃度為1g/mL大黃水煎液，置于冰箱4℃保存?zhèn)溆?；乳果糖口服溶液，?guī)格：5.0g/10mL，由丹東康復制藥有限公司生產，批號：091201。四氯化碳（CCl4，分析純），由老河口市石油化工總廠生產，批號：090802，用液體石蠟配制成 20%的CCl4石蠟溶液；TNF-α（ELISA）試劑盒購自深圳晶美生物工程有限公司；BA、丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）檢測試劑盒均購自南京建成生物工程公司。

1.3 分組及造模70只大鼠采用數(shù)字表法隨機分為假手術組10只，模型組、生大黃組和乳果糖組各20只。HE大鼠模型制作參照文獻［5］方法。除假手術組外，采用CCl4誘導，結扎、切除2/3肝臟，建立大鼠HE模型。實驗開始每日1次給大鼠灌胃20%CCl4石蠟溶液5mL/kg，連續(xù)2d。手術前大鼠禁食12h，在戊巴比妥鈉麻醉下背位固定于手術板上，無菌操作，沿腹正中線上腹部小切口開腹，暴露肝臟，依次在肝蒂部結扎左前葉及中葉，將此兩葉切除；然后再將暴露的肝右葉結扎，但不切除。假手術組相應地同時灌胃同等體積的生理鹽水，并行假手術（剖腹但不切肝）。于實驗第5日（術后禁食24 h）開始，生大黃組和乳果糖組分別予生大黃水煎液5g/100g、乳果糖0.5g/100g灌胃，連續(xù)灌胃3d。實驗第8日全部大鼠在乙醚麻醉下腦電圖檢測和心臟采血。

1.4 標本采集與檢測腦電圖檢測：采血前，各組大鼠均在乙醚麻醉下俯臥，安置額枕骨間電極，用八道生理記錄儀描記腦電圖。血清生化指標：取血5mL，離心取血清，嚴格按照試劑盒操作說明檢測血清 TNF-α、BA、AST、ALT 水平。

1.5 統(tǒng)計學處理采用SPSS 12.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，計量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 各組大鼠死亡率比較假手術組大鼠無死亡，模型組死亡率為 60%（12/20），生大黃組死亡率為 30%（6/20），乳果糖組死亡率為35%（7/20）；生大黃組和乳果糖組與模型組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；但生大黃組與乳果糖組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

2.2 各組大鼠腦電圖變化假手術組大鼠腦電圖以α波為主，無明顯異常；模型組大鼠腦電頻率變慢，波幅變小，多以寬大的δ波為主；與模型組比較，生大黃組和乳果糖組大鼠腦電的頻率變快，尤其生大黃組接近于正常組，可見α波型。

2.3 各組大鼠血清TNF-α、BA、ALT、AST水平比較見表 1。與假手術組比較，模型組大鼠血清TNF-α、BA、AST、ALT水平顯著升高（P均 ＜0.01）；與模型組比較，生大黃組和乳果糖組大鼠血清TNF-α、BA、ALT、AST水平顯著降低，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05 或 0.01）；生大黃組大鼠血清 TNF-α、BA、ALT 水平較乳果糖組低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表1 各組大鼠血清TNF-α、BA、AST、ALT水平比較 （±s）

表1 各組大鼠血清TNF-α、BA、AST、ALT水平比較 （±s）

與假手術組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與乳果糖組比較，▲P＜0.05。

AST（U/L）120.53±18.65 425.32±58.62△△316.45±42.24△*351.52±46.22△*組 別 n TNF-α（pg/L）BA（mg/L）1.05±0.42 4.63±1.62△△生大黃組 14 112.46±26.43△**▲ 2.08±1.08△*▲乳果糖組 13 186.37±41.59△** 3.12±1.36△△*假手術組 10 51.38±9.42模型組 8 514.54±82.64△△ALT（U/L）52.25±10.52 942.67±185.36△△426.48±128.57△△*▲582.34±165.61△△*

3 討 論

HE是嚴重肝病引起的以代謝紊亂為基礎，以意識改變和昏迷為主要表現(xiàn)的中樞神經系統(tǒng)功能障礙綜合征［6］。目前HE發(fā)病機制尚不十分清楚，多數(shù)認為是多種因素作用的結果，氨中毒學說仍占主導地位。BA來源分體內代謝產氨和腸道內產氨，入血后在肝臟中經鳥氨酸循環(huán)合成尿素，由尿排出。肝臟損害時，不能將進入肝臟的氨都轉變?yōu)槟蛩?，使BA升高［7］，氨進入腦細胞后干擾腦細胞的能量代謝，使Na+-K+-ATP酶活性減低，ATP缺乏，能量供應不足，以致不能維持中樞神經系統(tǒng)的興奮活動，從而引起昏迷。BA在HE的發(fā)病過程中起著重要作用，能否降低BA濃度在臨床上是衡量藥物療效和評估患者預后的一個重要指標，臨床上常采用綜合性治療，尤其是降低BA水平來控制HE的出現(xiàn)［8］。TNF-α是淋巴細胞或單核巨噬細胞分泌的促炎癥細胞因子，它對機體炎癥反應起著重要促進作用，可刺激外周血中性粒細胞向肝組織內移動、浸潤，放大肝組織內炎癥應答，加重肝臟組織炎癥損傷。TNF-α和BA在肝硬化合并HE患者外周血中明顯升高，它們可能直接參與肝細胞功能損傷和HE 的發(fā)生［9］。

HE 屬于中醫(yī)學“神昏”、“癡呆”、“厥逆”、“癲狂”等范疇。 下法是中醫(yī)學八法之一，是通過蕩滌腸胃，將停留在腸胃的有害物質從下竅而出，以祛除病邪的一種方法，以通里攻下的方法有效防治肝性腦?。?0］。生大黃具有通腑瀉下，蕩滌腸道積滯功效，本實驗中，造模后大鼠血清TNF-α、BA、ALT、AST水平均高于假手術組，在經過乳果糖和生大黃的治療后，血清TNF-α、BA、ALT、AST水平下降，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義；且生大黃組大鼠血清TNF-α、BA、ALT水平較乳果糖組低，生大黃療效優(yōu)于乳果糖。本研究結果顯示，生大黃可改善大腦誘發(fā)電位異常和肝功能、降低血清TNF-α和BA水平，對大鼠HE有治療作用，其作用機制可能與生大黃瀉下作用，縮短腸道對氨、內毒素等有毒物質的吸收，抑制TNF-α對肝臟組織炎癥損傷有關。

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