劉星，邱慧珍＊，張文明，李亞娟，滕桂香，賈歡歡

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)資源與環(huán)境學(xué)院，甘肅 蘭州730070；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院，甘肅 蘭州730070）

我國(guó)的煙葉種植面積和產(chǎn)量均居世界首位，煙葉生產(chǎn)在我國(guó)國(guó)民經(jīng)濟(jì)中占有重要地位，已連續(xù)十余年成為全國(guó)第一利稅大戶［1－3］。地處隴東黃土高原的甘肅省正寧縣煙區(qū)，屬于優(yōu)質(zhì)烤煙（Nicotianatabacum）種植的適宜區(qū)，烤煙栽培歷史悠久，烤煙生產(chǎn)已成為當(dāng)?shù)馗幻駨?qiáng)縣的支柱和特色產(chǎn)業(yè)。然而，近年來(lái)由于長(zhǎng)期連作和大量施用化肥，忽略了有機(jī)肥的施用，造成煙葉產(chǎn)量和品質(zhì)持續(xù)下降，尤其是煙葉內(nèi)在品質(zhì)下降，油份減少、香氣不足，導(dǎo)致種植效益下降［4，5］。因此，如何通過(guò)營(yíng)養(yǎng)調(diào)控改善其品質(zhì)，提高煙葉致香物質(zhì)含量和香氣質(zhì)量是該縣烤煙種植中急需解決的問(wèn)題。

煙葉的香氣量和香味是影響煙葉品質(zhì)和商品價(jià)值的主要因素之一，與煙葉中致香物質(zhì)含量密切相關(guān)［6］。研究表明，影響烤煙致香物質(zhì)含量的因素包括施肥、土壤條件、光照、溫度、水分、干旱脅迫、成熟度、采收及海拔等［6，7］，其中施肥尤其是施用有機(jī)肥是提高煙葉香氣物質(zhì)含量的最主要和最有效的措施之一［3，7］。目前，農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)中有機(jī)肥施用正作為一種環(huán)境友好型作物生產(chǎn)技術(shù)越來(lái)越受到重視［8］。煙田常用的有機(jī)肥有餅肥、堆肥和廄肥等，其中以餅肥最為普遍。有關(guān)餅肥在烤煙上的施用效果國(guó)內(nèi)已有大量的研究，施用適量餅肥可以提高烤煙的產(chǎn)量和產(chǎn)值［9，10］，提高土壤的生物活性［11］，改善煙葉品質(zhì)［12，13］，增加香氣物質(zhì)［14］。微生物有機(jī)肥是近年來(lái)推廣的一種新型肥料，它集有機(jī)肥和化肥的優(yōu)點(diǎn)為一體，并含有多種有益拮抗微生物，有緩解作物連作障礙的功效。增施微生物有機(jī)肥能夠顯著提高土壤供應(yīng)養(yǎng)分的能力，激發(fā)土壤中氮素、磷素的釋放，增加烤煙煙葉中的鉀含量，降低煙堿含量，減少氯含量［15］。目前，關(guān)于微生物有機(jī)肥在烤煙上的相關(guān)報(bào)道多集中在土壤理化性狀、養(yǎng)分供應(yīng)能力、生理代謝、葉片常規(guī)化學(xué)品質(zhì)上，而對(duì)最能表現(xiàn)烤煙商品特性的香氣性質(zhì)、含量、組成比例等方面卻鮮有報(bào)道，為此，本研究通過(guò)大田試驗(yàn)探討微生物有機(jī)肥對(duì)隴東烤煙致香物質(zhì)含量的影響及其可能的機(jī)理，以期為當(dāng)?shù)乜緹煼N植中有機(jī)肥的施用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)區(qū)概況

大田試驗(yàn)于2009年在甘肅省慶陽(yáng)地區(qū)正寧縣進(jìn)行。正寧縣地處黃土高原溝壑區(qū)，屬大陸性季風(fēng)氣候，為優(yōu)質(zhì)烤煙種植的適宜區(qū)。全縣烤煙主產(chǎn)區(qū)鄉(xiāng)鎮(zhèn)海拔一般處于1 177～1 250m，全年日照2 447.4h，日照率55%，烤煙生育期≥10℃年積溫為2 900℃，降水量約630mm，蒸發(fā)量1 500mm，無(wú)霜期180d左右。光照充足，熱量富裕。供試土壤為黑壚土，基本理化性狀為：有機(jī)質(zhì)12.5g／kg，全氮0.8g／kg，堿解氮64.6mg／kg，速效磷11.6 mg／kg，速效鉀162.5mg／kg，pH值（水土比5∶1）為8.3。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與方法

田間試驗(yàn)設(shè)2個(gè)處理：CK，不施微生物有機(jī)肥；BIO，施微生物有機(jī)肥，每處理3次重復(fù)，隨機(jī)區(qū)組排列，小區(qū)面積59.4m2（9.0m×6.6m），行距1.1m，株距0.6m，種植密度為1.515×104株／hm2。

微生物有機(jī)肥由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)提供，含氮磷鉀8%，其中氨基酸態(tài)氮占總氮的60%以上，含抗土傳枯萎病的微生物數(shù)量大于108／g。移栽時(shí)在靠近煙苗根系底部集中施用，用量4g／株，60kg／hm2。2個(gè)處理化肥用量一致，氮肥用量為60kg N／hm2，N∶P2O5∶K2O比例1.0∶1.5∶3.0，氮肥用硝銨磷（N含量32%，P2O5含量4.4%），磷肥用過(guò)磷酸鈣（P2O5含量16%），鉀肥用硫酸鉀（K2O含量50%）。施肥和起壟同步進(jìn)行，采用雙層施肥技術(shù)，下層肥料于起壟時(shí)施入，開溝20cm深，條施80%的氮肥、磷肥和鉀肥，上層肥料于移栽時(shí)施入，穴施全部微生物有機(jī)肥和剩余20%的氮肥、磷肥，20%的鉀肥于現(xiàn)蕾期噴施。其余栽培和田間管理措施均按當(dāng)?shù)責(zé)熮r(nóng)習(xí)慣方法進(jìn)行。

供試品種：當(dāng)?shù)刂髟云贩NCV70，由正寧縣煙葉生產(chǎn)管理局提供，煙苗采用切塊育苗。

1.3 樣品采集與分析

起壟前采集土壤基礎(chǔ)土樣，測(cè)定土樣的基本理化性狀。移栽后0～120d內(nèi)每隔15d調(diào)查各小區(qū)烤煙葉片葉綠素含量。在田間條件下挑選無(wú)病蟲害、無(wú)生理病斑、無(wú)機(jī)械損傷的烤煙中部完全展開葉片，采用SPAD－502型葉綠素儀于主脈兩側(cè)，分別讀取3個(gè)讀數(shù)，并用6個(gè)讀數(shù)平均值代表該株烤煙的葉片葉綠素含量，每個(gè)小區(qū)隨機(jī)選取健壯程度和長(zhǎng)勢(shì)一致的烤煙7株進(jìn)行測(cè)定。同時(shí)取烤煙葉片混合樣殺青、烘干后測(cè)定葉片氮素含量。圓頂期在田間于上午10點(diǎn)左右采集新鮮無(wú)病害特征葉片測(cè)定相關(guān)酶活性，用抖土法采集根際土壤。各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定均3次重復(fù)，求取平均值。葉綠素降解速度＝（前一次測(cè)定SPAD值－后一次測(cè)定SPAD值）／間隔天數(shù)。

烤煙成熟收獲后，于當(dāng)?shù)乜痉績(jī)?nèi)進(jìn)行烘烤，按小區(qū)分下部葉（從下至上第1～7位葉，去掉1～2片無(wú)效葉，共采收5片有效煙葉）、中部葉（第8～14位葉）和上部葉（第15～20位葉）各取烤后煙葉混合樣測(cè)定致香成分。樣品致香物質(zhì)測(cè)定在河南農(nóng)業(yè)大學(xué)煙草學(xué)院國(guó)家煙草（行業(yè)）栽培生理生化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，3次重復(fù)。

1.4 測(cè)定方法

葉片酶活性測(cè)定，硝酸還原酶：磺胺－萘胺比色法。蔗糖轉(zhuǎn)化酶：3，5－二硝基水楊酸比色法。

土壤堿解氮含量測(cè)定：堿解擴(kuò)散法。葉片氮素含量測(cè)定：H2SO4－H2O2聯(lián)合消煮，蒸餾滴定法。

1.5 致香物質(zhì)測(cè)定

1.5.1 中性致香物質(zhì)的提取 中性致香物質(zhì)提取及定性定量分析采用HP5890－5972氣質(zhì)聯(lián)用儀。前處理采用水蒸氣蒸餾－二氯甲烷溶劑萃取法。同時(shí)蒸餾萃取裝置的一端接500mL圓底燒瓶，內(nèi)有10g煙樣、1g檸檬酸、350mL蒸餾水和0.5mL內(nèi)標(biāo)（硝基苯）混合液，使用恒溫電熱套進(jìn)行加熱；裝置的另一端連接盛有40mL二氯甲烷的250mL圓底燒瓶，該燒瓶置于恒溫水浴鍋中加熱，水浴溫度為60℃。同時(shí)蒸餾萃取2.5h。萃取完成后，加入10g無(wú)水硫酸鈉干燥有機(jī)相，然后于60℃水浴中濃縮至1mL左右即得煙葉精油。

1.5.2 中性致香物質(zhì)的定性和定量條件 將提取的煙葉精油，由GC／MS鑒定結(jié)果和NIST庫(kù)檢索定性。GC／MS分析條件，色譜柱：HP－5（60m×0.25mm×0.25μm）；載氣：氦氣；流速：0.8mL／min；進(jìn)樣口溫度：250℃；傳輸線溫度：280℃；離子源溫度：177℃。升溫程序：初溫50℃，恒溫2min后，以2℃／min的速度升至120℃，5min后以2℃／min的速度升至240℃，保持30min；分流比15∶1；進(jìn)樣量：2μL；電離能：70eV；質(zhì)量數(shù)范圍50～500；采用內(nèi)標(biāo)法定量。

1.6 數(shù)據(jù)處理

用DPS數(shù)據(jù)處理軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，圖表繪制在Excel 2007軟件上進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 施用微生物有機(jī)肥對(duì)煙葉中性致香物質(zhì)總量的影響

烤后煙葉樣品經(jīng)GC／MS測(cè)定和NIST庫(kù)檢索共定性和定量了28種主要中性致香成分，將這些致香成分按烤煙香氣物質(zhì)前體物共分成6類（表1）。

微生物有機(jī)肥處理BIO顯著提高了烤煙各部位葉片的中性致香物質(zhì)總量，與CK相比，增加了26.79%～134.33%，并以上部葉的增幅最大，總量高達(dá)1 810.72μg／g，說(shuō)明在常規(guī)施用化肥的基礎(chǔ)上增施微生物有機(jī)肥能顯著提高煙葉中性致香物質(zhì)總量，提升煙葉的香味品質(zhì)。

烤煙不同葉位葉片的中性致香物質(zhì)總量對(duì)微生物有機(jī)肥的反應(yīng)顯著不同，以上部葉片的致香物質(zhì)總量對(duì)微生物有機(jī)肥的敏感程度最高，含量的增幅最大。與CK相比，上、中、下部葉的中性致香物質(zhì)總量分別增加了134.33%，81.03%和26.79%。

施用微生物有機(jī)肥后，不同葉位葉片的中性致香物質(zhì)總量的高低順序發(fā)生了變化，CK處理中各部位葉片中性致香物質(zhì)總量高低順序?yàn)樯喜咳~＞下部葉＞中部葉，而在BIO處理中為上部葉＞中部葉＞下部葉，這可能是微生物有機(jī)肥影響煙株體內(nèi)干物質(zhì)和氮素在不同葉位葉片間的分配所致。在收獲的18片煙葉中，中部葉為第8～14片葉，占收獲葉片的39%，中部葉致香物質(zhì)總量的提高對(duì)增加烤煙單位面積的產(chǎn)值具有重要意義，煙葉致香物質(zhì)含量越高，品質(zhì)越好，中上等煙比例也越高，單位面積的產(chǎn)值越高。

2.2 施用微生物有機(jī)肥對(duì)不同種類中性致香物質(zhì)的影響

煙葉中致香物質(zhì)成分較多，不同致香物質(zhì)具有不同的化學(xué)結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，對(duì)人的嗅覺和味覺可以產(chǎn)生不同的刺激作用，形成不同的感官反應(yīng)，對(duì)煙葉香氣質(zhì)、香氣量和香型有不同的貢獻(xiàn)［16］。結(jié)果顯示（表1），正寧煙葉中性致香成分有西柏烷類降解產(chǎn)物1種，類胡蘿卜素降解產(chǎn)物13種，苯丙氨酸類降解產(chǎn)物4種，棕色化產(chǎn)物6種，新植二烯和其他致香物質(zhì)3種。含量較高的致香物質(zhì)組分主要有茄酮、β－大馬酮、香葉基丙酮、法尼基丙酮、苯甲醇、糠醛、3，4－二甲基－2，5－呋喃二酮和新植二烯等，較低的有氧化異佛爾酮、6－甲基－5－庚烯－2－醇和4－乙烯基－2－甲氧基苯酚等。

微生物有機(jī)肥處理對(duì)六大類中性致香物質(zhì)的效果明顯不同（表1），BIO處理大幅度提高了上部葉片中西柏烷類和類胡蘿卜素類致香成分總量以及中部葉苯丙氨酸類致香成分總量，較CK分別增加了67.57%，79.78%和261.78%，而棕色化產(chǎn)物類致香成分總量處理間差異不大。

測(cè)定結(jié)果同時(shí)表明，中性致香物質(zhì)以新植二烯為主，占中性致香物質(zhì)總量的79.67%～89.43%，而且處理間的差異也最大，這是導(dǎo)致處理間致香物質(zhì)總量形成巨大差異的主要原因，與趙銘欽等［17］的研究結(jié)果一致，BIO處理中上、中、下部葉片中新植二烯的含量分別比對(duì)照增加了157.33%，88.15%和31.17%，這可能是施用微生物有機(jī)肥后土壤的供氮能力增強(qiáng)，促進(jìn)了新植二烯的前體物－葉綠素的合成所致。

2.3 施用微生物有機(jī)肥對(duì)煙葉葉綠含量的影響

葉綠素不僅是光合作用的重要色素，同時(shí)其含量和降解產(chǎn)物的積累量與煙葉的香氣物質(zhì)和品質(zhì)有密切關(guān)系［18］。BIO處理不僅提高了烤煙葉片的葉綠素含量，而且推遲了葉綠素含量的峰值（圖1）。

結(jié)果顯示，兩處理葉片葉綠素含量均表現(xiàn)為“先上升，后下降”的單峰曲線（圖1），但是峰值出現(xiàn)的時(shí)間明顯不同。CK處理葉綠素的峰值出現(xiàn)在移栽后60d左右，BIO處理出現(xiàn)在移栽后75d左右，推遲了大約15d。

葉綠素含量降低是植物重要的衰老指標(biāo)之一，常常被用來(lái)作為植被長(zhǎng)勢(shì)的重要參量［19］。葉片衰老最明顯的表現(xiàn)就是葉綠素逐漸消失，并伴隨葉片黃化以及最終脫落。煙葉的成熟（衰老）過(guò)程即是葉綠素大量降解的過(guò)程［20－23］，BIO處理葉綠素峰值的延后說(shuō)明施用微生物有機(jī)肥延緩了烤煙成熟期。在烤煙生育后期，CK葉片葉綠素降解速度為0.41單位／d（移栽后60～105d），BIO處理為0.32單位／d（移栽后75～120d）。CK葉綠素后期降解較快，煙株干物質(zhì)積累較低，不耐衰老，造成一種“假熟”現(xiàn)象，導(dǎo)致相同部位煙葉提前采收，煙葉成熟時(shí)間也較BIO處理縮短。劉峰等［24］通過(guò)菜籽餅肥研究試驗(yàn)也表明隨著有機(jī)肥的施用煙株的腳葉和頂葉成熟時(shí)間推遲，煙葉成熟期被相對(duì)拉長(zhǎng)。

烤煙的成熟期主要進(jìn)行內(nèi)在物質(zhì)特別是香氣前體物質(zhì)的生理生化轉(zhuǎn)化，成熟期的長(zhǎng)短決定這種轉(zhuǎn)化能否充分進(jìn)行，對(duì)烤煙內(nèi)在品質(zhì)產(chǎn)生重要影響［3，7］。微生物有機(jī)肥延緩了煙葉葉綠素的降解速度，延長(zhǎng)了煙葉的成熟期，使最能體現(xiàn)烤煙品質(zhì)的中、上部葉片的生理功能期延長(zhǎng)，有利于葉片干物質(zhì)的積累和化學(xué)成分及葉片內(nèi)含物的轉(zhuǎn)化。

2.4 施用微生物有機(jī)肥對(duì)土壤有效氮和煙葉氮含量的影響

在圓頂期測(cè)定了煙株根際和非根際土壤的有效氮含量（圖2），發(fā)現(xiàn)BIO處理較CK分別增加了18.66%和36.79%，說(shuō)明施用微生物有機(jī)肥顯著增強(qiáng)了土壤的供氮能力。這主要是因?yàn)槲⑸镉袡C(jī)肥本身含有一定量的有效氮，同時(shí)也促進(jìn)了土壤有機(jī)氮的礦化所致。土壤供氮能力的提高，促進(jìn)了煙株對(duì)氮的吸收，進(jìn)而促進(jìn)了葉綠素的合成。在整個(gè)大田生長(zhǎng)期內(nèi)BIO處理的葉片N素含量均高于CK（圖3）。

圖1 施用微生物有機(jī)肥對(duì)烤煙葉片葉綠素含量的影響Fig.1 Effects of bio－organic fertilizer application on chlorophyll contents in tobacco leaves

圖2 微生物有機(jī)肥對(duì)土壤堿解氮含量的影響Fig.2 Effects of bio－organic fertilizer on available nitrogen in soil

圖3 微生物有機(jī)肥對(duì)烤煙葉片氮素含量的影響Fig.3 Effects of bio－organic fertilizer on nitrogen contents in tobacco leaves

表2 微生物有機(jī)肥對(duì)圓頂期烤煙葉片C／N代謝關(guān)鍵酶活性的影響Table 2 Effects of bio－organic fertilizer application on activities of key enzymes in C／N mechanisms in tobacco leaves on dome period

2.5 施用微生物有機(jī)肥對(duì)圓頂期烤煙C／N代謝關(guān)鍵酶活性和葉片干物質(zhì)的影響

蔗糖轉(zhuǎn)化酶與植物組織的生長(zhǎng)有密切關(guān)系，是衡量同化產(chǎn)物的轉(zhuǎn)移、利用及植物細(xì)胞代謝和生長(zhǎng)強(qiáng)度的指標(biāo)，也是碳代謝的重要標(biāo)志［25］，BIO處理極顯著提高了圓頂期葉片蔗糖轉(zhuǎn)化酶活性（表2），較CK上升了30.02%，該酶活性的大幅度提高說(shuō)明施用微生物有機(jī)肥能提高葉片的碳代謝強(qiáng)度，促進(jìn)烤煙后期同化產(chǎn)物向小分子有機(jī)酸、醛類、酮類等葉片致香物質(zhì)的方向轉(zhuǎn)化和形成。

硝酸還原酶是高等植物氮素同化過(guò)程－硝酸光合作用的限速酶，其活性大小與氮代謝呈正相關(guān)，常用來(lái)表示氮代謝強(qiáng)度［13，25］。BIO處理的硝酸還原酶活性比對(duì)照增加了13.42%（表2），說(shuō)明BIO處理促進(jìn)了葉片的硝酸光合作用，促進(jìn)了NO3－的還原作用，進(jìn)而促進(jìn)了氨基酸和蛋白質(zhì)的合成。

3 討論

3.1 烤煙葉片葉綠素對(duì)施用微生物有機(jī)肥的響應(yīng)

新植二烯是由葉綠素裂解產(chǎn)生的葉綠醇脫水形成，為煙葉中重要的萜烯類化合物，能增進(jìn)香煙的吃味和香氣，本身有一種弱的令人愉悅的氣味，又可通過(guò)降解轉(zhuǎn)化形成其他低分子致香成分［7］；有研究表明新植二烯是煙葉中性揮發(fā)物中含量最大的成分，可能是煙葉形成清香特色的主要因素之一［18］。BIO處理煙葉葉綠素含量提高，可能有幾個(gè)原因：1）微生物有機(jī)肥施用后，土壤氮素供應(yīng)的增強(qiáng)能夠使葉片積累更多的氮素用于葉綠素的生物合成。有研究表明葉綠素含量和烤煙葉片全氮之間存在極顯著的線性關(guān)系，且相關(guān)系數(shù)在各個(gè)測(cè)定時(shí)間均為顯著或極顯著正相關(guān)［26］。據(jù)測(cè)定，葉綠體占葉片干重的20%～30%，而葉綠體中含蛋白質(zhì)45%～60%，約有3 000多種各類蛋白［27，28］。BIO處理煙株氮素代謝的增強(qiáng)使得更多的氨基酸和蛋白質(zhì)得以合成，能夠完善葉綠素－蛋白復(fù)合體的組織結(jié)構(gòu)和葉綠體內(nèi)囊體膜的功能，增加煙葉對(duì)葉綠素a和b的“庫(kù)容量”。2）施用微生物有機(jī)肥提高煙葉蔗糖轉(zhuǎn)化酶的活性，增強(qiáng)煙株的碳代謝強(qiáng)度，為葉綠素的生物合成提供更多的碳骨架和能量［29］。3）微生物有機(jī)肥中氨基酸態(tài)氮占總氮的60%以上，在化學(xué)肥料施用的基礎(chǔ)上，隨著微生物有機(jī)肥的施用，少量的有機(jī)氮素進(jìn)入土壤，這些有機(jī)氮素特別是氨基酸態(tài)氮可能也是影響烤煙葉片葉綠素含量的重要因素。武雪萍［30］研究發(fā)現(xiàn)，外源氨基酸的使用，不僅能提高葉片氨基酸的積累量，同時(shí)增強(qiáng)了煙葉葉綠體色素的合成，葉綠素a、葉綠素b與類胡蘿卜素的含量都有所增加。

3.2 施用微生物有機(jī)肥對(duì)烤煙成熟度的影響

煙葉采收成熟度是確定烤后煙葉形成最終產(chǎn)品的重要因素，也是煙葉質(zhì)量的核心，充分成熟的煙葉不僅易于烘烤，烤后煙葉外觀質(zhì)量高，而且醇化效果好，香氣量足，吸食效果佳［31］。新植二烯和大多數(shù)中性香味物質(zhì)的含量及醛類、酮類、醇類的總量都隨著成熟度的增加而呈增加趨勢(shì)［32］，成熟時(shí)煙葉的糖含量高，總氮、煙堿含量適宜，各種化學(xué)比值協(xié)調(diào)，煙葉香氣量足，香氣質(zhì)好，雜氣、刺激性明顯減輕，總體香、吃味最好，而成熟不夠或者過(guò)熟的煙葉，其內(nèi)在質(zhì)量明顯降低［33］。在本試驗(yàn)中，BIO處理煙葉的成熟期相對(duì)延長(zhǎng)，煙葉不僅生理成熟，且內(nèi)在物質(zhì)的生理生化反應(yīng)因后期植株C／N代謝的加強(qiáng)而能夠轉(zhuǎn)化充分進(jìn)行，煙葉香味質(zhì)量達(dá)最佳狀態(tài)；CK處理煙葉葉綠素后期降解較快，煙株不耐衰老，煙葉在沒有達(dá)到生理成熟之前，就停止了自身的生長(zhǎng)和干物質(zhì)積累，同時(shí)進(jìn)行大量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗或轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致煙葉外觀呈黃化狀態(tài)，未老而先衰，屬于一種“假熟”狀態(tài)［7，23］。近年來(lái)當(dāng)?shù)剞r(nóng)戶濫用化肥，忽略有機(jī)肥的施用，導(dǎo)致土壤板結(jié)、保水性差，土壤有機(jī)質(zhì)含量下降，生物活性降低，磷肥、鉀肥及微量元素等養(yǎng)分的利用率不高，難以滿足烤煙生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)和平衡，這些外在環(huán)境的脅迫是造成煙株早衰的重要原因。同時(shí)長(zhǎng)期的連作造成土壤有害病原菌繁衍，微生物多樣性失調(diào)，土壤生態(tài)肥力下降嚴(yán)重，煙株抗逆、抗病能力不高，這也導(dǎo)致了煙葉致香成分含量較低，香氣質(zhì)量不佳。蘇海燕等［34］研究發(fā)現(xiàn)，新植二烯、類胡蘿卜素類和苯丙氨酸類致香成分隨連作階梯下降，類西柏烷類和棕色化產(chǎn)物總體上呈降低趨勢(shì)，這對(duì)于烤煙生產(chǎn)來(lái)說(shuō)嚴(yán)重不利。

微生物有機(jī)肥原料來(lái)源廣泛，其成分、組成比例、含量肥料種類間差異較大，其對(duì)于烤煙葉片致香物質(zhì)的影響可能是包括有益微生物和促生物質(zhì)在內(nèi)的各種肥料成分共同作用的結(jié)果，因此，在下一步的研究中有必要對(duì)其各種成分進(jìn)行分解試驗(yàn)，深入研究，以找出微生物有機(jī)肥對(duì)烤煙葉片香味品質(zhì)影響的機(jī)理。

［1］解燕，王文楷，趙杰，等.煙草鉀素營(yíng)養(yǎng)與鉀肥研究［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2006，22（8）：302－307.

［2］習(xí)向銀.煙堿氮素來(lái)源和供氮對(duì)烤煙生長(zhǎng)、氮素吸收和煙堿含量的影響［D］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005.

［3］劉國(guó)順.煙草栽培學(xué)［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2003：1－3，166－171，243.

［4］何秀成，邱慧珍，任俊達(dá)，等.不同頂端調(diào)控措施對(duì)烤煙鉀及煙堿含量的影響［J］.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，44（4）：87－91.

［5］胡娟，邱慧珍，何秀成，等.施鉀水平對(duì)甘肅烤煙鉀含量及經(jīng)濟(jì)效益的影響［J］.草業(yè)學(xué)報(bào)，2010，19（5）：156－160.

［6］趙銘欽，李曉強(qiáng)，韓靜，等.不同基因型烤煙中性致香物質(zhì)含量的研究［J］.中國(guó)煙草學(xué)報(bào)，2008，14（3）：46－50.

［7］史宏志，劉國(guó)順.煙草香味學(xué)［M］.北京：農(nóng)業(yè)出版社，1998：58－59，98－99，180－217.

［8］李昌新，趙鋒，芮雯奕，等.長(zhǎng)期秸稈還田和有機(jī)肥施用對(duì)雙季稻田冬春季雜草群落的影響［J］.草業(yè)學(xué)報(bào)，2009，18（3）：142－147.

［9］易建華，張新要，李天福，等.不同有機(jī)質(zhì)土壤餅肥用量對(duì)烤煙產(chǎn)量和質(zhì)量的影響［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2006，22（10）：216－220.

［10］黃元炯，張毅，張翔，等.腐殖酸和餅肥對(duì)土壤微生物和烤煙產(chǎn)質(zhì)量的影響［J］.中國(guó)煙草科學(xué)，2008，14（增刊）：25－28.

［11］郭群召，吳學(xué)巧，黃平俊.餅肥對(duì)土壤性狀、烤煙生長(zhǎng)及煙葉品質(zhì)的影響［J］.中國(guó)土壤與肥料，2007，（6）：69－70.

［12］郭紅祥，陳良純，張聯(lián)合，等.配施餅肥對(duì)烤煙化學(xué)成分、致香物質(zhì)成分的影響［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，33（4）：662－664.

［13］張新要，李天福，劉衛(wèi)群，等.配施餅肥對(duì)烤煙葉片含氮化合物代謝及酶活性的影響［J］.中國(guó)煙草科學(xué)，2004，（3）：31－34.

［14］張延軍，文俊，黃平俊，等.配施芝麻餅肥對(duì)烤后煙葉主要揮發(fā)性香氣物質(zhì)含量的影響［J］.鄭州輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2008，23（2）：30－33.

［15］介曉磊，王鎮(zhèn)，化黨領(lǐng)，等.生物有機(jī)肥對(duì)土壤氮磷鉀及煙葉品質(zhì)成分的影響［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2010，26（1）：109－114.

［16］王佩，劉國(guó)順，李蘭周，等.不同種類肥料對(duì)烤煙中性致香物質(zhì)的影響［J］.土壤通報(bào)，2010，41（3）：109－114.

［17］趙銘欽，王瑩，李元實(shí)，等.有機(jī)物質(zhì)對(duì)烤煙中性香氣物質(zhì)成分及評(píng)吸質(zhì)量的影響［J］.中國(guó)煙草科學(xué)，2008，29（5）：6－10.

［18］黃永成，宮長(zhǎng)榮，郭瑞，等.烤煙中色素與香味物質(zhì)的關(guān)系研究進(jìn)展［J］.河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，（2）：5－9.

［19］錢育蓉，楊峰，李建龍，等.利用高光譜數(shù)據(jù)快速估算高羊茅牧草光合色素的研究［J］.草業(yè)學(xué)報(bào)，2009，18（4）：94－102.

［20］韋鳳杰.餅肥對(duì)烤煙質(zhì)體色素變化和品質(zhì)形成的影響及其生理機(jī)制［D］.鄭州：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006.

［21］周杰.煙葉細(xì)胞結(jié)構(gòu)和相關(guān)酶活性變化與烤煙成熟度相關(guān)性的研究［D］.長(zhǎng)沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

［22］過(guò)偉民，尹啟生，宋紀(jì)真.煙草質(zhì)體色素及其降解產(chǎn)物影響因素研究進(jìn)展［J］.華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2008，23（增刊）：358－362.

［23］周冀衡，朱小平，王彥亭，等.煙草生理與生物化學(xué)［M］.合肥：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)出版社，1996：432－434.

［24］劉峰，石孝均，楊超，等.有機(jī)無(wú)機(jī)氮肥配施對(duì)山地烤煙生長(zhǎng)、抗病性及香吃味的影響［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2010，26（16）：187－190.

［25］劉衛(wèi)群，韓錦峰，史宏志，等.數(shù)種烤煙品種中碳氮代謝與酶活性的研究［J］.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，3（1）：22－26.

［26］李佛琳，趙春江，王紀(jì)華，等.應(yīng)用葉綠素計(jì)診斷烤煙氮素營(yíng)養(yǎng)狀況［J］.植物營(yíng)養(yǎng)與肥料學(xué)報(bào)，2007，13（1）：136－142.

［27］陸景陵.植物營(yíng)養(yǎng)學(xué)上冊(cè)［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2006：23－24.

［28］張峰，王玉萍，黃惠英，等.T－DNA插入對(duì)擬南芥突變體色素和內(nèi)囊體膜色素蛋白復(fù)合物的影響［J］.草業(yè)學(xué)報(bào)，2008，17（5）：145－150.

［29］陳江華，劉建利，李志宏，等.中國(guó)植煙土壤及煙草養(yǎng)分綜合管理［M］.北京：科學(xué)出版社，2008：93－94.

［30］武雪萍.餅肥有機(jī)營(yíng)養(yǎng)對(duì)土壤生化特性和烤煙品質(zhì)作用機(jī)理的研究［D］.太谷：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)，2003.

［31］韓富根，彭麗麗，馬永建，等.不同采收成熟度對(duì)烤煙香氣質(zhì)量的影響［J］.土壤，2010，42（1）：65－70.

［32］朱忠，洗可法，尚希勇.中上部不同成熟度烤煙煙葉與主要化學(xué)成分和香味物質(zhì)組成關(guān)系的研究［J］.中國(guó)煙草學(xué)報(bào)，2008，14（1）：6－12.

［33］趙銘欽，于建春，程玉淵，等.烤煙煙葉成熟度與香氣質(zhì)量的關(guān)系［J］.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，10（3）：10－14.

［34］蘇海燕，程傳策，宮長(zhǎng)榮，等.連作對(duì)烤煙化學(xué)成分和中性致香物質(zhì)的影響［J］.江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，22（5）：5－8.