龔夢鵑， 何 偉， 唐春萍， 楊超燕

（廣東藥學院，廣東 廣州， 510006）

桂枝解郁膠囊抗抑郁作用的藥理實驗研究

龔夢鵑， 何 偉， 唐春萍*， 楊超燕

（廣東藥學院，廣東 廣州， 510006）

目的 研究桂枝解郁膠囊（桂枝、巴戟天、甘草等）的抗抑郁作用。方法 將60只大鼠，隨機分為6組，每組10只，采用慢性不可預知溫和應激刺激6周建立抑郁大鼠模型。桂枝解郁膠囊高劑量組、桂枝解郁膠囊低劑量組（分別給予桂枝解郁膠囊6.4 g生藥/kg、1.6 g生藥/kg，每天1次，連續(xù)6周）、氟西汀組（20 mg/kg），空白對照組、模型組（分別給予等體積生理鹽水），除空白對照組不給予任何刺激并正常飼養(yǎng)外，其余各組均單籠飼養(yǎng)。以體質(zhì)量觀察、糖水消耗實驗、敞箱實驗以及強迫游泳試驗作為綜合指標，選取不同時間考察桂枝解郁膠囊對抑郁大鼠模型的影響。結(jié)果 實驗第六周，

桂枝解郁膠囊；抗抑郁；糖水消耗實驗；敞箱實驗；強迫游泳實驗；大鼠

抑郁癥是一種以情感病變?yōu)橹饕Y狀的精神性疾病，是以心境低落、思維遲鈍、語言行動減少為主要特征的綜合征，嚴重者伴有自殺傾向。目前，國內(nèi)外在抗抑郁藥物的研制與開發(fā)方面逐漸重視傳統(tǒng)藥物和天然藥物。桂枝解郁膠囊由桂枝、巴戟天、甘草等藥物組成，是應用多年的臨床經(jīng)驗方，用于中、輕度抑郁癥的治療和重度抑郁癥的輔助治療，療效確切。本實驗旨在通過復制慢性應激抑郁大鼠模型，探討桂枝解郁膠囊的抗抑郁樣作用。

1 材料與方法

1.1 藥品

桂枝解郁膠囊，由廣東藥學院藥物研究所提供，將桂枝、巴戟天、甘草等藥物用蒸餾水回流提取2次，每次1 h，第1次加入10倍量的蒸餾水，第2次加入8倍量的蒸餾水，合并濾液，過濾，濾液減壓濃縮，將浸膏真空干燥，粉碎，過篩，混勻，濕法制粒，低溫干燥，裝入膠囊，制成1 000粒。

陽性藥物鹽酸氟西?。ò賾n解）（禮來蘇州制藥有限公司生產(chǎn) ），批號A070884。

1.2 動物

SD成年健康大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量180～200 g，由廣東省實驗動物中心提供，合格證號：SCXK（粵）2003-0002。

1.3 主要儀器

游泳模型裝置：玻璃水缸高30 cm，直徑14 cm（水深20 cm，水溫25℃）；電子溫度計；計時器。

1.4 實驗方法

1.4.1 分組與給藥方法 選用SD成年健康大鼠，體質(zhì)量180～200 g，在正常飲食，自然光照，光暗周期為12 h，室溫（28±1）℃，安靜環(huán)境下飼養(yǎng)，使之適應環(huán)境3 d。在安靜房間內(nèi)進行敞箱試驗（open field test）進行行為學評分，從合格者（50＜水平運動得分＜220）中挑選得分水平接近的。隨機分為6組，每組10只，即空白對照組、模型組、桂枝解郁膠囊高劑量組、桂枝解郁膠囊低劑量組、氟西汀組。除空白對照組不給予任何刺激并正常飼養(yǎng)外，模型組、桂枝解郁膠囊高、低劑量組、氟西汀組動物均單籠飼養(yǎng)，每天分別灌胃給予生理鹽水、6.4 g 生藥/kg、1.6 g生藥/kg桂枝解郁膠囊、氟西汀20 mg/kg，同時給予刺激（刺激因素見1.4.2項）建立抑郁模型。在實驗前、實驗第2周、第4周、第6周進行體質(zhì)量、行為表現(xiàn)、糖水消耗測定，并在第6周進行強迫游泳實驗。

1.4.2 抑郁大鼠模型的建立 參照文獻［1-3］建立模型，并稍加改進。各組大鼠給予不可預見慢性應激性刺激，每天一種，刺激因素包括單籠飼養(yǎng)、禁食24 h、禁水（空瓶）24 h、2 h行為限制、濕籠、搖晃5 min（恒溫水浴床，轉(zhuǎn)速 160 r/min，5 min）、2 h明暗顛倒、持續(xù)燈亮24 h、4℃冰水中游泳5 min；空白對照組正常飲食，不給予任何刺激。

單籠飼養(yǎng)：每只SD大鼠用小鼠籠飼養(yǎng)，籠蓋加壓重物；禁食24 h：剝奪食物，只提供飲用水，計時24 h；禁水（空瓶）24 h：提供食物，水瓶不裝飲用水，以空水瓶放置，計時24 h；2 h行為限制：把大鼠放進大鼠注射籠中，計時2 h；濕籠：把大鼠的墊料用水弄濕透，以墊料剛好全濕但不致過多的水滲出為度；搖晃5 min：把大鼠連鼠籠固定在恒溫水浴床上（轉(zhuǎn)速160 r/min），連續(xù)搖晃5 min；2 h明暗顛倒：把大鼠連鼠籠放進密閉的柜子里，計時2 h；持續(xù)燈亮：在接近傍晚，但天仍光亮時，把大鼠放進獨立的房間里，把房間里的燈全都打開，亮度以接近白天的光亮度為宜，計時12 h；4℃冰水中游泳5 min：將大鼠放入玻璃水缸中，水溫4℃，計時5 min，出水時用干布擦干身體以免體溫過冷導致死亡；每天給予刺激一至兩種，平均每種刺激被采用5次，同種刺激因素不能連續(xù)進行，使動物不能預料刺激的發(fā)生［4］。

1.4.3 體質(zhì)量觀察 每日8∶00～12∶00進行灌胃，下午4∶00給等量食物，觀察體質(zhì)量變化。

1.4.4 糖水消耗實驗 試驗前，在隔噪音、安靜的房間內(nèi)，訓練動物適應含糖飲水，每籠同時放置2個水瓶，第1個24 h，兩瓶均裝有1%蔗糖水，隨后的24 h，一個瓶裝1%糖水，一個瓶裝純水。2 h的禁食禁水后進行動物的基礎糖水/純水消耗試驗，同時給予每只大鼠事先定量并稱量好的兩瓶水：一瓶1%糖水，一瓶純水。60 min后，取走兩瓶并稱定質(zhì)量。計算動物的糖水消耗%=糖水消耗/總液體消耗×100%［1］。

1.4.5 敞箱實驗 敞箱裝置由硬紙皮制成，底面為100 cm×100 cm的正方形，并用不脫色筆劃分為10×10個面積相等的方格，裝置高40 cm。在8∶00～18∶00之間的安靜房間內(nèi)進行此項試驗觀察。實驗時將大鼠置于中心方格內(nèi)，讓其適應環(huán)境2 min，然后累計大鼠在5 min內(nèi)穿越的格數(shù)（三爪以上進入方格內(nèi)方可記為1分）為水平運動得分（crossing）；直立次數(shù)（兩爪離開底面為標志，無論動物站立多長時間直至放下兩爪方可記為1分），為垂直運動得分（rearing）［5］。

1.4.6 強迫游泳實驗 實驗第6周，將大鼠放入高30 cm，直徑14 cm，水深20 cm的圓柱形玻璃標本缸中，水溫25℃。游泳時大鼠為克服不正常的感覺而在水中掙扎，但掙扎一定時間后，出現(xiàn)間斷性“不動”，表現(xiàn)為在水中停止掙扎、呈漂浮狀態(tài)，或僅有細小的肢體運動以保持頭部浮在水面，顯示失望狀態(tài)。實驗時，先讓大鼠在缸中游泳適應2 min，然后累計5 min內(nèi)大鼠的不動時間（motionless time，MT）［6］。

1.5 統(tǒng)計方法

2 結(jié)果

2.1 應激前動物的體質(zhì)量、行為表現(xiàn)及糖水消耗

各組動物在造模前各項指標測量相近，組間比較用統(tǒng)計學檢驗無顯著性差異。結(jié)果見表1。

表1 應激前動物的體質(zhì)量、行為表現(xiàn)及糖水消耗的比較（n=10，±s）Tab.1 Comparison of bodyweight，scores in open field test，sucrose consumption in rats before stress（n=10，±s）

表1 應激前動物的體質(zhì)量、行為表現(xiàn)及糖水消耗的比較（n=10，±s）Tab.1 Comparison of bodyweight，scores in open field test，sucrose consumption in rats before stress（n=10，±s）

組別 體質(zhì)量/g 水平運動得分 垂直運動得分 糖水消耗/%空白對照組 199.06 ±8.95 126.00 ±35.37 34.88 ±3.89 62.53 ±13.59模型組 198.94 ±8.40 121.63 ±30.46 34.00 ±6.23 57.96 ±23.18桂枝解郁膠囊高劑量組 197.90 ±9.71 118.90 ±31.67 34.00 ±9.07 61.32 ±18.19桂枝解郁膠囊低劑量組 198.45 ±9.62 125.50 ±42.90 34.50 ±11.25 60.46 ±16.70鹽酸氟西汀組 196.90 ±10.71 121.90 ±21.89 34.68 ±8.89 61.62±17.38

2.2 第2周桂枝解郁膠囊對體質(zhì)量、行為表現(xiàn)及糖水消耗的影響

如表2所示：第2周，與空白對照組比較，模型組的體質(zhì)量、水平和垂直運動得分均有顯著性下降，但糖水消耗%較2周前有所下降，還未出現(xiàn)顯著性差異，表明此時模型組大鼠對幸福事件的反應能力尚未消失。桂枝解郁膠囊高劑量組可改善模型組動物的體質(zhì)量，水平和垂直運動得分，但對糖水消耗無影響。

表2 第2周桂枝解郁膠囊對體質(zhì)量、行為表現(xiàn)及糖水消耗的影響（n=10，±s）Tab.2 Effect of Guizhi Jieyu Capsules on bodyweight，scores in open field test，sucrose consumption in rats in the 2nd week（n=10，±s）

表2 第2周桂枝解郁膠囊對體質(zhì)量、行為表現(xiàn)及糖水消耗的影響（n=10，±s）Tab.2 Effect of Guizhi Jieyu Capsules on bodyweight，scores in open field test，sucrose consumption in rats in the 2nd week（n=10，±s）

注：與模型組相比，＊＊＊P ＜0.001，＊＊P ＜0.01，*P ＜0.05。＊＊＊P ＜0.001，＊＊P ＜0.01，*P ＜0.05 vs model group.

組別 體質(zhì)量/g 水平運動得分 垂直運動得分 糖水消耗/%空白對照組 216.75±8.09＊＊＊ 129.75±27.57＊＊ 39.00±5.20＊＊＊62.29 ±11.54模型組 194.93 ±9.19 73.00 ±35.86 16.25 ±5.61 56.76 ±23.02桂枝解郁膠囊高劑量組 206.45±7.90＊＊ 119.60±24.38＊＊ 23.00±6.40* 60.28±14.62桂枝解郁膠囊低劑量組 196.25 ±8.49 77.00 ±54.47 17.20 ±7.57 58.76 ±16.85鹽酸氟西汀組 212.45±8.81＊＊ 120.60±34.21＊＊ 23.20±6.60*64.12 ±10.46

2.3 第4周桂枝解郁膠囊對體質(zhì)量、行為表現(xiàn)及糖水消耗的影響

給予刺激4周后，模型組大鼠的糖水消耗%在逐漸下降，但與空白組比較，仍未有顯著性差異，表明模型組大鼠還未出現(xiàn)快感消失。從體質(zhì)量觀察和水平運動得分值可看出，桂枝解郁膠囊高劑量組明顯高于模型組，但對糖水消耗無影響，見表3。

表3 第4周桂枝解郁膠囊對體質(zhì)量、行為表現(xiàn)及糖水消耗的影響（n=10，±s）Tab.3 Effect of Guizhi Jieyu Capsules on bodyweight，scores in open field test，sucrose consumption in rats in the 4th week（n=10，±s）

表3 第4周桂枝解郁膠囊對體質(zhì)量、行為表現(xiàn)及糖水消耗的影響（n=10，±s）Tab.3 Effect of Guizhi Jieyu Capsules on bodyweight，scores in open field test，sucrose consumption in rats in the 4th week（n=10，±s）

注：與模型組相比，＊＊＊P ＜0.001，＊＊P ＜0.01，*P ＜0.05。＊＊＊P ＜0.001，＊＊P ＜0.01，*P ＜0.05 vs model group.

組別 體質(zhì)量/g 水平運動得分 垂直運動得分 糖水消耗/%空白對照組 240.13±7.62＊＊＊ 127.63±30.04＊＊ 37.38±4.27＊＊＊61.61 ±10.54模型組 191.32 ±4.87 71.38 ±91.47 11.00 ±8.52 53.76 ±12.55桂枝解郁膠囊高劑量組 219.90±6.98＊＊＊ 134.30±29.39* 18.30±5.44* 59.93±14.08桂枝解郁膠囊低劑量組 199.45 ±3.65 69.10 ±53.50 9.50 ±8.83 57.58 ±13.39鹽酸氟西汀組 220.12 ±10.18＊＊＊ 122.21 ±23.41* 17.86 ±6.14*60.41 ±7.99

2.4 第6周桂枝解郁膠囊對體質(zhì)量、行為表現(xiàn)及糖水消耗的影響

給予刺激6周后，在體質(zhì)量觀察、行為學及糖水消耗實驗中，模型組與對照組比較均有顯著性差異，提示抑郁模型建立的成功。給藥組與模型組相比也有差異，桂枝解郁膠囊高、低劑量組均可明顯增加模型大鼠的體質(zhì)量，增加水平和垂直運動得分，提高糖水消耗，表明桂枝解郁膠囊有明顯的抗抑郁作用，結(jié)果見表4。

表4 第6周桂枝解郁膠囊對體質(zhì)量、行為表現(xiàn)及糖水消耗的影響（n=10，±s）Tab.4 Effect of Guizhi Jieyu Capsules on bodyweight，scores in open field test，sucrose consumption in rats in the 6th week（n=10，±s）

表4 第6周桂枝解郁膠囊對體質(zhì)量、行為表現(xiàn)及糖水消耗的影響（n=10，±s）Tab.4 Effect of Guizhi Jieyu Capsules on bodyweight，scores in open field test，sucrose consumption in rats in the 6th week（n=10，±s）

注：與模型組相比，＊＊＊P ＜0.001，*P ＜0.05。＊＊＊P ＜0.001，*P ＜0.05 vs model group.

組別 體質(zhì)量/g 水平運動得分 垂直運動得分 糖水消耗/%空白對照組 276.50±8.34＊＊＊ 129.25±34.39＊＊＊ 37.63±4.87＊＊＊ 63.13±11.03*模型組 181.19 ±2.37 13.63 ±23.04 3.00 ±2.96 50.22 ±17.30桂枝解郁膠囊高劑量組 235.59±8.54＊＊＊ 79.60±35.32＊＊＊ 14.50±5.00＊＊＊ 62.36±8.01*桂枝解郁膠囊低劑量組 191.20 ±5.50* 49.30 ±16.85* 7.80 ±6.35* 60.90 ±15.72*鹽酸氟西汀組 264.59±7.61＊＊＊ 82.31±23.54＊＊＊ 15.67±4.67＊＊＊ 65.78±9.91*

2.5 桂枝解郁膠囊對大鼠強迫游泳不動時間的影響

與空白組比較，模型組大鼠的不動時間明顯增加（P＜0.01）。與抑郁模型組對比，桂枝解郁膠囊高、低劑量組均能明顯縮短不動時間（P＜0.05），說明桂枝解郁膠囊有顯著的抗抑郁作用，結(jié)果見表5。

表5 桂枝解郁膠囊對大鼠強迫游泳不動時間的影響（n=10，±s）Tab.5 Effect of Guizhi Jieyu Capsules on motionless time in forced swimming test in rats（n=10，±s）

表5 桂枝解郁膠囊對大鼠強迫游泳不動時間的影響（n=10，±s）Tab.5 Effect of Guizhi Jieyu Capsules on motionless time in forced swimming test in rats（n=10，±s）

注：與模型組相比，＊＊P ＜0.01，*P ＜0.05。＊＊P ＜0.01，*P ＜0.05 vs model group.

組別 不動時間/s空白對照組 39.63 ±11.08＊＊模型組 64.50 ±15.51桂枝解郁膠囊高劑量組 42.10 ±20.38*桂枝解郁膠囊低劑量組 47.70 ±20.58*鹽酸氟西汀組 38.98 ±17.64＊＊

3 討論

目前認為慢性、長期的日常壓力是引發(fā)抑郁癥的主要原因。大量的研究證實，建立理想動物模型對探明抑郁癥病因、病理過程，以及研究有效治療藥物極為重要。本實驗在建立抑郁大鼠模型上綜合采用了慢性不可預知溫和應激刺激（chronic unpredictable mild stress，CUMS）：使動物長時間地接受溫和應激刺激，比較現(xiàn)實地模擬人們在日常生活中所遇到的“困難”［7］。在CUMS中，應激刺激的多變性和不可預測性是模型制造成功的關(guān)鍵。所以結(jié)合實驗室的條件，選用單籠飼養(yǎng)、禁食24 h、禁水（空瓶）24 h、2 h行為限制、濕籠、搖晃5 min（恒溫水浴床，轉(zhuǎn)速160 r/min，5 min）、2 h明暗顛倒、持續(xù)燈亮24 h、4℃冰水中游泳5 min共9種刺激因素。在經(jīng)過長期溫和應激刺激之后蔗糖水飲用量的減少反映了內(nèi)源性的中心癥狀——快感缺失（anhedonia）［8-9］。本實驗利用長期不可預見性的刺激，造成分養(yǎng)動物抑郁狀態(tài)，動物表現(xiàn)出來的抑郁狀態(tài)、興趣喪失、快感缺乏與抑郁癥臨床診斷中的精神運動改變興趣或快感的喪失有一定程度的相似性，提示本模型是較理想的抑郁癥動物模型［10］。本模型還模擬出了抑郁癥的癥狀表現(xiàn)，如運動能力，探索行為能力下降等。抑郁動物在行為上表現(xiàn)為在規(guī)定時間內(nèi)的水平運動和垂直運動次數(shù)均減少。水平運動減少反映了動物的活動度降低，垂直運動減少反映了動物對新鮮環(huán)境的好奇程度降低。桂枝解郁膠囊能增加CUMS大鼠的體質(zhì)量、水平和垂直運動得分，提高糖水消耗百分率，具有明顯的抗抑郁作用。

強迫游泳模型是一種較常用的抗抑郁劑篩選評價模型，大鼠被迫在一個局限的空間游泳，它們首先掙扎試圖逃跑，經(jīng)過努力后便處于一種不動狀態(tài)，這種不動狀態(tài)被認為是行為絕望（behavioral despair），是一種類似于抑郁癥的絕望狀態(tài)。玻璃缸內(nèi)的水深是影響大鼠強迫游泳的重要因素，水深標準是使大鼠后肢伸直剛好能觸到缸底但不足以支撐身體，針對大鼠的體質(zhì)量，本實驗選擇的水深為20 cm。在實驗過程中發(fā)現(xiàn)，模型組經(jīng)過短時間的掙扎后便浮于水面保持不動，給藥組試圖尋找出路，攀壁、上躍和潛入水底運動時間較長，這種差異是由于不同劑量的藥物不同程度地提高了動物的情緒，從而增強了動機行為，縮短了強迫游泳的不動時間。從實驗結(jié)果中可看出，與模型組比較，桂枝解郁膠囊可明顯縮短動物的不動時間，再次表明桂枝解郁膠囊有顯著的抗抑郁作用，為其進一步開發(fā)提供理論支持。

［1］許 晶，李曉秋.慢性應激抑郁模型的建立及評價［J］.中國行為醫(yī)學科學，2003，12（1）：14-16.

［2］金光亮，周東風，蘇 晶.電針對慢性應激抑郁模型大鼠腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響［J］.中華精神科雜志，1999，32（4）：220-222.

［3］Murua V S，Gomez R A，Andrea M E，et al.Shuttle-box deficits induced by chronic variable stress：reversal by imipramine administration［J］.Pharma Biochem Behav，1991，38（1）：125-130.

［4］王建醒，周 麗，徐華鋒，等.慢性應激大鼠抑郁模型的建立及其評價［J］.齊齊哈爾醫(yī)學院學報，2006，27（6）：644-646.

［5］王 哲，胡隨瑜，宋煒熙，等.白松片對慢性應激抑郁模型大鼠行為學及血CORT、ACTH的影響［J］.中國臨床心理學雜志，2004，12（2）：185-187.

［6］龔夢鵑，王立為，劉新民.大小鼠游泳實驗方法的研究概況［J］.中國比較醫(yī)學雜志，2005，15（5）：311-314.

［7］郭建友，李昌煜，葛衛(wèi)紅.抑郁癥動物模型［J］.中國臨床康復，2004，8（10）：1932-1933.

［8］鄭麗芳，明 亮.抑郁癥物模型的研究與應用［J］.安徽醫(yī)藥，2005，9（11）：801-803.

［9］李曉秋，許 晶.抑郁動物模型的研究進展［J］.中華精神科雜志，2002，35（3）：184-186.

［10］馬 行，庫寶善，姚海燕，等.對抑郁模型小鼠強迫游泳實驗方法的探討［J］.徐州醫(yī)學院學報，2005，25（3）：230-232.

Anti-depressant effect of Guizhi Jieyu Capsules

GONG Meng-juan， HE Wei， TANG Chun-ping， YANG Chao-yan
（Guangdong College of Pharmacy，Guangzhou 510006，China）

AIMTo evaluate the anti-depressant effect of Guizhi Jieyu Capsules（Ramulus Cinnamomi，Morindae Officinalis Radix，Glycyrrhizae Radix，et al）on rat model of chronic unpredictable mild stress.METHODS

Sixty rats were divided randomly into five groups：two treatment groups（giving Guizhi Jieyu Capsules for oral treatment for 6 weeks，6.4 g/kg and 1.6 g/kg once a day），F(xiàn)luoxetine group（giving Fluoxetine for oral treatment），model and control group.On the base of establishing depressed rat model，the weight of rats was recorded and the behavior of rats was observed with open field test，sucrose consumption test and forced swimming test.RESULTSThe rat model of depression was established successfully in the 6th week.In Guizhi Jieyu Capsules treated group，the weight increased from 181.19 g to 235.59 g，the horizontal scores of open field test was boosted from 13.63 to 79.60，the vertical scores from 3.00 to 14.50 and consumption of sugar water rose from 50.22%to 62.36%，they were significantly higher than those in the depression group.But the immobility time in forced swimming test was significantly lower than that in depression group from 64.50 s to 42.10 s.CONCLUSIONGuizhi Jieyu Capsules can prevent rat from the abnormal behavior of the depression.

Guizhi Jieyu Capsules；anti-depressant；sucrose consumption test；open field test；forced swimming test；rat

R285.5

A

1001-1528（2011）07-1121-05

2010-07-05

廣東省中醫(yī)藥管理局項目（2007153）

龔夢鵑（1983—），女，講師，碩士，研究方向：神經(jīng)藥理學。Tel：13527769816，E-mail：gongmengjuan@yahoo.com.cn

*通信作者：唐春萍（1966—），女，教授，研究方向：中藥復方藥效學評價。E-mail：tcp@163.com抑郁大鼠造模成功，且桂枝解郁膠囊可改善抑郁大鼠的體質(zhì)量（由181.19 g增加至235.59 g）、增加水平運動得分（由13.63分增加至79.60分）和垂直運動得分（由3.00分增加至14.50分），增加糖水消耗（由50.22%上升為62.36%）及縮短強迫游泳的不動時間（由64.50 s下降為42.10 s）。結(jié)論 桂枝解郁膠囊具有明顯的抗抑郁作用。