余文杰

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嗜水氣單胞菌AH1的生物學(xué)特性研究

余文杰

（漳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院 食品與生物工程系，福建 漳州 363000）

測(cè)定了嗜水氣單胞菌AH1在TSB培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)曲線進(jìn)行研究，結(jié)果表明，0-4h屬于延滯期，18h時(shí)活菌落總數(shù)達(dá)到最高峰至7.3，28h后細(xì)菌后進(jìn)入衰亡期；并且此過程中活菌數(shù)的對(duì)數(shù)值與OD600呈線性關(guān)系y = 17.081x - 0.226。嗜水氣單胞菌AH1在生理鹽水、PBS和TSB液體中4℃保存的存活狀況曲線表明：該菌屬于一種生存能力較強(qiáng)的細(xì)菌，前期不易死亡，后期死亡較快。

嗜水氣單胞菌AH1；生物學(xué)特性

嗜水氣單胞菌是革蘭氏陰性短桿菌，屬于一種廣泛分布于自然界之中的細(xì)菌種類，其致病范圍十分廣泛，可引起香魚急性敗血癥和紅口病、黃鱔出血性敗血癥、鰻鱺的赤鰭病、鯉魚和金魚的豎鱗病等運(yùn)動(dòng)性氣單胞菌敗血病，患病后具有較高的死亡率。感染該菌的魚類，會(huì)出現(xiàn)皮膚潰瘍，鰓和內(nèi)臟器官出血，腹部腫脹，眼球突出，肛門紅腫突出。此外該菌還會(huì)對(duì)家畜和人產(chǎn)生致病作用，引起食物中毒，使之產(chǎn)生急性胃腸炎癥狀、霍亂樣腹瀉、敗血癥和蜂窩組織炎等。目前由嗜水氣單胞菌引起的腹瀉屢見報(bào)到,已被證實(shí)為腹瀉病原菌。因此，對(duì)于嗜水氣單胞菌，尤其是其致病性菌株的研究現(xiàn)在已成為一個(gè)國內(nèi)外水產(chǎn)界、獸醫(yī)學(xué)界和醫(yī)學(xué)界的熱門話題。本文運(yùn)用微生物生長(zhǎng)測(cè)定方法對(duì)嗜水氣單胞菌AH1的生物學(xué)特性進(jìn)行了研究，為該菌相關(guān)疾病的防治和相應(yīng)疫苗的設(shè)計(jì)奠定基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要原料和試劑

嗜水氣單胞菌AH1菌株由漳州師范學(xué)院生物系提供，LB營養(yǎng)瓊脂、TSB液體培養(yǎng)基、NaOH、鹽酸和無水乙醇等一般性分析純?cè)匣蛟噭?/p>

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 嗜水氣單胞菌AH1的生長(zhǎng)培養(yǎng)

將菌種從超低溫冰箱中取出，接種在LB瓊脂上；挑取單菌落接種于TSB液體培養(yǎng)基，在28℃下培養(yǎng)18h作為種子液，同時(shí)將平板放在4℃條件下保存?zhèn)溆茫话凑?：1000的量將菌液接種于200mL的TSB液體培養(yǎng)基中于28℃搖床振蕩培養(yǎng)，每隔2h取1mL菌液進(jìn)行菌落總數(shù)的測(cè)定，并用分光光度計(jì)測(cè)定菌液的OD600值。

1.2.2 嗜水氣單胞菌AH1在不同溶液中生存時(shí)間的測(cè)定

按1：10將菌液分別保存于生理鹽水、PBS和TSB中，置于4℃條件下保存，采用涂布平板法每隔24h測(cè)定不同溶液中細(xì)菌的活菌數(shù)，觀察嗜水氣單胞菌在不同溶液中的存活時(shí)間。

2 結(jié)果與討論

2.1 嗜水氣單胞菌AH1的生長(zhǎng)曲線

嗜水氣單胞菌AH1在TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，該菌落總數(shù)及0D600值隨時(shí)間變化曲線如圖1所示。從圖中可以看出，種子液接種后前4h嗜水氣單胞菌的菌落總數(shù)對(duì)數(shù)值相對(duì)較低，處于延滯期；4h之后菌落總數(shù)開始迅速上升，進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，培養(yǎng)18h左右，培養(yǎng)基中的活菌落總數(shù)的對(duì)數(shù)值上升至最高峰達(dá)到7.3；19h至28h，嗜水氣單胞菌的菌落總數(shù)開始逐漸穩(wěn)定，為穩(wěn)定期；28h開始嗜水氣單胞菌AH1菌落總數(shù)對(duì)數(shù)值略為下降，進(jìn)入衰亡期。該菌的OD600值在4h之后開始顯著地上升，這個(gè)上升期一直持續(xù)到19-20h，并在20h附近OD600達(dá)到最高峰1.8，而在30h后OD值又開始小幅下降。以上分析可得：嗜水氣單胞菌AH1在TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，0-4h屬于延滯期，期間細(xì)胞數(shù)目沒有顯著的增加，OD600的數(shù)值也幾乎為零；從4h起至18h，細(xì)菌處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，菌體以幾何數(shù)增加，增長(zhǎng)速度快，期間OD600迅速上升；19-28h是穩(wěn)定期；第28h后進(jìn)入衰亡期，此時(shí)OD600略有下降。

圖1 菌落總數(shù)及吸光值（OD600）與時(shí)間的關(guān)系圖

2.2 嗜水氣單胞菌AH1生長(zhǎng)過程中OD600與活菌數(shù)的關(guān)系

挑取單菌落接種于28℃的固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，一定時(shí)間后用TSB洗下菌苔，稀釋成不同的OD值，測(cè)其活菌數(shù)；如圖2所示為嗜水氣單胞菌在TSB中的活菌數(shù)與OD值的關(guān)系，從圖中可以看出，當(dāng)OD600值小于1時(shí)，OD600值與其活菌數(shù)呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系（y=17.081x-0.226）,因此當(dāng)OD600值小于1時(shí)，可以準(zhǔn)確地從表中讀出相對(duì)應(yīng)的活菌數(shù)。

2.3 嗜水氣單胞菌AH1生長(zhǎng)過程中pH值的變化

嗜水氣單胞菌AH1在TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基的pH值隨培養(yǎng)時(shí)間的變化規(guī)律如圖3所示，由圖3的曲線可以看出，該菌在培養(yǎng)過程中產(chǎn)酸能力較強(qiáng)，在培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基的pH值下降得非常快，培養(yǎng)時(shí)間為18h左右時(shí)，培養(yǎng)基的pH值降至最低，此時(shí)pH僅為6.3左右；培養(yǎng)時(shí)間在18-30h之間，培養(yǎng)基的pH趨于穩(wěn)定；30h后，培養(yǎng)液的pH值略微上升并穩(wěn)定在6.6。

2.4 嗜水氣單胞菌AH1在不同溶液中的生存時(shí)間的測(cè)定

嗜水氣單胞菌AH1分別保存于生理鹽水、PBS和TSB培養(yǎng)基中，置4℃條件下，間隔24h測(cè)定不同溶液中的細(xì)菌的活菌數(shù)，其結(jié)果如圖4所示。由圖4可看出，嗜水氣單胞菌AH1是一種生存能力較強(qiáng)的細(xì)菌，不管是在生理鹽水、PBS溶液還是TSB培養(yǎng)基中，前期都不容易死亡，后期則死亡較快。表明該菌抗逆性較強(qiáng)，給致病性的嗜水氣單胞菌的殺滅帶來了一定的難度。

圖2 嗜水氣單胞菌AH1在生長(zhǎng)過程中OD600值與活菌數(shù)的關(guān)系

圖3 pH值隨時(shí)間變化

圖4 嗜水氣單胞菌AH1在不同溶液中的生存時(shí)間

3 結(jié)論

（1）嗜水氣單胞菌AH1在TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，0-4h屬于延滯期，期間細(xì)胞數(shù)目沒有顯著的增加，OD600的數(shù)值也幾乎為零；從4h起至18h，細(xì)菌處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，菌體以幾何數(shù)增加，增長(zhǎng)速度快，期間OD600迅速上升；19-28h是穩(wěn)定期；第28h后進(jìn)入衰亡期，此時(shí)OD600略有下降。

（2）在OD600值小于1.0的情況下，嗜水氣單胞菌AH1的OD600值與活菌數(shù)之間滿足線性關(guān)系y = 17.081x -0.226，當(dāng)OD600值小于1時(shí)，可以準(zhǔn)確地從圖中讀出相對(duì)應(yīng)的活菌數(shù)。

（3）嗜水氣單胞菌AH1的產(chǎn)酸能力較強(qiáng)，當(dāng)培養(yǎng)進(jìn)行了18h后培養(yǎng)基的pH值便會(huì)降至最低點(diǎn)6.3，當(dāng)培養(yǎng)進(jìn)行了30h之后，培養(yǎng)基的pH值會(huì)逐漸上升并穩(wěn)定在6.6。嗜水氣單胞菌AH1的這一特點(diǎn)，可以為今后該病原菌的生理鑒定提供一定的參考與借鑒。

（4）嗜水氣單胞菌AH1是一種抗逆性比較強(qiáng)的細(xì)菌，若用生理鹽水、PBS或者TSB培養(yǎng)基培養(yǎng)該菌，其前期活菌數(shù)均不會(huì)發(fā)生明顯變化，后期則死亡較快。這表明該菌屬于一種生存能力較強(qiáng)的細(xì)菌，這給致病性的嗜水氣單胞菌的殺滅帶來了一定的難度。

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Studies of Aeromonas hydrophila AH1Biological Characteristics

YU Wen-jie

(Zhangzhou institute of technology, Department of Food and Biology Engineering，F(xiàn)ujian Zhangzhou 363000，china）

The growth curve of Aeromonas Hydrophila AH1was studied cultured in TSB medium. The first four hours was its lag phase, , this bacteria entered logarithmic phase in 18th hour, in which the logarithm of the bacteria number reached 7.3. it came to the decline phase after the twenty-eighth hours. In addition, the logarithm of the bacteria number and the OD600had linear relationship of y=17.081x-0.226. Aeromonas Hydrophila AH1was stored in physiological saline, PBS and TSB in 4℃ to determine its ability of survivability, which suggested Aeromonas Hydrophila AH1could survive stress environment well. Most of bacteria could survive in the first time，but the ratio of death increased in the following days.

Aeromonas Hydrophila AH1; Biological characteristics

2011－07－15

余文杰（1977－），男，福建漳州人，助教，碩士，從事生物科學(xué)的教學(xué)及科研工作。

Q939.96

A

1673-1417（2011）03-0034-04

（責(zé)任編輯：季平）