李 軍 周禎祥

1廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院（廣東廣州510006）

2湖北中醫(yī)藥大學(xué)（湖北武漢430065）

在臨床上應(yīng)用生大黃口服或者保留灌腸治療肝性腦?。℉E）取得較滿(mǎn)意療效［1-3］。 近年研究發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和血氨（BA）參與肝性腦病的發(fā)生［4］，本實(shí)驗(yàn)旨在觀察生大黃對(duì)肝性腦病大鼠TNF-α和BA的影響，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)參考。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)雄性wistar大鼠70只，體質(zhì)量（200±20）g，購(gòu)自湖北省醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，合格證號(hào)：2009A052。

1.2 試劑及藥品生大黃煎制成含生藥質(zhì)量濃度為1g/mL大黃水煎液，置于冰箱4℃保存?zhèn)溆?；乳果糖口服溶液，?guī)格：5.0g/10mL，由丹東康復(fù)制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：091201。四氯化碳（CCl4，分析純），由老河口市石油化工總廠生產(chǎn)，批號(hào)：090802，用液體石蠟配制成 20%的CCl4石蠟溶液；TNF-α（ELISA）試劑盒購(gòu)自深圳晶美生物工程有限公司；BA、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程公司。

1.3 分組及造模70只大鼠采用數(shù)字表法隨機(jī)分為假手術(shù)組10只，模型組、生大黃組和乳果糖組各20只。HE大鼠模型制作參照文獻(xiàn)［5］方法。除假手術(shù)組外，采用CCl4誘導(dǎo)，結(jié)扎、切除2/3肝臟，建立大鼠HE模型。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始每日1次給大鼠灌胃20%CCl4石蠟溶液5mL/kg，連續(xù)2d。手術(shù)前大鼠禁食12h，在戊巴比妥鈉麻醉下背位固定于手術(shù)板上，無(wú)菌操作，沿腹正中線上腹部小切口開(kāi)腹，暴露肝臟，依次在肝蒂部結(jié)扎左前葉及中葉，將此兩葉切除；然后再將暴露的肝右葉結(jié)扎，但不切除。假手術(shù)組相應(yīng)地同時(shí)灌胃同等體積的生理鹽水，并行假手術(shù)（剖腹但不切肝）。于實(shí)驗(yàn)第5日（術(shù)后禁食24 h）開(kāi)始，生大黃組和乳果糖組分別予生大黃水煎液5g/100g、乳果糖0.5g/100g灌胃，連續(xù)灌胃3d。實(shí)驗(yàn)第8日全部大鼠在乙醚麻醉下腦電圖檢測(cè)和心臟采血。

1.4 標(biāo)本采集與檢測(cè)腦電圖檢測(cè)：采血前，各組大鼠均在乙醚麻醉下俯臥，安置額枕骨間電極，用八道生理記錄儀描記腦電圖。血清生化指標(biāo)：取血5mL，離心取血清，嚴(yán)格按照試劑盒操作說(shuō)明檢測(cè)血清 TNF-α、BA、AST、ALT 水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 12.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠死亡率比較假手術(shù)組大鼠無(wú)死亡，模型組死亡率為 60%（12/20），生大黃組死亡率為 30%（6/20），乳果糖組死亡率為35%（7/20）；生大黃組和乳果糖組與模型組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；但生大黃組與乳果糖組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2 各組大鼠腦電圖變化假手術(shù)組大鼠腦電圖以α波為主，無(wú)明顯異常；模型組大鼠腦電頻率變慢，波幅變小，多以寬大的δ波為主；與模型組比較，生大黃組和乳果糖組大鼠腦電的頻率變快，尤其生大黃組接近于正常組，可見(jiàn)α波型。

2.3 各組大鼠血清TNF-α、BA、ALT、AST水平比較見(jiàn)表 1。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠血清TNF-α、BA、AST、ALT水平顯著升高（P均 ＜0.01）；與模型組比較，生大黃組和乳果糖組大鼠血清TNF-α、BA、ALT、AST水平顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05 或 0.01）；生大黃組大鼠血清 TNF-α、BA、ALT 水平較乳果糖組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 各組大鼠血清TNF-α、BA、AST、ALT水平比較 （±s）

表1 各組大鼠血清TNF-α、BA、AST、ALT水平比較 （±s）

與假手術(shù)組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與乳果糖組比較，▲P＜0.05。

AST（U/L）120.53±18.65 425.32±58.62△△316.45±42.24△*351.52±46.22△*組 別 n TNF-α（pg/L）BA（mg/L）1.05±0.42 4.63±1.62△△生大黃組 14 112.46±26.43△**▲ 2.08±1.08△*▲乳果糖組 13 186.37±41.59△** 3.12±1.36△△*假手術(shù)組 10 51.38±9.42模型組 8 514.54±82.64△△ALT（U/L）52.25±10.52 942.67±185.36△△426.48±128.57△△*▲582.34±165.61△△*

3 討 論

HE是嚴(yán)重肝病引起的以代謝紊亂為基礎(chǔ)，以意識(shí)改變和昏迷為主要表現(xiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙綜合征［6］。目前HE發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚，多數(shù)認(rèn)為是多種因素作用的結(jié)果，氨中毒學(xué)說(shuō)仍占主導(dǎo)地位。BA來(lái)源分體內(nèi)代謝產(chǎn)氨和腸道內(nèi)產(chǎn)氨，入血后在肝臟中經(jīng)鳥(niǎo)氨酸循環(huán)合成尿素，由尿排出。肝臟損害時(shí)，不能將進(jìn)入肝臟的氨都轉(zhuǎn)變?yōu)槟蛩?，使BA升高［7］，氨進(jìn)入腦細(xì)胞后干擾腦細(xì)胞的能量代謝，使Na+-K+-ATP酶活性減低，ATP缺乏，能量供應(yīng)不足，以致不能維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)的興奮活動(dòng)，從而引起昏迷。BA在HE的發(fā)病過(guò)程中起著重要作用，能否降低BA濃度在臨床上是衡量藥物療效和評(píng)估患者預(yù)后的一個(gè)重要指標(biāo)，臨床上常采用綜合性治療，尤其是降低BA水平來(lái)控制HE的出現(xiàn)［8］。TNF-α是淋巴細(xì)胞或單核巨噬細(xì)胞分泌的促炎癥細(xì)胞因子，它對(duì)機(jī)體炎癥反應(yīng)起著重要促進(jìn)作用，可刺激外周血中性粒細(xì)胞向肝組織內(nèi)移動(dòng)、浸潤(rùn)，放大肝組織內(nèi)炎癥應(yīng)答，加重肝臟組織炎癥損傷。TNF-α和BA在肝硬化合并HE患者外周血中明顯升高，它們可能直接參與肝細(xì)胞功能損傷和HE 的發(fā)生［9］。

HE 屬于中醫(yī)學(xué)“神昏”、“癡呆”、“厥逆”、“癲狂”等范疇。 下法是中醫(yī)學(xué)八法之一，是通過(guò)蕩滌腸胃，將停留在腸胃的有害物質(zhì)從下竅而出，以祛除病邪的一種方法，以通里攻下的方法有效防治肝性腦?。?0］。生大黃具有通腑瀉下，蕩滌腸道積滯功效，本實(shí)驗(yàn)中，造模后大鼠血清TNF-α、BA、ALT、AST水平均高于假手術(shù)組，在經(jīng)過(guò)乳果糖和生大黃的治療后，血清TNF-α、BA、ALT、AST水平下降，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；且生大黃組大鼠血清TNF-α、BA、ALT水平較乳果糖組低，生大黃療效優(yōu)于乳果糖。本研究結(jié)果顯示，生大黃可改善大腦誘發(fā)電位異常和肝功能、降低血清TNF-α和BA水平，對(duì)大鼠HE有治療作用，其作用機(jī)制可能與生大黃瀉下作用，縮短腸道對(duì)氨、內(nèi)毒素等有毒物質(zhì)的吸收，抑制TNF-α對(duì)肝臟組織炎癥損傷有關(guān)。

［1］王堂明，邱波，李樹(shù)民，等.生大黃粉口服治療肝性腦病60例［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2008，28（6）：558-559.

［2］舒生虎.生大黃預(yù)防肝性腦病67例效果觀察 ［J］.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生，2010，48（6）：53.

［3］李宜琴，馬瑞英.單味大黃煎湯保留灌腸治療30例肝性腦病及護(hù)理［J］.陜西中醫(yī)，2010，31（2）：178.

［4］奕月香，靳靜.肝性腦病患者腫瘤壞死因子-α、血氨水平變化及意義［J］.中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2008，11（6）：84-85.

［5］熊益群，周大橋，李航森，等.實(shí)驗(yàn)性大鼠肝性腦病動(dòng)物模型的研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)雜志，2002，12（6）：340-342.

［6］陸倫跟.肝性腦病的發(fā)病機(jī)制 ［J］.中華肝臟病雜志，2004，12（5）：304.

［7］徐如祥，肖華.現(xiàn)代臨床昏迷學(xué)［M］.北京：軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社，2003：311-327.

［8］郭惠學(xué)，邊壯.綜合降低血氨濃度治療乙肝肝硬化引起的肝性腦?。跩］.中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2007，10（2）：21-22.

［9］郭長(zhǎng)青，黃宏春，李繼昌，等.肝硬化腹水患者內(nèi)毒素、腫瘤壞死因子-α和白細(xì)胞介素水平的檢測(cè)及臨床意義 ［J］.臨床薈萃，2005，20（2）：91-92.

［10］閆威，楊玉潔，劉鐵軍，等.毒消肝清顆粒對(duì)肝性腦病大鼠腦電圖的影響［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2010，30（2）：249-250.