譚常青，周金彩，龍紅萍（1.廣東佛山市南海區(qū)桂城醫(yī)院，佛山市 5800；.湖南科技職業(yè)學(xué)院，長沙市 410004；.中南大學(xué)藥學(xué)院，長沙市 41001）

胺碘酮（Amiodaros）作為一種高效而安全的抗心律失常藥物已被越來越多地應(yīng)用于臨床[1～3]。為了克服目前劑型的缺陷和缺點[4～6]，更好地提高患者的依從性和減少藥物引起的不良反應(yīng)，筆者根據(jù)時辰藥理學(xué)的原理，研制了一種新的口服劑型——鹽酸胺碘酮包衣脈沖片。目前，胺碘酮制劑的含量測定方法主要有光譜分析、電化學(xué)分析和色譜分析等，鑒于高效液相色譜法具有的高分離效率、高靈敏度及良好的重現(xiàn)性等優(yōu)點，筆者在參考相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，嘗試采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法和外標(biāo)法測定鹽酸胺碘酮包衣脈沖片中鹽酸胺碘酮的含量[7，8]。結(jié)果表明，此方法簡便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型HPLC儀，包括低壓四元泵、自動進(jìn)樣器、柱溫箱、DAD檢測器、ChemStations色譜工作站（美國安捷倫科技有限公司）；UVProbe-2450紫外-可見分光光度儀（日本島津公司）；BP211D電子天平（0.00001 g，德國塞多利斯公司）。

鹽酸胺碘酮包衣脈沖片（實驗室自制，批號：20100416、20100418、20100420，規(guī)格：每片200 mg）；鹽酸胺碘酮對照品（上海九福藥業(yè)公司，批號：20080716，純度：99.9%）；乙腈為色譜純，水為純凈水并經(jīng)0.45 μm水系濾膜過濾，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：2%三乙胺（用磷酸調(diào)pH至4.8）-乙腈（40∶60）；檢測波長：240 nm；流速：1.0 mL·min－1；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：25 ℃。理論板數(shù)不小于8000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 稱取鹽酸胺碘酮對照品約25 mg，精密稱定，置于50 mL容量瓶中，加流動相適量（約20 mL），超聲溶解，放冷至室溫后，流動相稀釋至刻度線，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過，取濾液作為對照品貯備液（0.5 mg·mL－1）。精密量取對照品貯備液10.0 mL，置于50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得濃度為0.1 mg·mL－1的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取鹽酸胺碘酮包衣脈沖片20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于鹽酸胺碘酮5 mg），置于50 mL容量瓶中，加流動相適量（約20 mL），超聲溶解，放冷至室溫后，流動相稀釋至刻度線，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過，取濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 精密稱取約相當(dāng)于含主藥鹽酸胺碘酮5 mg的處方輔料量，置于50 mL容量瓶中，加流動相適量（約20 mL），超聲溶解，放冷至室溫后，流動相稀釋至刻度線，搖勻，用0.45 μm濾膜濾過，即得陰性對照溶液。

2.3 方法專屬性考察

分別精密吸取陰性對照溶液、對照品溶液及供試品溶液各20 μL，按“2.1”項下色譜條件測定。結(jié)果表明，輔料、鹽酸胺碘酮對照品及供試品色譜峰均很好分離，色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.陰性對照；B.對照品；C.供試品；1.鹽酸胺碘酮（tR＝25.061 min）Fig 1 HPLC chromatogramsA.negative control；B.reference substance；C.sample；1.amiodarone hydrocholride（tR＝25.061 min）

2.4 線性關(guān)系考察

精密量取對照品貯備液2.0、4.0、8.0、10.0、12.0、16.0、25.0 mL，置于50 mL容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得濃度為 40、60、80、100、120、160、200 μg·mL－1的系列標(biāo)準(zhǔn)濃度的溶液。分別精密吸取20 μL，注入HPLC儀，記錄色譜圖。以峰面積（A）對濃度（C，μg·mL－1）進(jìn)行線性回歸分析，得回歸方程A＝302.48C+20.742（r＝0.9999，n＝7）。結(jié)果表明，鹽酸胺碘酮檢測濃度在0.020～0.250 mg·mL－1范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗

分別精密吸取對照品溶液20 μL，注入HPLC儀，在同一天內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣6次，并連續(xù)測量3 d，按“2.1”項下色譜條件測定。結(jié)果，日內(nèi)RSD＝0.42%（n＝6），日間RSD＝0.58%（n＝3），表明本方法精密度較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

分別精密吸取供試品溶液20 μL，室溫下于0、2、4、8、12、24 h注入HPLC儀，按“2.1”項下色譜條件測定。結(jié)果，RSD＝0.21%（n＝6），表明供試品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗

取同一批樣品（批號：20100418），分別按“2.2.2”項下方法平行制備成3份供試品溶液。精密吸取供試品溶液20 μL，注入HPLC儀，按“2.1”項下色譜條件測定，并記錄峰面積，采用外標(biāo)法以峰面積計算鹽酸胺碘酮的含量。結(jié)果，RSD＝0.45%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗[7]

取已知含量的鹽酸胺碘酮包衣脈沖片20片（批號：20100416，含鹽酸胺碘酮為標(biāo)示量的99.32%），精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量粉末（約相當(dāng)于鹽酸胺碘酮5 mg），共9份，然后按照樣品中鹽酸胺碘酮量的80%、100%、120%分別精密加入“2.2.1”項下對照品貯備液（鹽酸胺碘酮的濃度為0.5 mg·mL－1）8.0、10.0、12.0 mL，按“2.2.2”項下供試品溶液的方法制備，再按“2.1”項下色譜條件測定含量，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery tests of amiodarone hydrocholride（n＝9）

2.9 樣品含量測定

分別取本品3批樣品適量（相當(dāng)于鹽酸胺碘酮5 mg），按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液各20 μL，注入HPLC儀，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（n＝3）Tab 2 Content determination of samples（n＝3）

3 討論

筆者研制的鹽酸碘胺酮包衣脈沖片是根據(jù)時辰藥理學(xué)的原理設(shè)計的新型控釋制劑。參照2010年版《中國藥典》（二部）[9]中鹽酸胺碘酮片含量測定項下HPLC法測定主藥含量，由于使用了氨水-甲醇-乙腈混合流動相，在所記錄的對照品色譜圖中導(dǎo)致溶劑峰多。而本試驗鹽酸胺碘酮包衣脈沖片中鹽酸胺碘酮的含量測定采用2%三乙胺-乙腈為流動相，組分簡單，基線平穩(wěn)，柱效高，峰形對稱性好。采用RP-HPLC法對鹽酸碘胺酮包衣脈沖片中鹽酸胺碘酮的含量進(jìn)行測定，結(jié)果3個不同批號的鹽酸碘胺酮包衣脈沖片中鹽酸胺碘酮的含量均符合規(guī)定。

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[2]卞海林，王育林，彭 偉，等.鹽酸胺碘酮治療慢性房顫的臨床研究[J].藥學(xué)與臨床研究，2009，17（4）：331.

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[4]Punnam，SR，Goyal SK，Kotaru VP，et al.Amiodarone-A’Broad Spectrum’Antiarrhythmic Drug[J].Cardiovascular&Haematological Disorders-Drug Targets，2010，10（1）：73.

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[8]胡晉紅，張立超，李 珍，等.鹽酸胺碘酮制劑質(zhì)量研究：市售片體外溶出度考查[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2000，21（2）：140.

[9]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：770-771.