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        豬圓環(huán)病毒2型感染的診斷與防治

        2011-05-31 08:48:34楊冬玲
        獸醫(yī)導刊 2011年9期
        關鍵詞:豬群斷奶仔豬

        楊冬玲

        (青海省海晏縣金灘鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站,青海海晏812200)

        1911年,在加拿大北部地區(qū)的豬群中暴發(fā)了一種以斷乳仔豬呼吸急促或困難、腹瀉、貧血明顯的淋巴組織病變和進行性消瘦為主要特征的疾病,嚴重影響豬的生長發(fā)育,造成了巨大的經(jīng)濟損失。目前,本病已經(jīng)遍及世界各養(yǎng)豬國家,已成為養(yǎng)豬生產(chǎn)中突出的問題之一。近期研究表明,PCV2與豬皮炎與腎病綜合征(PMWS)、豬的流產(chǎn)和系列障礙、豬增生性壞死性肺炎(PNP)和豬先天性腦震顫(CT)等的發(fā)生密切相關。PCV2常與豬呼吸與繁殖綜合征病毒(PPRSV)或豬細小病毒(PPV)并發(fā)感染或繼發(fā)細菌感染,使患病豬病情加重,死亡率升高。

        一、病原

        豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)屬圓環(huán)病毒科(Circovirdae)圓環(huán)病毒屬(Circovirdae)。PCV2是一種小而無囊膜、二十面體、共價閉合、環(huán)狀的單股DNA病毒。病毒粒子直徑平均為17 nm,分子量為0.58×106Da。PCV2在氯化銫中浮密度為1.37 g/cm3,蔗糖梯度離心的沉降系數(shù)為52S,對PH3的酸性環(huán)境、氯仿作用或高溫環(huán)境(70℃)有較強的抵抗力。不凝集牛、羊、豬、雞等多種動物和人的紅細胞。

        PCV2完整的基因組大小多數(shù)為1768 bp,少數(shù)為1767 bp。各分離株之間核苷酸序列的同源性大于96%,而與PCV1分離株之間的核苷酸序列的同源性小于80%。PCV1和PCV2的ORF1的核苷酸和推導氯基酸序列的同源性分別為80%和86%,而ORF2的僅為67%和65%。PCV2可在PK15細胞上良好生長,但不產(chǎn)生細胞病變,也可在其他豬源細胞上生長,同樣不產(chǎn)生細胞病變。用300mM的D氨基葡萄糖處理接種PCV后的細胞培養(yǎng)物30 min,能夠促進病毒的增殖,病毒在原價胎豬腎細胞,恒河猴腎細胞、BHK-21細胞上不能生長。

        二、流行病學

        豬是PCV2的天然宿主,各種年齡、不同性別的豬都可感染,但并不能表現(xiàn)出臨診癥狀。病豬和帶毒豬是主要的傳染源。經(jīng)口腔和鼻內(nèi)實驗感染新生仔豬能復制出典型的PMWS,易感豬與發(fā)病豬病觸后引發(fā)PMWS,證實PCV2可在豬群中水平傳播,已有證據(jù)表明PCV2可通過胎盤垂直傳播。

        由PCV2感染所致的豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)主要發(fā)生在哺乳期和保育期的仔豬,尤其是5~12周齡的仔豬,一般于斷奶后2~3 d或1周開始發(fā)病,急性發(fā)病豬群中,病死率可達10%,在PMWS發(fā)病豬群,常常由于并發(fā)或繼發(fā)其他細菌(如副豬嗜血桿菌)或病毒感染而使死亡率大大增加,有時可高達50%以上,在疾病流行感染過的豬群中,發(fā)病率和死亡率都有所降低。

        豬皮炎與腎病綜合征(PDNS)主要發(fā)生于保育和生長育肥豬,一般呈散發(fā),死亡率低,由PCV2感染引起的繁殖障礙主要危害初產(chǎn)的后備母豬和新建的種豬群。

        三、發(fā)病機理

        PCV2感染的確切致病機理仍不清楚,這也是目前研究的熱點。越來越多的研究表明,PCV2感染可造成豬體的免疫功能抑制。PMWS自然病例的外周血白細胞亞群的研究發(fā)現(xiàn),發(fā)病豬血液中單核細胞和未成熟粒細胞增加,而CD4+T細胞和B細胞數(shù)量減少,急性PMWS發(fā)病豬的T細胞和B細胞的免疫功能受到影響,從而缺乏有效的免病應答?,F(xiàn)在有研究表明,一些病原體如豬細小病毒(PPV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬多殺性巴氏桿菌、豬肺炎支原體等在PCV2的致病作用中起著協(xié)同致病作用。免疫刺激(如佐劑和疫苗)、環(huán)境因素(如氨氣、內(nèi)毒素),以及其他應激因素(如運輸和豬的混群)也是促進PCV2感染發(fā)生PMWS的因素。

        PRRSV的存在可使單核/巨噬細胞活化,從而增強了PCV2的復制功能,佐劑或疫苗的刺激作用于豬的單核/巨噬細胞。對病毒的定量分析發(fā)現(xiàn),發(fā)病豬體內(nèi)病毒感染的細胞數(shù)量似乎總是高于帶毒豬相對細胞的感染數(shù)量,或許豬體內(nèi)的病毒含量達到一定數(shù)目后才表現(xiàn)出臨診癥狀。這些試驗結(jié)果表明,引發(fā)PMWS的直接原因雖然是PCV2,但疾病的發(fā)生還需要其他致病因子的協(xié)同作用,這可以很好地解釋為什么PCV3血清抗體檢測陽性的豬群不一定發(fā)生PMWS。

        免疫系統(tǒng)的刺激對激發(fā)PMWS是一個重要的因素,另一方面,嚴重感染的豬,淋巴組織病變?nèi)缌馨图毎比绾土馨图毎麃喨旱淖兓窃摬〉闹饕卣?,因此,認為PMWS感染豬不能產(chǎn)生對其他免疫原的有效免疫應答,這是此病的致病機理之一。

        PCV2感染引起的PDNS認為是由免疫反應介導的損害皮膚和腎肌的血管疾病。此外,一些病原體如多殺性巴氏桿菌和PRRSV的混合感染可以誘導PDNS。

        四、臨診癥狀

        (一)豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征 PMWS的臨診癥狀有6個方面的基本表現(xiàn),最常見的臨診癥狀是消瘦或生長遲緩,這也是診斷PMWS所必需的。此外,還可見呼吸困難,淋巴結(jié)腫大,腹瀉,貧血和黃疸。在一只豬可能見不到上述所有的基本臨診癥狀,但在發(fā)病豬群可以見到所有的癥狀。其他比較少見的臨診癥狀有咳嗽、發(fā)熱、胃潰瘍、中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙和突然死亡。一些臨診癥狀可能與繼發(fā)感染有關,或者完全是由繼發(fā)感染所引起的。PMWS急性發(fā)病豬群,病死率可達10%。但常常由于并發(fā)或繼發(fā)細菌或病毒感染而使死亡率大大增加。各種環(huán)境因素如擁擠、空氣污濁、各種年齡的豬混養(yǎng)及其他各種應激因素也可能加重病情。

        (二)豬皮炎與腎病綜合征 (PDNS)

        最常見的臨診癥狀是豬皮上形成圓形或形狀不規(guī)則、呈紅色到紫色的病變,腹部也可擴散至喉、體側(cè)或耳。感染輕的豬可自行康復,感染嚴重的豬可表現(xiàn)出跛行、發(fā)熱、厭食、體重下降。

        (三)繁殖障礙 PCV2感染母豬可出現(xiàn)繁殖障礙,臨診表現(xiàn)包括流產(chǎn),產(chǎn)死胎、木乃伊胎和產(chǎn)弱仔,仔豬斷奶前死亡率升高。

        (四)肺炎 已有一些研究和臨診資料表明,PCV2與豬呼吸道疾病綜合征(PRDC)有關,PCV2感染可以引起肺炎,并且PCV2在PRDC中起著十分重要的作用。

        (五)腸炎 已有越來越多的臨診觀察和診斷表明,PCV2感染可以引起肉芽腫性腸炎,豬只表現(xiàn)為腹瀉、消瘦。

        (六)先天性震顫 臨診上早已觀察到豬的先天性震顫,近年來證實先天性震顫的初生仔豬的大腦和脊髓中含有PCV2核酸和抗原。

        五、病理變化

        肉眼可見的病理損傷變化很大,常見的變化包括肺臟腫脹,間質(zhì)增寬,質(zhì)度堅硬或似橡皮,其上散在有大小不等的褐色病變區(qū),實變區(qū)可在肺臟的前下緣融合成片。全身淋巴結(jié),特別是腹溝、縱隔、肺臟和腸系膜淋巴結(jié)顯著腫大,切面為灰黃色,或有出血。腎臟灰白,皮質(zhì)部散在或彌漫性分布白色壞死灶,大小由正常到顯著擴大和腫脹。脾臟輕度腫脹。肝臟可能有中等程度的黃疸和/或肝萎縮伴有肝小葉融合。胃腸道有時呈現(xiàn)不同程度的損傷,骨的食管黏膜蒼白、水腫和非出血性潰瘍,腸道尤是回腸和結(jié)腸段腸壁變薄,腸管內(nèi)液體充盈。繼發(fā)細菌感染的病例可出現(xiàn)相應疾病的病理變化,如胸膜炎、心包炎、腹膜炎、關節(jié)炎等。

        PDNS病例在豬的后肢和會陰部,乃至全身出現(xiàn)明顯的壞死性皮炎;腎臟蒼白、極度腫脹,皮質(zhì)部有出血或淤血斑點。

        PMWS在疾病早期階段,組織病理學變化表觀為肺呈現(xiàn)局灶或彌散性間質(zhì)性肺炎,慢性感染豬出現(xiàn)肉芽腫性間質(zhì)肺炎灶,灶中可見許多巨細胞和多核合胞體細胞。淋巴細胞和組織細胞漫潤到所有肺小葉。淋巴結(jié)、脾臟和扁桃體可見B細胞濾泡消失,T細胞區(qū)域可被組織細胞和多核細胞所擴張;B細胞依賴區(qū)域單核細胞內(nèi)多見的嗜堿性細胞漿內(nèi)包涵體可見于疾病早期,淋巴結(jié)可出現(xiàn)多灶性凝固性壞死,壞死細胞內(nèi)出現(xiàn)嗜酸性核內(nèi)包涵體,腎臟、肝臟和胰腺出現(xiàn)不同程度的淋巴細胞浸潤、實質(zhì)細胞變性等。

        六、診斷

        由PCV2感染引起的斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征,依據(jù)流行特點和臨診癥狀、剖檢病變,可以作出初步診斷,確切診斷需依靠實驗室相關技術,而與PCV2感染有關的繁殖障礙、肺炎、腸炎等,僅靠臨診癥狀是沒有診斷價值的。

        (一)臨診診斷要點

        1.PMWS主要發(fā)生在5~12周齡的仔豬,仔豬斷奶前生長發(fā)育良好。

        2.在一定時期內(nèi),豬場中同窩或不同窩的斷奶仔豬既有呼吸道癥狀,又有腹瀉等表現(xiàn),抗生素治療無效或療效不佳,病程長的豬生長發(fā)育遲緩、體重下降,有時出現(xiàn)皮膚蒼白或黃疸。

        3.死亡豬只剖檢具有PMWS的病理變化,尤其是淋巴結(jié)腫脹,切面出血或呈灰黃色,脾臟輕度腫脹,肺臟腫脹,間質(zhì)增寬,表面散在有大小不等的褐色實變區(qū)。其他臟器也可能有不同程度的病變和損傷。

        (二)實驗室診斷

        1.病毒的分離與鑒定。無PCV污染的PK15細胞最常用于PCV2的分離,可取死亡豬的肺臟、淋巴結(jié)、腎臟、血清等作為病原的分離材料。由于PCV2在細胞培養(yǎng)中不產(chǎn)生細胞病變,因此,病料盲傳1~6.3代后應進行PCV2抗原或核酸的檢測加以鑒定。

        2.病毒的檢測??刹视肞CR、原位核酸雜交、間接免疫熒光試驗,間接免疫過氧化物酶試驗等直接檢測病料的PCV2核酸或抗原。

        3.抗體檢測。可采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、免疫熒光抗體技術、免疫過氧化物酶試驗等,檢測豬血清中的PCV2抗體,但由于PCV1和PCV2之間存在抗原交叉反應,因此已有的方法不能完全區(qū)分PCV1和PCV2感染。制備PCV2特異性的單克隆抗體,或者特異性的重組抗原能夠滿足建立特異性血清學方法的的需要。國內(nèi)已建立了利用基因工程表達的PCV2重組蛋白作為抗原的ELISA抗體檢測方法。需要注意的是目前在臨診上多種病原的合并感染十分普遍,因此在檢測PCV2的同時,應同時檢測其他病原體(如PRRSV、PRV、PPV、副豬嗜血桿菌等)。

        七、防制

        迄今為止還沒有控制和消滅PMWS及PCV2感染所致其他疾病的有效措施,也沒有切實有效的商品化疫苗和藥物用來防御PCV2感染,而且PCV2對常規(guī)消毒劑抵抗力很強,給豬場的凈化工作帶來了困難。目前,控制PMWS應采取綜合性的控制措施。

        1.改變和完善飼養(yǎng)方式,做到養(yǎng)豬生產(chǎn)各階段的全進全出,避免將不同日齡的豬混群飼養(yǎng),從而降低豬群之間PCV2的接觸感染機會。

        2.建立豬場完善的生物安全體系,將消毒衛(wèi)生工作貫穿于養(yǎng)豬生產(chǎn)的各個環(huán)節(jié),最大限度地降低豬場內(nèi)污染的病原微生物,減少或杜絕豬群繼發(fā)感染的幾率。由于PCV2對一般的消毒劑抵抗力強。因此,在消毒劑的選擇上應考慮使用廣譜的消毒藥。

        3.加強豬群的飼養(yǎng)管理,降低豬群的應激因素。很多應激因素都可誘發(fā)、促進PMWS的發(fā)生和加重發(fā)病豬群的病情,導致死亡率上升。因此,應盡可能地減少豬群的應激因素,避免飼喂發(fā)霉變質(zhì)或含有菌毒素的飼料,做好豬舍的通風換氣,改善豬舍的空氣質(zhì)量,降低氨氣濃度,保持豬舍干燥,降低豬群的飼養(yǎng)密度。

        4.提高豬群的營養(yǎng)水平,由于PCV2感染可以導致豬群的免疫功能下降,因此,營養(yǎng)是影響PMWS的一個重要因素。通過提高豬群的蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素和微量元素的飲水,可以在一定程度上降低PMWS的發(fā)生率和造成的損失。

        (1)仔豬用藥:哺乳仔豬在3、7、21日齡注射長效土霉素(200 mg/ml)每次0.5 ml,或者在1、7日齡和斷奶時各注射頭胞噻呋(500 mg/ml)0.2 ml,;斷奶前1周至斷奶后1個月,用泰妙菌素(50 g/t)+金霉素或土霉素或強力霉素(150 g/t)+阿莫西林(500 g)。拌料飼喂,或者添加2%氟苯尼考(1000~1500 g/t)+泰 妙 菌 素(200~ 250 g/t)。繼發(fā)感染嚴重的豬場,可在28、35、42日齡各注射頭胞噻呋(500 mg/ml)0.2 ml。

        (2)母豬用藥:母豬在產(chǎn)前1周和產(chǎn)后1周,飼料中添加支原凈(100 g/t)+金霉素或土霉素(300 g/t)。

        5.做好豬場豬瘟,偽狂犬病、豬細小病毒感染、氣喘病等疫苗的免疫接種,規(guī)?;i場應提倡使用豬氣喘病滅活疫苗免疫接種,有利于提高豬群呼吸道和肺臟的免疫力,可減少呼吸道病原體的繼發(fā)感染。

        略)

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