方偉達 梁文勇 余其昌

鼻咽癌是我國腫瘤疾病中的常見病，且占頭頸部腫瘤發(fā)病率的首位。nm23蛋白屬于腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，其表達的減少可以導致腫瘤的轉(zhuǎn)移；增殖細胞核抗原( proliferating cell nuclear antigen,PCNA)可以反映細胞的增殖狀況。我們通過免疫組織化學技術檢測nm23蛋白和PCNA在鼻咽癌組織中的表達,初步分析其表達結果與鼻咽癌浸潤轉(zhuǎn)移、惡性程度及預后的關系。

1 材料與方法

1.1 材料來源

收集我院2006年9月～2007年11月經(jīng)病理檢查確診的66例鼻咽癌患者的資料。所有患者均未經(jīng)放射及化學藥物治療，并有完整臨床及隨訪資料,其中男性48例,女性18例,年齡18～73歲,中位年齡為48歲。同時選擇該期間病理診斷為慢性鼻咽炎患者32例作為對照組。

1.2 免疫組化染色

免疫組化染色采用SP法,第一抗體nm23蛋白和PCNA以及SP試劑盒均購自福州邁新公司,抗體均為即用型。所有標本均經(jīng)10%中性福爾馬林溶液固定,石蠟包埋,切片,行HE染色和免疫組化染色。用已知陽性片做陽性對照,用PBS液代替一抗做陰性對照。按照說明書進行操作。

1.3 結果判定

nm23蛋白表達主要位于胞質(zhì)內(nèi),胞膜及胞核內(nèi)可見少量弱陽性表達；PCNA以細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞;在400倍顯微鏡下計數(shù)5個隨機視野,取平均值,分別記為:陽性細胞數(shù)≤5%為“-”；5%<陽性細胞數(shù)≤25%為“+”； 25%<陽性細胞數(shù)≤50%為“++”；陽性細胞數(shù)> 50%為“+++”。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件進行分析。標本均數(shù)間比較采用t檢驗，率的比較采用 χ2檢驗。

2 結果

2.1 鼻咽癌組織和慢性鼻咽炎中nm23蛋白和PCNA的表達

nm23蛋白在鼻咽癌組織和鼻咽慢性炎中的陽性率分別為66.7%(44/66)、21.9%(7/32)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PCNA在鼻咽癌組織和慢性鼻咽炎組織中的陽性表達率分別為60.6%(40/66)、12.5%(4/32)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 鼻咽部不同病變組織nm23蛋白和PCNA的表達情況(例)

2.2 鼻咽癌轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組中nm23蛋白和PCNA的表達

nm23蛋白在鼻咽癌轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組中的陽性率為21.4%，83.3%，兩者差異有統(tǒng)計學意義；PCNA在鼻咽癌轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組中的陽性率為78.6%，25.0%，兩者差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 鼻咽癌轉(zhuǎn)移和非轉(zhuǎn)移組PCNA和nm23蛋白的表達情況(例)

2.3 鼻咽癌組織中nm23蛋白和PCNA的表達相關性

在 66例鼻咽癌中，nm23蛋白和PCNA相互間無明顯的關聯(lián)性，見表3。

表3 nm23蛋白和PCNA在鼻咽癌的表達關系 (例)

3 討論

nm23基因最先是1988年在美國國立癌癥研究所從鼠黑色素瘤細胞系cDNA 基因文庫中分離鑒定出來的抗轉(zhuǎn)移癌基因,因為在低轉(zhuǎn)移細胞株中nm23 基因的表達強度是高轉(zhuǎn)移細胞株的10 倍,這就表明nm23 基因可能與腫瘤的轉(zhuǎn)移抑制有關。nm23 基因的蛋白產(chǎn)物是NDPK,它為正常組織發(fā)育所必需，nm23蛋白的點突變、等位基因丟失均可使nm23蛋白失活或者減少,導致1種有利于畸形分化的紊亂狀態(tài)，進而喪失對腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制功能，同時nm23 基因表達低調(diào)節(jié)時,提示預后較差。本組實驗結果顯示,鼻咽癌組織中nm23 蛋白的陽性表達率與慢性鼻咽炎比較有顯著性差異；nm23蛋白在鼻咽癌轉(zhuǎn)移組中低表達,說明nm23 低表達減弱了抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的能力，故可將檢測nm23 的表達作為預測鼻咽癌轉(zhuǎn)移情況的1項較好指標。

增殖細胞核抗原(PCNA)又稱周期素,作為DNA 聚合酶輔助蛋白，其表達和合成與細胞增殖周期相關。細胞增殖率可反應腫瘤的生物學活性，細胞過度增殖可能導致腫瘤的發(fā)生，因此腫瘤細胞增殖水平反映了腫瘤的惡性程度。PCNA 的表達可以反映細胞的增殖活性，所以檢測細胞PCNA已廣泛應用于判斷各種腫瘤疾病的惡性程度。王書芹等[1]研究鼻咽癌組織中PCNA 的表達時發(fā)現(xiàn),PCNA 高表達者較易發(fā)生轉(zhuǎn)移,但PCNA 的表達與患者的生存期無關。而吳又明等[2]研究認為,PCNA 高表達者較易發(fā)生轉(zhuǎn)移,并且PCNA 高表達者生存期較長,原因是PCNA 高表達者細胞增殖速度快,對放療敏感性強,放療效果好。本研究發(fā)現(xiàn),鼻咽癌組織中PCNA的陽性表達率與慢性鼻咽炎比較有顯著性差異，這與朱秀梅等[3]的研究結果相符。PCNA在鼻咽癌轉(zhuǎn)移組中的比例低于非轉(zhuǎn)移組，此觀點與上面學者的觀點有相同之處。本研究結果表明PCNA的表達與鼻咽癌的惡性程度和高轉(zhuǎn)移能力相關,是評價鼻咽癌有價值的指標。本實驗表明nm23蛋白和PCNA兩者間并沒有明顯的相關性，這是否與樣本量較少有關還有待于進一步探討。

總之，我們認為,nm23蛋白和PCNA均能各自很好地反映鼻咽癌的惡性程度和轉(zhuǎn)移性，并能作為預測鼻咽癌轉(zhuǎn)移情況的1項較好的參考指標。

[1] 王書芹,周小軍,禤瑞霞.鼻咽癌組織中PCNA 和P16 的表達及意義〔J〕.中華臨床醫(yī)學雜志,2004,5(4) :31.

[2] 吳又明,儲 兵.nm23、P53、PCNA 的表達與鼻咽癌轉(zhuǎn)移預后關系的研究〔J〕.診斷病理學雜志,2000,7(3) :204.

[3] 朱秀梅，鐘良清.MCM5和PCNA在鼻咽低分化鱗癌中的表達及意義〔J〕.中國當代醫(yī)藥，2009,9(16)：36.