孫亞波 ，宋先忱 ，，叢玉艷 ，李豐田 ，劉興偉 ，張喜臣 ，豆興堂 ，邵孟越 ，王家明

（1.遼寧省畜牧科學研究院，遼陽 111000；2.遼寧省遼寧絨山羊原種場有限公司，蓋州 115200；3.沈陽農(nóng)業(yè)大學畜牧獸醫(yī)學院）

遼寧絨山羊產(chǎn)絨量高，絨品質(zhì)好，改良效果顯著，遺傳性能穩(wěn)定。優(yōu)良的種公羊是保證遼寧絨山羊群體遺傳性能穩(wěn)定提高的前提，在強度較高的采精模式下，種公羊?qū)θ占Z營養(yǎng)水平要求較高，同時對某些與繁殖性能密切相關的微量礦物質(zhì)元素、維生素和甾醇類及環(huán)烯醚萜類等有機活性成分需求較高。中草藥內(nèi)既含有許多營養(yǎng)成分，又存在著多種生物活性物質(zhì)，是純天然有機物質(zhì)，具有營養(yǎng)與調(diào)理并存的雙重作用，同時毒副作用小、無耐藥性、不易殘留。中草藥添加劑的有效成分主要有生物堿、揮發(fā)油、鞣類、樹脂類、有機酸、糖類、蛋白質(zhì)和氨基酸，以及油脂、植物色素、維生素和各種微量和常量元素等。中草藥本身為天然有機物和無機物，保持了各種成分結(jié)構(gòu)的自然狀態(tài)和生物活性而具有多能性，如營養(yǎng)作用、增強免疫作用、激素樣作用、抗應激作用和抗菌作用等。

根據(jù)中獸醫(yī)理論，淫羊藿有調(diào)節(jié)內(nèi)分泌功能，能促進精液分泌、雄性性腺功能，增強腎上腺皮質(zhì)功能；其有效成分為淫羊藿苷、淫羊藿黃酮、木蘭堿、多糖、揮發(fā)油、蠟醇、植物甾醇、鞣質(zhì)、油脂等。枸杞子有滋補肝腎，益精明目之功效，枸杞多糖是枸杞子的有效活性成分，具有抗氧化和提高免疫力的作用。巴戟天有補腎助陽、祛風除濕、強筋健骨的功效，具有腎上腺皮質(zhì)激素樣作用，其主要成分為甲基異茜草素、大黃甲醚、水晶蘭甙和強心甙等蒽醌類有機活性成分。

以淫羊藿、枸杞子和巴戟天等中草藥為主調(diào)制的中草藥添加劑具有固精、補腎、抗氧化和增強免疫的功效。本研究擬對在高強度采精模式下的種公羊應用中草藥添劑，探討其對精液品質(zhì)和激素水平的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及分組 試驗動物來自遼寧絨山羊原種場有限公司科技示范場。選6只體況良好、年齡3.79歲±0.29歲、體重77.04 kg±2.96 kg、精液品質(zhì)相近的采精種公羊為研究對象。將6只種公羊隨機分為2組，以其中3只作為試驗組，另外3只作為對照組。

1.2 試驗設計及飼養(yǎng)管理 復方中草藥添加劑以淫羊藿、巴戟天等為主，并用大麥為輔料配制而成。用玉米面作為載體，中草藥按照1∶3的比例與玉米面混合加入日糧精料中，使用劑量為試驗組每只羊15 g/d。所有參試動物每天上午8：00和下午16：00 2次飼喂，自由采食和飲水。對照組和試驗組精料營養(yǎng)水平相同，精料由玉米、豆粕、磷酸氫鈣、石粉、食鹽和預混劑組成；粗飼料由苜蓿干草和羊草組成，苜蓿干草由遼寧省畜牧草業(yè)工程技術中心提供。試驗動物精料組成和營養(yǎng)水平如表1所示。

1.3 樣品采集及試驗指標測定 本研究預試期30 d，試驗期90 d，每30 d采集一次血樣和精液樣品，用Eppendorf-5804R型低溫高速離心機以4 500 r/min的速度離心15 min，制備血漿和精漿并于-70℃保存。采精量測定用2mL注射器從集精杯中直接吸取測量；精子活率檢測使用Leica DM100型顯微鏡進行；精子密度應用德國PHOTOMETER-SDM5型全自動精子密度儀進行檢測；精液pH值應用pH儀測定；精子畸形率和頂體完整率通過考馬斯亮藍染色，在Leica DM100型顯微鏡下觀測計算獲得；美蘭褪色時間通過美蘭染色［1］計時獲得。血漿和精漿生殖激素應用BioTek GEN5全自動酶標儀進行檢測，檢測試劑盒由天津瑞普生物公司提供。

表1 精料組成及營養(yǎng)水平

1.4 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析應用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行獨立樣本 t檢驗（independent-samples T test），相關分析圖應用Microsoft Excel制作。

2 結(jié)果與討論

2.1 精液品質(zhì)常規(guī)指標 如表2所示，在試驗開始前，對所有參試動物進行了精液樣品采集，并進行檢查。結(jié)果表明，對照組與試驗組在射精量、精子活率、精子密度、精液pH、頂體完整率、精子畸形率和美蘭褪色時間7項指標均差異不顯著（P＞0.05）。

在飼喂中草藥添加劑30 d后，試驗組射精量高于對照組0.13mL，但差異不顯著（P＞0.05）；精子密度高于對照組 0.43×109個/mL，差異不顯著（P＞0.05）；頂體完整率高于對照組1.81%，且差異顯著（P＜0.05）；畸形率低于對照組1.76%，但差異不顯著（P＞0.05）；美蘭褪色時間低于對照組 41.33 min，且差異極顯著（P＜0.01）；而精子活率和精液pH沒有顯著變化。

在飼喂中草藥添加劑60 d和90 d后，試驗組射精量和精子密度均極顯著高于對照組（P＜0.01）；頂體完整率顯著高于對照組（P＜0.05）；美蘭褪色時間極顯著低于對照組（P＜0.01）；而精子活率和精子畸形率也有改善，但差異不顯著（P＞0.05）；精液pH也沒有顯著變化。

在本研究中，精子活率沒有明顯的變化，因為常規(guī)測定中精子活率通過顯微鏡目測獲得，由于受試驗觀測者個人視覺習慣以及不同觀測者個體差異的影響，測試結(jié)果誤差較大。因此本試驗還引入了美蘭褪色試驗作為補充，美蘭褪色試驗是一個氧化還原反應試驗，氧化后呈蘭色，還原呈無色。精子在美蘭溶液中，呼吸時氧化脫氫，美蘭獲得氫離子后便由蘭色還原為無色。因此，美蘭溶液褪色時間的長短可以反映一定量的精液中精子數(shù)量多少和精子活率的高低，這種方法較顯微鏡目測精子活率更為精確。從表2可以發(fā)現(xiàn)，試驗組美蘭褪色時間均少于對照組，并且隨著中草藥添加劑飼喂時間的延長，試驗組美蘭褪色時間也呈減少的趨勢。

在本研究中，對采精模式下種公羊以15 g/d的水平飼喂復方中草藥添加劑后，試驗組動物射精量和精子密度顯著高于對照組，同時頂體完整率高于對照組、美蘭褪色時間極顯著低于對照組，表明中草藥添加劑對精液的數(shù)量和質(zhì)量均有顯著改善。通過圖1和圖2中射精量和精子密度的分布曲線可以發(fā)現(xiàn)，在試驗進行的90 d中，試驗組的射精量分布線和精子密度分布線均位于對照組上方，射精量較高可能與淫羊藿中含有的淫羊藿苷和揮發(fā)油有關，后二者具有雄激素樣［2］作用，能促進精子產(chǎn)生。試驗組頂體完整率較高可能與淫羊藿黃酮和枸杞多糖有關，后兩者有具有抗氧化功能，小動物實驗證實淫羊藿黃酮［3］和枸杞多糖［4］能提高肝臟超氧化物歧化酶（SOD）活性和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性，因此二者對保護精子完整性有顯著作用。

表2 精液品質(zhì)常規(guī)指標

2.2 血漿3種激素的含量 如表3所示，在試驗開始前對照組和試驗組的血漿促卵泡素（FSH）含量差異不顯著（P＞0.05），隨著中草藥添加劑的飼喂試驗組FSH含量總體呈增加趨勢，但與對照組差異不顯著（P＞0.05）。血漿促黃體素（LH）含量也無顯著變化，在3個試驗階段試驗組與對照組均差異不顯著（P＞0.05），但試驗組LH水平隨著中草藥添加劑飼喂略呈增加趨勢。試驗組血漿睪酮（T）含量與對照組差異不顯著（P＞0.05），但試驗組T水平隨著中草藥添加劑的飼喂也呈增加趨勢。試驗組的血漿3種激素含量在數(shù)值上均高于對照組，并且隨著中草藥添加劑的應用均呈現(xiàn)增加趨勢，而且在中草藥添加劑飼喂60 d后最高。

表3 血漿幾種激素含量

2.3 血漿3種激素的相互關系 在本研究中，血漿和精漿以上3種生殖激素均呈相似的變化趨勢，隨著中草藥添加劑飼喂時間延長試驗組激素水平增加，在60 d后出現(xiàn)最高值，試驗組激素水平均高于對照組。此結(jié)果提示對種公羊飼喂中草藥添加劑2個月即可對激素水平產(chǎn)生影響，同時60 d也正是絨山羊精子發(fā)生到成熟的時間周期。統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)3種激素之間存在著相關關系，其中試驗組血漿 T（y，ng/L）與血漿 FSH（x，u/L）呈現(xiàn)對數(shù)關系：y=31.07 ln（x）-14.63，r2=0.66，n=9，P＜0.05，如圖 1 所示，與對照組的相關方程近似：y=29.47 ln（x）-13.95，r2=0.75，n=15，P＜0.05。

圖1 血漿 T（y，ng/L）與血漿 FSH（x，u/L）的相關關系

試驗組動物血漿 T（y，ng/L）與血漿 LH（x，μg/L）也呈對數(shù)關系：y=20.81ln（x）+70.40，r2=0.89，n=9，P＜0.05，如圖2所示，與對照組的相關方程近似：y=22.06ln（x）+68.98，r2=0.83，n=15，P＜0.05。

圖2 血漿 T（y，ng/L）與血漿 LH（x，μg/L）的相關關系

由以上2組相關方程可以得出，飼喂中草藥添加劑對各生殖激素的分泌直接影響較小，試驗組的曲線趨勢與對照組相似，但試驗組曲線均位于對照組上方，即表現(xiàn)為睪酮水平略高。睪酮能刺激精子發(fā)生、延長附睪中精子的壽命，本試驗中試驗組血漿睪酮水平只略高于對照組，而試驗組射精量卻顯著高于對照組，主要原因可能是淫羊藿苷的雄激素樣作用使試驗組動物精子產(chǎn)生量增加引起的。

2.4 精漿3種激素的含量 如表4所示，試驗組精漿中FSH與對照組差異不顯著（P＞0.05），并隨著中草藥添加劑飼喂時間的延長呈增加趨勢；精漿LH也呈現(xiàn)類似變化趨勢；精漿T水平也隨著中草藥添加劑飼喂時間的延長呈增加趨勢，從數(shù)值上看試驗組精漿各激素含量都略高于對照組，并且在中草藥添加劑飼喂60 d后最高。血漿和精漿生殖激素在90 d時比60 d略低，可能是前者正值12月，氣溫較低（為-20℃左右，而60 d時氣溫-5℃左右），從而影響了激素的水平。有研究證實低溫應激使大鼠LH與FSH水平降低［5］。

表4 精漿3種激素含量

促卵泡素、促黃體素和睪酮是雄性動物主要的生殖激素，對雄性配子的發(fā)生、發(fā)育、成熟和性行為的表達具有重要的調(diào)控作用。FSH是由腺垂體分泌的糖蛋白激素，能促進精細管增長，促進生精上皮細胞發(fā)育和分裂，刺激精原細胞增殖，并在T的協(xié)同作用下促進精子形成。LH是由腺垂體分泌的糖蛋白激素，可促進睪丸間質(zhì)細胞產(chǎn)生并分泌雄激素，對副性腺的發(fā)育和精子的成熟具有重要作用。T是由睪丸分泌的類固醇激素，動物體內(nèi)雄激素的生物活性以T最高，所以通常以T代表雄激素，對幼年動物可維持生殖器官和附性腺以及第二性征的發(fā)育，對于成年動物可刺激精細管發(fā)育，有利于精子生成，并維持雄性性欲。

2.5 精漿3種激素的關系 精漿是附睪、精囊、前列腺和尿道球（旁）腺等附屬性腺生成的分泌液所組成的混合物。精漿中的FSH和LH是由垂體前葉分泌再經(jīng)過血液循環(huán)到達睪丸，而T則主要是在睪丸內(nèi)由睪丸間質(zhì)細胞以自分泌形式產(chǎn)生，并且T對下丘腦和垂體有反饋調(diào)節(jié)作用，影響GnRH、LH和FSH分泌。

在本研究中，試驗組絨山羊精漿睪酮含量（y，ng/L）與促黃體激素（x，μg/L）之間也存在著對數(shù)相關關系：y=107.90ln（x）+219.11，r2=0.81，n=9，P＜0.05，如圖 3 所示，并且與對照組的相關方程相似y=103.18ln（x）+209.54，r2=0.73，n=15，P＜0.05。促黃體素可以刺激睪丸間質(zhì)細胞分泌睪酮，當血中睪酮達到一定濃度后便可作用于下丘腦和腺垂體抑制GnRH的分泌，進而對LH的分泌又存在著反饋調(diào)節(jié)作用［6］，反之，當血中睪酮濃度降低時，這種抑制作用解除，LH和睪酮的分泌增加，這樣血中睪酮水平得以維持動態(tài)平衡，因此將本試驗動物數(shù)據(jù)擬合成對數(shù)方程較為合理，并且此時的相關系數(shù)也是最高的。

圖3 精漿 T（y，ng/L）與精漿 LH（x，μg/L）的相關關系

3 結(jié)論

在本研究中，對于4歲左右的成年種公羊在較高采精強度下，按照15 g/d的劑量飼喂復方中草藥添加劑后，參試動物的精液數(shù)量和質(zhì)量均得到改善，主要表現(xiàn)為射精量增加、精子密度增加、頂體完整率增加、畸形率減少、美蘭褪色時間縮短，按照飼喂時間先后縱向比較又可以發(fā)現(xiàn)，隨著中草藥添加劑飼喂時間的延長，試驗組射精量呈增加趨勢，精子密度呈增加趨勢，美蘭褪色時間呈降低的趨勢。中草藥添加劑對血漿和精漿生殖激素影響較小，統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)試驗組各激素間的相關關系與對照組近似，即保持了絨山羊的生殖內(nèi)分泌平衡狀態(tài)。因此根據(jù)本研究結(jié)果初步認為，以淫羊藿、巴戟天和枸杞子為主的復方中草藥添加劑改善種公羊繁殖性能的效果顯著。

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