熊聲賀 王琴琴 黃新城

（南昌大學(xué)第三附屬醫(yī)院 江西南昌330008）

高同型半胱氨酸（HCY）被認(rèn)為是心腦血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[1]，其實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和臨床應(yīng)用[2]日趨受到廣大專家學(xué)者的關(guān)注。經(jīng)典的HCY檢測(cè)方法為熒光偏振法，因該法需要專用的儀器設(shè)備，限制了該項(xiàng)目的臨床應(yīng)用范圍，近年來，隨著循環(huán)酶法同型半胱氨酸試劑研制成功，實(shí)現(xiàn)了HCY在生化分析儀上的快速、方便檢測(cè)。我們?cè)谝M(jìn)該檢測(cè)項(xiàng)目過程中，發(fā)現(xiàn)循環(huán)酶法同型半胱氨酸試劑對(duì)生化分析儀上部分檢測(cè)項(xiàng)目存在不同程度的干擾，為此我們就HCY試劑對(duì)常見生化項(xiàng)目的干擾效應(yīng)進(jìn)行了評(píng)估。現(xiàn)報(bào)告如下：

1 材料與方法

1.1 儀器 日立7600-010全自動(dòng)生化分析儀，儀器經(jīng)過廠商校驗(yàn)評(píng)估，樣本針攜帶污染率0.028%，小于0.5%；總攜帶污染率高→低為0.030%，低→高為-0.481%，小于2.0%；滿足儀器廠商技術(shù)要求。

1.2 試劑 本實(shí)驗(yàn)室常用項(xiàng)目試劑ALT、AST、TBIL 、DBIL、BUN、CREA、UA、HDL-C 均來源于上海紫興生物科技有限公司，其中ALT、AST、BUN均采用速率法檢測(cè)，TBIL、DBIL采用釩酸鹽氧化法檢測(cè)，CREA、UA采用酶顯色法檢測(cè)，HDL-C采用單克隆抗體抑制-膽固醇氧化酶（一步法）法檢測(cè)；TCHO、TG試劑來源于溫州維日康科技有限公司，均采用氧化酶法檢測(cè)；GSP試劑來源于浙江伊利康生物科技有限公司，采用NBT還原法檢測(cè)；HbA1c試劑來源于日本積水醫(yī)療株式會(huì)社；以上項(xiàng)目使用的校準(zhǔn)品分別來自瑞士羅氏公司及浙江伊利康、日本積水醫(yī)療等公司配套使用產(chǎn)品。同型半胱氨酸檢測(cè)試劑來源于臺(tái)灣臺(tái)塑生醫(yī)科技有限公司，批號(hào)：SP10C61，內(nèi)含配套校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。

1.3 方法

1.3.1 樣本及準(zhǔn)備 樣本選自本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)當(dāng)天分析檢測(cè)剩余血清樣本約100 mL，選用有適量膽紅素（即黃疸）的樣本，將選擇的血清樣本混合均勻，以3 000 rps速度離心，取上清液對(duì)半分為2份，密閉暫存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 樣本基礎(chǔ)數(shù)據(jù)檢測(cè) 取上述處理好的樣本1份分成20小份，在日立7600-010全自動(dòng)生化分析儀上檢測(cè)上述常用項(xiàng)目，檢測(cè)項(xiàng)目均經(jīng)過適當(dāng)?shù)男?zhǔn)并且質(zhì)量控制合格，按檢測(cè)項(xiàng)目的方式進(jìn)行，即所有樣本檢測(cè)完一個(gè)項(xiàng)目后，再用同一樣本檢測(cè)其他項(xiàng)目，目的為避免不同項(xiàng)目間引入的交叉污染。

1.3.3 干擾試驗(yàn) 從另1份血清樣本中取2份各5.0 mL，分別按0.5%的體積加入同型半胱氨酸試劑1（R1）和試劑 2（R2），然后再用剩余的基礎(chǔ)血清稀釋上述兩份樣本，使其加入物含量均分別為0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%，充分混勻后上機(jī)檢測(cè)上述常用項(xiàng)目，按基礎(chǔ)數(shù)據(jù)樣本檢測(cè)方式測(cè)定樣本，每樣本連續(xù)重復(fù)測(cè)定3次。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 上述所有樣本測(cè)試數(shù)據(jù)，采用SPSS10.0軟件統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

見表 1、表 2。

表1 基礎(chǔ)數(shù)據(jù)與干擾試驗(yàn)測(cè)試數(shù)據(jù)比較

表2 干擾物加入量與被干擾檢驗(yàn)項(xiàng)目結(jié)果偏倚的劑量效應(yīng)

3 討論

本實(shí)驗(yàn)研究干擾物加入量，按探針最大允許攜帶0.5%量進(jìn)行模擬，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析中扣除稀釋效應(yīng)，按照 CLSI EP7-A2 評(píng)價(jià)方案要求[3～4]，并力求避免試劑探針和攪拌棒的攜帶污染，采用了按項(xiàng)目連續(xù)重復(fù)檢測(cè)的方法。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：不同的測(cè)試項(xiàng)目受HCY試劑不同組分干擾效應(yīng)各不相同，造成的數(shù)據(jù)偏倚有正負(fù)之分，劑量效應(yīng)也有大小差別。同型半胱氨酸檢測(cè)試劑對(duì)常用5個(gè)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響，究其原因，與其試劑組方應(yīng)有很大關(guān)系，因其R1中含有較高濃度的還原劑、R2中含有高濃度的氧化劑，其對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)的內(nèi)源性污染造成部分敏感項(xiàng)目結(jié)果偏倚增大。據(jù)報(bào)道NADH氧化酶檢測(cè)體系對(duì)氧化劑敏感[5]，而UA、GSP檢測(cè)體系對(duì)還原劑敏感[6]。另R2中可能含較高濃度鎂鹽或影響鎂鹽檢測(cè)的成分。

生化分析系統(tǒng)中分析項(xiàng)目間的交叉污染問題，近年來受到較多學(xué)者關(guān)注[7～8]，而象我們研究的這種千分之幾的污染物，引起百分?jǐn)?shù)位檢測(cè)物含量變化，更應(yīng)仔細(xì)研究和探討。更有可能有部分生化分析系統(tǒng)攜帶污染率可能高達(dá)百分之十幾或幾十，其結(jié)果報(bào)告給臨床醫(yī)療可能帶來災(zāi)難性后果。生化分析系統(tǒng)中反應(yīng)性交叉污染的機(jī)制和效應(yīng)，是一個(gè)很深層次的系統(tǒng)問題，建議有研究條件的學(xué)者應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注。

[1]潘琦,郭立新.同型半胱氨酸及相關(guān)酶基因多態(tài)性與糖尿病大血管病變的研究進(jìn)展[J].實(shí)用心腦肺血管病雜志,2004,12(3):46-49

[2]肖飛,郭健.血液中同型半胱氨酸的檢測(cè)及意義[J].臨床檢驗(yàn)雜志,2000,18(1):59-60

[3]楊昌國(guó),許葉,張抗.線性評(píng)價(jià)和干擾試驗(yàn)中NCCLS評(píng)價(jià)方案的應(yīng)用[J].臨床檢驗(yàn)雜志,1999,17(3):55-57

[4]楊有業(yè),張秀明.臨床檢驗(yàn)方法學(xué)評(píng)價(jià)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2009.196-232

[5]李林波,羅宇,屈凌波,等.NADH氧化酶研究進(jìn)展[J].河南工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2010,31(4):84-92

[6]萬唐,熊聲賀.維生素C對(duì)某些生化檢測(cè)項(xiàng)目的干擾[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2001,11(3):309-310

[7]于雷.生化自動(dòng)分析儀項(xiàng)間的交叉污染及其避免方法[J].臨床檢驗(yàn)雜志,2003,21(3):168

[8]顧國(guó)寶,陳潔,李燕,等.全自動(dòng)生化儀使用中項(xiàng)目間交叉污染的探討[J].上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2002,17(3):47-48