劉新宇， 劉春娜， 張曉妍， 楊 菁

（1.遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院，遼寧 錦州121001；2.遼寧醫(yī)學院藥理學教研室，遼寧錦州 121001）

參黃頸康片鎮(zhèn)痛抗炎作用及對炎癥因子影響研究

劉新宇1， 劉春娜2*， 張曉妍1， 楊 菁2

（1.遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院，遼寧 錦州121001；2.遼寧醫(yī)學院藥理學教研室，遼寧錦州 121001）

目的 該實驗通過觀察受試抗頸椎病藥物（參黃頸康片）對抗炎、消腫、鎮(zhèn)痛的藥效學作用，探討參黃頸康片的藥理作用及相關(guān)機制。方法 該實驗采用小鼠耳廓腫脹模型、大鼠肉芽腫模型、大鼠足跖腫脹動物模型，觀察給予不同劑量參黃頸康片（小鼠為600、1 200、2 400 mg/kg；大鼠為500、1 000、2 000 mg/kg）的抗炎、消腫的藥理作用，另外選擇物理及化學法，進一步研究參黃頸康片的鎮(zhèn)痛作用，同時應用大鼠肉芽腫模型，測定血清中白介素-6（IL-1β）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的水平。結(jié)果 參黃頸康片能明顯降低小鼠耳廓腫脹的腫脹率、大鼠肉芽腫的質(zhì)量、足跖腫脹程度，能提高小鼠痛閾值及降低其扭體反射，并能降低大鼠肉芽腫模型中炎癥介質(zhì)的表達。結(jié)論 參黃頸康片通過抑制炎癥介質(zhì)表達有較好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。

腫瘤壞死因子-α；白介素-1β；足跖腫脹；肉芽腫

頸椎病是中老年常見的多發(fā)病，該病有著椎間盤變性、髓核突出病變的個體，特別是髓核對機體組織的致炎反應現(xiàn)象。椎間盤周圍組織水腫，纖維蛋白沉積，大量的炎性細胞浸潤，單核細胞趨化蛋白、巨噬細胞炎性蛋白等化學激動因子存在過度表達現(xiàn)象，導致了在椎間盤局部形成了炎癥、增生及腫脹［1-3］。而頸椎病的治療目前沒有較好療效的藥物。參黃頸康片是由丹參、黃芪、白術(shù)、姜黃、當歸、煅牡蠣等中藥組成的復方制劑，擬用于治療頸椎病。為進一步闡明其療效，本實驗主要觀察給予不同劑量參黃頸康片對小鼠耳廓腫脹模型、大鼠肉芽腫模型、大鼠足跖腫脹動物模型的影響，觀察其抗炎、鎮(zhèn)痛的藥理作用，并對其機制進一步研究，為臨床治療頸椎病提供可靠的理論依據(jù)［4-5］。

1 材料

1.1 動物 取昆明種小白鼠160只，體質(zhì)量18～22 g。Sprague-Dawley大鼠120只，體質(zhì)量180～220 g。動物合格證號：SCXK（遼）2003-0007。

1.2 試驗藥品 參黃頸康片（遼寧醫(yī)學院新藥研究所自制，為棕黃色粉末，0.35 g/片，1 g 相當于應用生藥 1.429 g）；陽性對照藥品：阿司匹林（湖南新匯制藥有限公司提供）。

2 方法

2.1 實驗動物分組 實驗隨機分為6組，Ⅰ組為空白對照組；Ⅱ組為模型組；Ⅲ組至Ⅴ組分別為低、中、高劑量參黃頸康片組（小鼠為 600、1 200、2 400 mg/kg；大鼠為 500、1 000、2 000 mg/kg）；Ⅵ組為陽性藥物對照組，灌胃給予阿司匹林（100 mg/kg）。

2.2 測定項目

2.2.1 參黃頸康片對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響 取健康小鼠60只，每日灌胃給藥1次，灌胃體積為0.1 mL/10 g，連續(xù)給藥3 d，空白對照組灌胃等體積的生理鹽水。末次給藥后1.5 h將30 μL二甲苯涂于小鼠右耳廓前后兩面致炎（除空白對照組），左耳廓作為自身對照。致炎后30 min將各組試驗小鼠處死，用直徑9 mm打孔器在相同的部位取下左、右耳片，稱定質(zhì)量，計算左、右耳片質(zhì)量差為腫脹度或抑制率（%）。

2.2.2 參黃頸康片對大鼠足跖腫脹的影響 取健康雄性大鼠60只，按2.1項進行分組。每日灌胃給藥1次，體積0.5 mL，連續(xù)給藥3 d，空白對照組灌胃等體積的生理鹽水。末次給藥1 h后，各組試驗動物（除空白對照組）右踝關(guān)節(jié)皮下注射10%雞蛋清0.1 mL，致炎，分別用軟皮尺測量踝關(guān)節(jié)周長，以給藥前、致炎后1 h、2 h、3 h踝關(guān)節(jié)周長差值作為腫脹度。

2.2.3 參黃頸康片對大鼠棉球肉芽腫及炎癥介質(zhì)的影響取雄性大鼠60只，除空白對照組實驗動物外，其余50只大鼠用乙醚淺麻醉，無菌條件下，下腹正中切口，各鼠右側(cè)腹股溝皮下各置入一無菌棉球（30 mg）。術(shù)后隨機按2.1項進行分組。于手術(shù)當天開始灌胃，連續(xù)7 d，灌胃體積0.5 mL，肉芽腫模型組給等體積生理鹽水，第8天處死動物，解剖并剝離棉球，60℃烘烤12 h稱定質(zhì)量，計算肉芽質(zhì)量（肉芽質(zhì)量=帶肉芽組織的棉球質(zhì)量－棉球原始質(zhì)量）。實驗結(jié)束后，上述實驗動物，頸動脈取血2 mL，3 000 r/min，離心5 min，取上清，用ELISA法測定血清白介素-1（IL-1β）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）。

2.2.4 用熱板法觀察參黃頸康片的鎮(zhèn)痛作用 采用Woolf氏熱板法。于電熱恒溫水浴箱溫度保持在（55±0.5）℃的范圍。將篩選后的小白鼠50只稱定質(zhì)量，按2.1項分組，測每只小鼠的痛閾值一次，作為該鼠給藥前的痛閾值。各組試驗小鼠給藥前及給藥后30 min各測定小白鼠痛閾值一次。痛閾提高百分率=（用藥后痛閾值－用藥前痛閾值）/用藥前痛閾值%

2.2.5 用扭體法觀察抗頸椎病藥物參黃頸康片的鎮(zhèn)痛作用取50只小鼠稱定質(zhì)量后，按上述分組情況，灌胃給予不同受試藥物30 min后，腹腔注射0.6%的醋酸0.2 mL/只，記錄15 min內(nèi)各組“扭體”反應陽性的動物數(shù)，及15 min內(nèi)出現(xiàn)“扭體反應”的次數(shù)。

3 結(jié)果

3.1 參黃頸康片抗炎、消腫作用結(jié)果 實驗結(jié)果見表1，2。表明應用不同劑量參黃頸康片，能明顯降低小耳廓腫脹度、減輕大鼠足跖腫脹，降低大鼠棉球肉芽腫質(zhì)量，與模型組相比具有顯著性差異（P＜0.05），提示參黃頸康片有一定抗炎、消腫作用。

不同劑量參黃頸康片受試藥物組與空白對照組相比，試驗動物15 min內(nèi)出現(xiàn)扭體反射的次數(shù)明顯減小，具有顯著性差異（P＜0.05）。另外，參黃頸康片能明顯提高小鼠痛閾值，結(jié)果表明，參黃頸康片對化學法及物理法所致的疼痛有較明顯的鎮(zhèn)痛作用（見表1）。

表1 小鼠耳廓腫脹實驗結(jié)果（x ± s，n=10）

表2 大鼠足跖腫脹實驗結(jié)果（x ± s，n=10）

3.2 參黃頸康片對炎癥介質(zhì)影響實驗結(jié)果 見表3。大鼠肉芽腫模型組實驗動物血清中IL-1β及TNF-α明顯升高，而應用不同劑量參黃頸康片，上述實驗結(jié)果顯著下降，與模型組相比，具有顯著性差異（P＜0.05）。上述實驗結(jié)果提示，參黃頸康片能明顯降低血清中炎癥介質(zhì)IL-1β及TNF-α的水平。

表3 參黃頸康片對炎癥介質(zhì)影響實驗結(jié)果（x ± s，n=10）

與足跖腫脹模型組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

4 討論

頸椎病時，大量促進炎癥介質(zhì)釋放的細胞因子表達升高，保護性細胞因子表達降低，炎癥介質(zhì)大量釋放，凋亡相關(guān)蛋白表達異常，導致椎間盤不斷退變，進而導致頸椎病的病程發(fā)展［6］。本實驗受試藥品——參黃頸康片是中藥復方制劑，臨床擬用于治療頸椎病。其中，丹參、黃芪能有效地改善微循環(huán)，糾正椎基底動脈供血不足，抗脂質(zhì)氧化等作用；白術(shù)、姜黃具有抑菌、抗炎、鎮(zhèn)痛、抑制血小板聚集及血栓形成、改善血液流變學、增加腦血流量作用；牡蠣有增強免疫力等多種功效。這些藥物對于頸椎病的治療均有較好的療效［7-9］。

本實驗結(jié)果顯示，參黃頸康片對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹、大鼠足腫脹及大鼠棉球肉芽腫3種急、慢性試驗性炎癥均有非常顯著的抑制作用。另外，實驗結(jié)果也表明，參黃頸康片可顯著減少醋酸所致小鼠扭體次數(shù)、增高痛閾值，有非常顯著的抗炎、消腫、鎮(zhèn)痛作用?？墒诡i椎病人的疼痛癥狀緩解，從而使緊張或痙攣的肌肉松弛，以減輕肌肉對局部病灶處的牽拉，有利于局部損傷病灶的修復［10-12］。

另外，實驗中發(fā)現(xiàn)，應用不同劑量參黃頸康片能明顯降低炎癥介質(zhì)IL-1β及TNF-α。提示參黃頸康片可能通過減少炎癥介質(zhì)等產(chǎn)生，在頸椎病中發(fā)揮治療及保護作用。

綜上所述，參黃頸康片主要通過其抗炎、鎮(zhèn)痛、活血化瘀作用，來改善頸椎病人的多種癥狀，實驗結(jié)果與該藥消腫止痛、活血通絡的功能亦相吻合，為該藥在臨床上治療頸椎病癥提供了一定的理論依據(jù)。

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R285.5

B

1001-1528（2011）07-1223-03

2010-10-16

遼寧省教育廳創(chuàng)新團隊項目（LT2010065）；遼寧省自然科學基金項目（20102139）

劉新宇（1976—），男，主治醫(yī)師，碩士學位，研究方向：藥理學及新藥開發(fā)。Tel：（0416）4197208

*通信作者：劉春娜（1977—），女，副教授，博士學位，主要從事中藥藥理工作。E-mail：springnana@tom.com