唐懷民,黃根池

我國肺癌的發(fā)病率呈上升趨勢,現(xiàn)今每 4例惡性腫瘤死亡者中就有 1例是肺癌。早期診斷、及時治療可以提高肺癌患者的生存率。除影像學和病理學檢查外,現(xiàn)今已有多種腫瘤標志物用于肺癌檢測的研究,但因特異性和敏感性不高,目前尚無臨床應(yīng)用的可靠標志物。近年來的研究表明, “分子警察”p53的野生型可以抑制血管內(nèi)皮生長因子 (vascular endothelial growth factor,VEGF)的表達,并通過旁觀效應(yīng)抑制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移,而突變型 p53則可以上調(diào) VEGF的表達,促進血管生成并促進腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移[1-2]。本研究通過檢測非小細胞肺癌 (none small cell lung cancer,NSCLC)患者血清 VEGF和p53抗體的水平并與健康對照組進行比較,探討在肺癌生長及轉(zhuǎn)移中生長因子的調(diào)控作用及其對肺癌的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 對照組:健康志愿者 45例,其中男 25例,女 20例,年齡 24～74歲,平均 50.8歲。肺癌組:2004年 6月—2007年 3月在本院住院治療的初診為 NSCLC患者 69例,近期無急性感染病史,均經(jīng)肺活檢組織病理或細胞學檢查檢查確診;其中男 45例,女 24例,年齡 32～78歲,平均 55.3歲;腺癌 32例,鱗癌 28例,腺鱗癌 5例,肺泡細胞癌 4例;依據(jù) 1997年肺癌國際分期標準,Ⅲa期 13例,Ⅲb期 27例,Ⅳ期 29例;采血時已接受 1周期以上鉑類化療方案 25例,未行化療 44例。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 兩組均晨起采集外周靜脈血 2ml,1000轉(zhuǎn)離心 4min留取血清,-20℃保存待測。

1.2.2 實驗方法 血清 p53抗體和 VEGF檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA),按照試劑盒 (均來自北京鼎國生物技術(shù)公司,編號分別為 BMS256MST和 900-K10)說明書進行操作,使用 Bio-Rad公司 Powerwave酶標儀檢測。

1.3 統(tǒng)計學方法 應(yīng)用 SPSS 10.0軟件,計量資料以 (±s)表示,以 P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清 VEGF和 p53抗體檢測結(jié)果 肺癌患者血清血清 VEFG和 p53抗體明顯高于對照組健康人群,差異有統(tǒng)計學意義 (P＜0.001,見表1)。

2.2 血清 VEGF和 p53抗體在病理分型間的比較 結(jié)果表明,腺癌患者血清 VEGF和 p53抗體濃度明顯高于其他病理分型(P＜0.001),其他依次是鱗癌、腺鱗癌和肺泡細胞癌,但后 3者在統(tǒng)計學上無明顯差別 (兩兩比較,P值分別為 0.685,0.086和 0.234,見表2)。

2.3 血清 VEGF和 p53抗體在臨床分期間的比較 血清VEFG和 p53抗體濃度在 3個臨床分期之間均有明顯差別 (P＜0.001),以Ⅳ期最高,其次是Ⅲb期和Ⅲa期 (見表3)。

2.4 肺癌患者血清 VEGF與 p53抗體的相關(guān)性 VEGF與 p53抗體濃度值呈正相關(guān) (r=0.762,P＜0.001),總體相關(guān)系數(shù)可信區(qū)間為 (0.508,0.987)。血清 VEGF和 p53抗體濃度的95%醫(yī)學參考值范圍分別為 ＜78.7pg/ml和 ＜0.47U/ml。兩項聯(lián)合檢測的敏感性明顯高于單項檢測。

表1 健康人群與肺癌患者血清 VEGF和p53抗體濃度比較 (±s)Table1 Comparison of VEGF,p53 between two groups

表1 健康人群與肺癌患者血清 VEGF和p53抗體濃度比較 (±s)Table1 Comparison of VEGF,p53 between two groups

組別 例數(shù) VEGF(pg/m l)測定值 波動區(qū)間p53抗體 (U/ml)測定值 波動區(qū)間對照組 45 45.2±17.1 29.4～145.6 0.22±0.13 0.01～0.45肺癌組 69 121.7±43.2 45.6～704.3 5.74±3.22 0.38～18.39

表2 血清VEGF和p53抗體濃度在不同病理分型之間的比較 (±s)Tab le 2 Comparison of VEGF,p53 in different types of lung cancer

表2 血清VEGF和p53抗體濃度在不同病理分型之間的比較 (±s)Tab le 2 Comparison of VEGF,p53 in different types of lung cancer

組別 例數(shù) VEGF(pg/ml)測定值 波動區(qū)間p53抗體 (U/ml)測定值 波動區(qū)間腺癌 32 185.9±53.6 105.0～704.3 9.74±4.02 3.68～18.39鱗癌 28 102.5±34.2 65.6～335.6 3.82±2.07 1.67～10.30腺鱗癌 5 138.5±43.7 82.6～405.1 5.94±3.48 2.38～12.39肺泡細胞癌 4 91.7±33.2 45.6～303.3 2.74±1.22 0.38～4.50

表3 血清 VEGF和 p53抗體濃度在不同臨床分期之間的比較 (±s)Table3 Comparison of VEGF,p53 in in different types of clinicalstage

表3 血清 VEGF和 p53抗體濃度在不同臨床分期之間的比較 (±s)Table3 Comparison of VEGF,p53 in in different types of clinicalstage

組別 VEGF(pg/m l)測定值 波動區(qū)間p53抗體(U/ml)測定值 波動區(qū)間Ⅲa期(13例) 92.5±30.4 45.6～332.4 2.44±1.13 0.38～5.52Ⅲb期(27例) 134.5±45.8 79.5～423.1 5.54±3.15 6.39～11.55Ⅳ期(29例) 195.9±63.5 135.0～704.3 10.07±4.65 4.88～18.39

表4 血清 VEGF和 p53檢測肺癌的臨床診斷價值分析Table4 The relationshipg between VEGF and p53

3 討論

p53基因是最重要的抗癌基因,在多種人類惡性腫瘤中p53基因突變是最常發(fā)生的基因改變。其編碼產(chǎn)物 p53蛋白分野生型和突變型兩種。野生型 p53可調(diào)節(jié)細胞周期,使 DNA損傷的細胞停滯在 G1期,以利于 DNA修復,若修復失敗則誘發(fā)細胞凋亡。p53基因突變后可表達過量的突變型 p53蛋白,刺激機體發(fā)生免疫應(yīng)答反應(yīng),產(chǎn)生抗突變型 p53蛋白的自身抗體,因此檢測血清突變型 p53抗體可間接反映 p53基因突變,對肺癌的輔助診斷有很大意義。VEGF被認為是作用最強,特異性最高的血管生成調(diào)控因子,在 NSCLC中異常表達顯著高于良性和正常肺組織[3]。本研究發(fā)現(xiàn) NSCLC患者血清 VEGF和 p53抗體濃度明顯增高,其中腺癌患者最高,鱗癌、腺鱗癌和肺泡細胞癌等病理類型次之,兩者均隨臨床分期的上升明顯升高,說明 NSCLC的發(fā)生和發(fā)展與 VEGF和 p53基因的表達呈正相關(guān)。

有研究報道 p53基因?qū)?VEGF的表達有調(diào)控作用[4]。Bouvet等[5]在對轉(zhuǎn)染細胞模型進行 VEGF誘導血管形成研究時,發(fā)現(xiàn)突變型 p53可上調(diào) VEGF的表達,從而促進腫瘤新生血管的形成。本研究也證明了 VEGF與 p53抗體濃度值呈正相關(guān),提示 p53與 VEGF的表達有內(nèi)在聯(lián)系。另有研究表明突變型p53蛋白是通過減少凝血栓蛋白 21(thrombospontin,TSP21)或增強蛋白激酶 C的活性使 VEGF的表達量增加[6]。

國外有報道 p53抗體在肺癌患者中陽性率為 46.1%,其中肺腺癌 28.0%,肺鱗癌 55.6%,大細胞肺癌 100%[7]。另有研究顯示 NSCLC患者血清 VEGF水平顯著高于良性疾病及健康人,以 450ng/L為限,VEGF診斷的敏感性為62%,特異性為 95%[8]。本研究確定的 NSCLC患者血清 VEGF和 p53抗體濃度的陽性界限分別為 78.7pg/ml和 0.47U/m l,以此為限,兩者單獨檢測的敏感性分別為 66.7%和 60.9%,而聯(lián)合檢測敏感性提高到 86.9%,與常見的腫瘤標志物 CEA相比能明顯提高肺癌的檢出率 (據(jù)報道晚期肺癌 CEA單獨檢測陽性率約20%)。另外本研究還觀察了24例實施肺癌根治術(shù)的患者,術(shù)后 79.2%(19例)患者血清 VEGF和 p53抗體聯(lián)合檢測結(jié)果轉(zhuǎn)為陰性。但由于觀察時間短,未能對患者的生存率做追蹤觀察。

上述各項研究表明,突變型 p53調(diào)控 VEGF的表達,在NSCLC的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。p53抗體可以作為臨床上敏感性和特異性均較高的腫瘤血清學指標,與 VEGF聯(lián)合檢測能明顯提高 NSCLC的檢出率。而且,血清樣本的 ELISA定量檢測簡單方便,穩(wěn)定性好,費用低廉,并且無需取組織標本,有能廣泛應(yīng)用于臨床的價值。

1 Fujiwara T,Nishizaki M,Tanaka N,et al.Recombinant adenovirus expressing wild-type p53 is antiangiogenic-implication for lung cancergene therapy[J].Gan To Kagaku Ryoho,2000,27(8):1217-1224.

2 Koukourakis MI,Giatromanolaki A,O′Byrne KJ,et al.Bcl22 and cerbB22 proteinsare involved in the regulation of VEGF and of thymidine phosphorylase angiogenic activity in none small cell lung cancer[J].Clin Exp Metastas,1999,17(7):545-554.

3 Fontaning G,Vignati S,Bigini D,et al.Epidermal growth factor receptor expression in non-small cell lung carcinomas correlateswithmetastatic involvement of hilarand mediastinal lymph nodes in the squamous subtype[J].Int JCancer,1996,67:615-617.

4 Linderholm BK,Lindahl T,Holmberg L,et al.Theexpression of vascular endothelial growth factorcor relates withmutant p53 and poor prognosis in human breast cancer[J].Cancer Res,2001,61(5):2256-2260.

5 Bouvet M,Ellis LM,Nishizaki M,et al.Adenovirus-mediated wild-type p53 gene t ra nsf er down-regulates vascular endothelial growth factor expression and inhibits angiogenesis in human colon cancer[J].Cancer Res,1998,58(6):2288-2292.

6 Gautam A,Densmore CL,Melton S,et al.Aerosol delivery of PEI-p53 complexes inhibits B16-F10 lungmetastases through regulation of angiogenesis[J].Cancer Gene Ther,2002,9(1):28-32.

7 Segawa Y,Kageyama M,Suzuki S,et al.Measurement and evaluation of serum anti-p53antibody levels in patients with lung cancer at its initial presentation:a prospective study[J].Br JCancer,1998,78(5):667-672.

8 Trape J,Buxo J,De Olaguer JP.Serum concentrations of vascular endothelial growth factor in advanced non-small cell lung cancer[J].Clin Chem,2003,49(3):523-524.