馬學偉 陳 虎 張培紅 云雅卿 王家穎

(河北省中醫(yī)藥研究院皮膚科，河北 石家莊 050031)

克銀Ⅰ號方對尋常型銀屑病患者表皮及真皮中Bcl-X表達的影響※

馬學偉 陳 虎 張培紅1云雅卿2王家穎3

(河北省中醫(yī)藥研究院皮膚科，河北 石家莊 050031)

目的 觀察克銀Ⅰ號方對尋常型銀屑病患者表皮及真皮中Bcl-X表達的影響。方法 將40例尋常型銀屑病患者隨機分為2組，治療組20例應用克銀Ⅰ號方治療，對照組20例應用阿維A膠囊治療。2組均30 d為1個療程，治療3個療程后進行療效評定。并選取10例正常皮膚作為正常組。結(jié)果 2組總有效率均90.0%，比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。正常組表皮、真皮少量淋巴細胞及血管內(nèi)皮盡顯弱陽性。治療組、對照組治療前表皮各層、真皮炎癥細胞及血管內(nèi)皮Bcl-X的表達均明顯高于正常組(P＜0.01)。2組治療后Bcl-X的表達除基底層變化不大外，其余均較本組治療前降低(P＜0.01)。治療后表皮角質(zhì)層、真皮炎癥細胞及血管內(nèi)皮Bcl-X的表達已基本恢復正常，顆粒層、棘層、基底層仍高于正常(P＜0.01)。2組治療后比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。結(jié)論 克銀Ⅰ號方可能通過改善Bcl-X在銀屑病表皮及真皮中的表達發(fā)揮治療作用，且無明顯不良反應。

銀屑病;中藥療法;表皮;真皮;基因，Bcl-2;基因表達;免疫組織化學

※項目來源:河北省科學技術研究與發(fā)展計劃項目(編號:09276418D-22)

1 河北省中醫(yī)藥研究院婦科，河北 石家莊 050031

2 河北省高陽縣中醫(yī)院內(nèi)科，河北 高陽 071500

3 河北省高陽縣醫(yī)院兒科，河北 高陽 071500

銀屑病是皮膚科常見病、疑難病，是一種多基因控制的良性增生性炎癥性疾病。目前已發(fā)現(xiàn)其皮損的角質(zhì)形成細胞中有某些凋亡相關分子的異常表達。2006-01—2011-01，我們應用克銀Ⅰ號方治療尋常型銀屑病20例，并與阿維A膠囊治療20例對照觀察，并檢測銀屑病患者皮損部位表皮及真皮中Bcl-X的表達，結(jié)果如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 全部40例均為河北省中醫(yī)藥研究院皮膚科門診患者，隨機分為2組。治療組20例，男11例，女9例;年齡15～65歲，平均36.3歲;病程3個月 ～27年，平均5.8年。對照組20例，男12例，女8例;年齡16～61歲，平均33.8歲;病程4個月～24年，平均6.3年。同時選取10例手術室正常皮膚作為正常組。標本用10%甲醛溶液固定，石蠟包埋并連續(xù)切片。

1.2 診斷標準

1.2.1 西醫(yī)診斷標準 參照《臨床皮膚病學》［1］中尋常型銀屑病的診斷標準。皮膚損害以紅色炎性丘疹、斑丘疹及大小不等的斑片為主，上覆多層銀白色鱗屑，刮除鱗屑可見一層光亮的薄膜，薄膜下可有點狀出血。皮損形式可有點滴狀、錢幣狀、地圖狀、混合狀等多種類型，但境界明顯。皮損可發(fā)生在身體表面各處，發(fā)生頭皮處者，毛發(fā)呈束狀;發(fā)于甲板(指、趾)者，可有點狀凹坑呈頂針狀或甲板不平整、變黃增厚?？砂橛胁煌潭鹊酿W。

1.2.2 中醫(yī)證候診斷標準 參照《中藥新藥臨床研究指導原則》(試行)［2］中風熱型白疕的診斷標準。主癥:新皮疹不斷出現(xiàn)，以丘疹、斑丘疹為主，皮疹基底皮膚顏色鮮紅，刮去鱗屑見點狀出血，可有同形反應。次癥:初發(fā)或復發(fā)，可有不同程度疹癢，心煩口渴或口干，便秘尿黃，舌質(zhì)紅，苔黃，脈數(shù)。具備主癥及次癥2項以上者，可診斷為該證候。

1.2.3 納入標準 所有病例既符合西醫(yī)尋常性銀屑病診斷，又符合中醫(yī)風熱型白疕診斷;常規(guī)檢查除外其他器質(zhì)性病變;入院前3個月內(nèi)未使用皮質(zhì)類固醇、免疫抑制劑、復方氨肽素片和維A酸者。

1.2.4 排除標準 合并有嚴重心、肝及腎等內(nèi)臟疾病患者;妊娠期、哺乳期婦女;不配合檢測與定期復診而影響療效和安全性判斷者。

1.2.5 剔除標準 由于主觀或客觀原因，未按規(guī)定用藥，無法判定療效，資料不全影響療效判斷者;納入后發(fā)現(xiàn)不符合診斷標準。

1.3 治療方法

1.3.1 治療組 采用克銀Ⅰ號方。藥物組成:紫草15 g，赤芍藥 12 g，生地黃15 g，紅花12 g，當歸12 g，全蝎6 g，水牛角粉20 g，蜈蚣2條，大血藤30 g，黃芩12 g，連翹12 g。日1劑，水煎2次取汁300 mL，分早晚2次服。

1.3.2 對照組 予阿維A膠囊(重慶華邦制藥股份有限公司，國藥準字H20010126)，起初每日30 mg，頓服(與主餐一起)。3周后，每次20 mg，每日3次服。

1.3.3 療程 2組均30 d為1個療程，治療3個療程后進行療效評定，治療期間停用其他一切藥物。

1.4 觀察指標及方法 應用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法(SP)法，切片常規(guī)脫蠟水化，加3%過氧化氫(H2O2)室溫處理10 min，在枸櫞酸鹽緩沖液(pH 6.0)中微波加熱10 min進行抗原修復?；颊哂盟幒竺看坞S訪或就診時，詢問并記錄患者可能出現(xiàn)的不良反應及程度。

1.5 療效標準 皮損情況采用國際通用的銀屑病面積和嚴重程度指數(shù)(PASI)評分法［1］。按紅斑、浸潤、鱗屑及皮損面積進行PASI評分。治愈:PASI較治療前下降90%以上;顯效:PASI下降60% ～90%;無效:PASI下降不足30%或無變化［1］。

1.6 實驗判斷標準 以胞質(zhì)或胞膜有棕黃色顆粒狀沉積為陽性。先按陽性細胞比例將無、1% ～25%、26% ～50%、51% ～75%、76% ～100%分別記為0～4分;再按染色強度將無、弱、中、強分別記為0 ～3 分［1］。

1.7 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學分析，計量資料用均數(shù)±標準差(±s)表示，采用t檢驗;計數(shù)資料率的比較采用χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1 2組療效比較 見表1。

表1 2組療效比較 例

由表1可見，2組總有效率比較差異無統(tǒng)計學意義(P﹥0.05)。

2.2 2組治療前后表皮及真皮中Bcl-X表達 見表2。

表2 2組治療前后表皮及真皮中Bcl-X表達

由表2可見，正常組表皮、真皮少量淋巴細胞及血管內(nèi)皮盡顯弱陽性。治療組、對照組治療前表皮各層、真皮炎癥細胞及血管內(nèi)皮Bcl-X的表達均明顯高于正常組(P＜0.01)。2組治療后Bcl-X的表達除基底層變化不大外，其余均較本組治療前降低(P＜0.01)。治療后表皮角質(zhì)層、真皮炎癥細胞及血管內(nèi)皮Bcl-X表達基本恢復正常，顆粒層、棘層、基底層仍高于正常(P＜0.01)。2組治療后比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

2.3 2組不良反應比較 對照組在用藥過程中有2例出現(xiàn)口干、眼干，3例出現(xiàn)手足明顯脫屑，2例出現(xiàn)惡心、腹痛。治療組未發(fā)現(xiàn)不良反應。在2年內(nèi)有生育愿望的女性禁用阿維A膠囊，克銀Ⅰ號方無此副作用。

3 討論

銀屑病是一種常見的炎癥增生性皮膚病，其發(fā)病因素復雜，近年來認為其發(fā)病很大程度上取決于遺傳背景。細胞凋亡是細胞在一定條件下，通過啟動其自身內(nèi)部機制，引起內(nèi)源性DNA內(nèi)切酶的激活而發(fā)生細胞的自然死亡。凋亡作為一種對宿主本身無害的程序性細胞死亡，是按照一定的固有模式對體內(nèi)損傷的、死亡的以及多余的各種細胞進行有效地清除［3］。Bcl-X是新近發(fā)現(xiàn)的Bcl-2家族的基因，文獻報道Bcl-X具有2種表達形式Bcl-xL和Bcl-xS，Bcl-xL為重要的凋亡抑制基因，是比較重要的癌基因，在細胞凋亡過程中有著重要影響;而Bcl-xS為通過抑制Bcl-2而發(fā)揮作用的重要的促凋亡基因［4］。有研究者采用免疫組化和流式細胞技術做了更深入的研究，發(fā)現(xiàn)角朊細胞中Bcl-2與Bcl-X表達不一致，銀屑病皮損中的角朊細胞無Bcl-2，卻有很高的Bcl-X。由此得出結(jié)論:銀屑病中Bcl-X的過度表達可能阻斷了角朊細胞的最終分化與凋亡，使之獲得永生性，有特殊的病理生理意義［3］，銀屑病中Bcl-X的過度表達改變了角朊細胞的正常分化，引起過度增生，可解釋病理學上的棘層增厚、角化異常表現(xiàn)。茅曉紅［5］研究發(fā)現(xiàn)銀屑病表皮存在Bcl-X的過度表達，Bcl-2表達與正常相似，而且皮損真皮的炎癥浸潤細胞Bcl-X表達增多，治療后恢復正常。這與我們的研究結(jié)果一致。

中醫(yī)學認為，銀屑病的發(fā)生多與內(nèi)有伏熱、瘀毒內(nèi)蘊，血虛受風、寒濕阻滯有關，我們臨床所觀察的尋常型銀屑病40例患者為風熱型，風熱侵淫，毒蘊濁停，阻于肌膚，肌膚失養(yǎng)，故治宜解毒化濁，涼血搜風通絡。克銀Ⅰ號方中紫草、大血藤清熱解毒涼血為君藥;生地黃、赤芍藥、水牛角粉清熱涼血為臣藥;配伍當歸養(yǎng)血通絡，全蝎、蜈蚣搜風通絡，紅花活血通絡為佐藥;連翹清熱散結(jié)為使藥。諸藥配伍，使熱毒能清，毒濁能解，經(jīng)脈通暢，血行風自滅，進而達到治療目的。我們應用克銀Ⅰ號方治療尋常型銀屑病發(fā)現(xiàn)，治療前皮損表皮各層、真皮炎癥細胞及血管內(nèi)皮的Bcl-X表達均明顯高于正常。2組治療后Bcl-X除基底層變化不大外，其余比治療前均有降低，表皮角質(zhì)層、真皮炎癥細胞及血管內(nèi)皮Bcl-X已基本恢復正常，顆粒層、棘層、基底層仍顯著高于正常。說明克銀Ⅰ號方與阿維A膠囊作用相當。另外，國外文獻認為，表皮及血管內(nèi)皮Bcl-X水平的變化早在非皮損中就已發(fā)生，經(jīng)治療不能完全恢復正常，提示銀屑病的發(fā)生可能受基因調(diào)控，并且是皮損復發(fā)的基礎［6］。應對銀屑病這種高復發(fā)的疾病，克銀Ⅰ號方有效且無明顯不良反應，將是銀屑病患者臨床用藥的良好選擇。

［1］趙辨.臨床皮膚病學［M］.3版.南京:江蘇科學技術出版社，2001:762-764.

［2］鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導原則(試行)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2002:299.

［3］游浩，張端蓮，陜聲國.Bcl-Xl基因在血管瘤組織中表達的研究［J］.數(shù)理醫(yī)藥學雜志，2006，19(6):586-588.

［4］Nicolosi A，Moreira ED Jr，Shirai M，et al.Epidemiology of erectile dysfunction in four countries:cross-national study of the prevalence and correlates of erectile dysfunction［J］.Urology，2003，61(1):201-206.

［5］茅曉紅.銀屑病皮損中原癌基因Bcl-X的表達及意義［J］.國外醫(yī)學:皮膚性病學分冊，1998，24(4):200-203.

［6］Wang ET，Sandberg R，Luo S，et al.Alternative isoform regulation in human tissue transcriptomes［J］.Nature，2008，456(7221):470-476.

Effects of KeyinⅠRecipe on the immunohistochemical study of epidermal and dermal expression of Bcl-X in psoriasis

MA Xuewei*，CHEN Hu，ZHANG Peihong，et al.*Department of Dermatology，Hebei Provincial Institute of Traditional Chinese Medicine，Hebei，Shijiazhuang050031

ObjectiveTo observe the effect of KeyinⅠRecipe on epidermal and dermal expression of Bcl-X in psoriasis.Methods40 patients with psoriasis were randomly divided into two groups.20 psoriasis patients in treatment group were treat by KeyinⅠRecipe，and 20 psoriasis patients in control group were treat by acitretin capsules.The therapeutic course was 30 days in two groups.The clinical effect was evaluated after three courses.The expressions of Bcl-X were detected by immunohistochemical technique(SP)in the lesional and psoriatic skin.ResultsThere was no difference between two groups on the total effective rate(P＞0.05).Expressions of Bcl-X in all layers of epidermis，inflammatory cells and vascular endothelia in dermis were higher than those in normal control group(P＜0.01).After the treatment，the expression of Bcl-X in all layers were significantly decreased as compared with those before treatment except in basal layer(P＜0.01).The expression of Bcl-X in cuticle of epidermis，inflammatory cells and vascular endothelia in dermis were turn to normal level，and the expression of Bcl-X in stratum granulosum and stratum spinosum in the lesional skin were still over-expression(P＜0.01).ConclusionKeyinⅠRecipe is effective in adjusting the expression of Bcl-X in epidermis and dermis and no significant adverse reaction.

Psoriasis;Therapy of Chinese herb;epidermis;dermis;Bcl-X;Gene expression;Immunohistochemistry

R392.31;R394.2;R758.630.22

A

1002-2619(2011)12-1771-03

馬學偉(1968—)，女，副主任醫(yī)師，學士。從事中西醫(yī)結(jié)合治療皮膚病臨床工作。

2011-11-02)