劉佳，夏大勝

（天津醫(yī)科大學(xué)一中心臨床學(xué)院心內(nèi)科，天津300192）

高血壓是目前威脅人類健康的最重要疾病之一，愈來愈受到人類的重視，針對(duì)高血壓的基礎(chǔ)與臨床研究也多種多樣，其中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物高血壓造模是施行研究的基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)旨在針對(duì)神經(jīng)源性高血壓造模，檢測經(jīng)頸動(dòng)脈制作神經(jīng)源性高血壓的效果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 有創(chuàng)血壓監(jiān)測儀（Philips公司生產(chǎn)），YH24型生理壓力傳感器（北京航天生物醫(yī)學(xué)工程研究所出品）。3%戊巴比妥鈉（Sigma公司生產(chǎn)），速眠新（長春軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院），外科手術(shù)基本器械（直剪、彎剪、眼科剪、止血鉗、皮鑷等）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取24只雜種犬，雌雄不限，體重15～20kg，隨機(jī)分為經(jīng)顱造模組與經(jīng)頸動(dòng)脈造模組，每組各12只。

1.3 方法

1.3.1 高血壓模型制作

1.3.1.1 經(jīng)顱高血壓造模過程：采用3%戊巴比妥鈉和速眠新聯(lián)合肌肉麻醉；氣管插管后行右側(cè)股動(dòng)脈穿刺，進(jìn)行動(dòng)脈血壓監(jiān)測；手術(shù)開始后每間隔30～ 60min靜脈內(nèi)推注芬太尼0.5～1.0mL。將實(shí)驗(yàn)犬側(cè)臥，向非手術(shù)側(cè)旋30°～45°，沿犬后正中旁開1cm作直切口長約5cm，上達(dá)枕肌中央，下至C2水平，暴露枕骨嵴，用磨鉆磨除部分乳突和枕骨，形成直徑l cm的骨窗；顯微鏡下暴露后組顱神經(jīng)，小心辨認(rèn)迷走神經(jīng)、舌咽神經(jīng)及副神經(jīng)，將臨近的小腦前下動(dòng)脈或小腦后下動(dòng)脈髓外側(cè)至小腦背外側(cè)段小心分離，游離近段約l～1.5cm后將其貼附在延髓左側(cè)舌咽、迷走神經(jīng)出腦干段，對(duì)其形成直接壓迫；為防止血管移位，將硅膠或乳膠球囊置于血管的外側(cè)支撐血管，使血管壓向迷走、舌咽神經(jīng)。

1.3.1.2 經(jīng)頸動(dòng)脈高血壓造模過程：采用3%戊巴比妥鈉和速眠新聯(lián)合肌肉麻醉，手術(shù)組取頸部豎直切口，逐層分離皮膚、肌肉、結(jié)締組織等，暴露頸部左側(cè)頸總動(dòng)脈及迷走神經(jīng)主干，分離迷走神經(jīng)主干，先將1～2mm長的5-0鉻制腸線輕置于迷走神經(jīng)周圍，然后將迷走神經(jīng)與頸部結(jié)締組織固定，使其與頸總動(dòng)脈形成交叉壓迫，造成頸總動(dòng)脈對(duì)迷走神經(jīng)的長期搏動(dòng)性壓迫，逐層縫合切口。術(shù)后給予肌注抗生素抗感染3d。

1.3.2 血壓測定 實(shí)驗(yàn)犬行有創(chuàng)血壓監(jiān)測保證血壓數(shù)值的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，于股動(dòng)脈穿刺留置鞘管，連接血壓換能器及有創(chuàng)血壓檢測儀，檢測完畢拔出鞘管，局部按壓止血，術(shù)后給予肌注慶大霉素抗感染3d。

1.3.3 血清學(xué)檢查 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在術(shù)前及術(shù)后均取靜脈血，離心后留取血清，每1mL上清液中加入酶抑制劑PMSF（含Na-EDTA.82羥基喹啉和22巰基丙醇）20μL，于-80℃儲(chǔ)存待用。應(yīng)用放射免疫法測定血管緊張素II（AngII）的濃度，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法測定腎素活性（PRA）及醛固酮（Ald）的濃度（中國同位素公司北方免疫試劑研究所）。

1.3.4 術(shù)中失血的收集 采用稱量血紗布重量的方法。術(shù)前應(yīng)電子稱稱量術(shù)中要使用的紗布，術(shù)中將被血浸透的血紗布集中，助手及時(shí)將血紗布鉗夾到電子秤上稱重，并記錄所稱重量的結(jié)果，計(jì)算后的累積量即為實(shí)驗(yàn)犬術(shù)中紗布蘸血的出血量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)各實(shí)驗(yàn)造模前后血壓比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，對(duì)兩實(shí)驗(yàn)組間術(shù)中出血量及造模后血壓的比較應(yīng)用兩組獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。用The Kaplan-Meier followed by Log rank對(duì)兩實(shí)驗(yàn)組間犬的死亡率進(jìn)行分析。統(tǒng)計(jì)結(jié)果以P<0.05為有顯著差異。確認(rèn)造模血壓升高值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，模型制作成功。

2 結(jié)果

2.1 血壓變化 兩造模組血壓均有明顯的升高，經(jīng)顱高血壓造模與經(jīng)頸動(dòng)脈高血壓造模其收縮壓（SBP）及舒張壓（DBP）在術(shù)后均有顯著升高（P<0.05），且隨時(shí)間的延長血壓日趨穩(wěn)定。兩組之間造模后各時(shí)間點(diǎn)收縮壓和舒張壓差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 實(shí)驗(yàn)犬股動(dòng)脈有創(chuàng)血壓測量值（±s,mmHg）Tab 1 Measurement of intrusive femoral blood pressure in dogs

表1 實(shí)驗(yàn)犬股動(dòng)脈有創(chuàng)血壓測量值（±s,mmHg）Tab 1 Measurement of intrusive femoral blood pressure in dogs

*P<0.05

12周* 163±14.8108±7.8164±13.6110±5.7指標(biāo)經(jīng)頸SBP經(jīng)頸DBP經(jīng)顱SBP經(jīng)顱DBP基礎(chǔ)值137±13.688±13.1135±11.384±10.91周* 148±18.996±13.3155±14.798±12.32周* 156±11.1104±8.2158±12.6103±8.54周* 163±14.4110±7.8162±16.2110±7.58周* 159±16.1109±8.9163±11.3111±6.6

2.2 神經(jīng)內(nèi)分泌指標(biāo) 為觀察經(jīng)頸動(dòng)脈高血壓造模方法對(duì)交感神經(jīng)系統(tǒng)的影響，分別于術(shù)前、造模后4周、8周、12周檢測PRA、AngII及Ald的水平，結(jié)果顯示：經(jīng)頸動(dòng)脈高血壓造模后，PRA、AngII及Ald水平隨時(shí)間的推移均明顯升高，差異有顯著性（P<0.05），兩組間各指標(biāo)未見明顯差異（P>0.05），見表2。

表2 經(jīng)頸動(dòng)脈造模的神經(jīng)內(nèi)分泌指標(biāo)監(jiān)測結(jié)果（±s）Tab 2 Measurement of neuroendocrine index in transcarotid modeling dogs

表2 經(jīng)頸動(dòng)脈造模的神經(jīng)內(nèi)分泌指標(biāo)監(jiān)測結(jié)果（±s）Tab 2 Measurement of neuroendocrine index in transcarotid modeling dogs

*P<0.05

造模后12周* 2.2±1.44120±25.27.5±1.731.8±0.96117±19.97.7±2.21指標(biāo)經(jīng)頸PRA（ng/mL）經(jīng)頸AngII(pg/mL)經(jīng)頸Ald(ng/dL)經(jīng)顱PRA（ng/mL）經(jīng)顱AngII(pg/mL)經(jīng)顱Ald(ng/dL)基礎(chǔ)0.26±0.0976.9±14.31.8±1.270.32±0.0480.3±9.21.5±1.11造模4周* 0.49±0.3586.5±13.74.6±2.590.42±0.1289.9±10.74.9±1.98造模后8周* 0.71±0.5797.1±21.96.6±3.340.93±0.35104.7±13.36.3±4.17

2.3 死亡率分析 經(jīng)顱造模組與經(jīng)頸動(dòng)脈造模組犬均有一定的死亡率，其中經(jīng)顱造模組實(shí)驗(yàn)犬死亡率明顯高于經(jīng)頸動(dòng)脈造模組實(shí)驗(yàn)犬,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

表3 兩造模組死亡個(gè)數(shù)及死亡率比較Tab 3 Comparison of mortality between two groups

2.4 術(shù)中失血量分析 經(jīng)顱動(dòng)脈造模術(shù)中平均失血量為（55.7±6.4）mL，明顯高于經(jīng)頸造模術(shù)中平均失血量（7.5±1.8）mL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

隨著高血壓患病率的逐年上升，制備穩(wěn)定可靠的高血壓模型對(duì)于探索高血壓患病機(jī)制、了解高血壓對(duì)其他臟器的影響有著重要意義。目前根據(jù)模型制作方法的不同，高血壓實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型主要包括3類：自發(fā)性高血壓、誘發(fā)性高血壓和基因工程高血壓動(dòng)物模型[1]，其中神經(jīng)源性高血壓模型因可高度模擬人高血壓的形成過程，且適用于降壓藥物的篩選[2]，一直是眾多學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)方向[3-4]，本實(shí)驗(yàn)旨在探索目前兩種神經(jīng)源性高血壓模型的制作效果。

神經(jīng)源性高血壓模型[5]機(jī)制主要通過延髓左側(cè)第Ⅸ、X顱神經(jīng)入腦干區(qū)受搏動(dòng)性血管壓迫導(dǎo)致減壓反射的傳入沖動(dòng)減少以及延髓頭端腹外側(cè)神經(jīng)元受刺激，通過交感神經(jīng)節(jié)支配腎上腺髓質(zhì)、心臟和血管來調(diào)節(jié)心血管活動(dòng)，控制外周阻力，最終導(dǎo)致血壓增高[6]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，兩組造模方法造模后收縮壓及舒張壓水平均顯著升高，考慮搏動(dòng)性壓迫對(duì)神經(jīng)纖維或細(xì)胞體產(chǎn)生的影響遠(yuǎn)大于持續(xù)性壓迫，這種搏動(dòng)性壓迫干擾了壓力感受器在每個(gè)心動(dòng)周期中的搏動(dòng)性沖動(dòng)傳入，迷走神經(jīng)沖動(dòng)傳入減弱，迷走神經(jīng)的抑制功能減弱，交感活動(dòng)加強(qiáng)，表現(xiàn)為腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的激活及兒茶酚胺分泌增加，最終導(dǎo)致血壓升高[7]。此前已有研究結(jié)果表明，經(jīng)顱高血壓造模可影響PRA、AngII及Ald等其他指標(biāo)的水平[8-10]，本實(shí)驗(yàn)中頸動(dòng)脈高血壓造模方法中上述指標(biāo)的變化趨勢亦與上述研究相吻合。

結(jié)合本實(shí)驗(yàn)死亡率結(jié)果，考慮由于經(jīng)顱造模過程需行開顱手術(shù)，實(shí)驗(yàn)操作過程復(fù)雜，技術(shù)難度較大，動(dòng)物術(shù)中死亡率較高，器械要求高，且由于顯微操作的限制不適宜于小動(dòng)物造模，易受人為因素影響；此外經(jīng)顱造模法因動(dòng)物頭皮及肌肉內(nèi)血供豐富，手術(shù)過程需離斷頸部肌肉，出血量明顯增多；還可能造成腦組織損傷，且術(shù)后腦脊液漏、顱內(nèi)感染等并發(fā)癥多，不宜做大樣本研究推廣，然而其造模原理與人類原發(fā)性高血壓形成的機(jī)制基本一致。經(jīng)頸動(dòng)脈鞘內(nèi)血管搏動(dòng)性壓迫脫髓鞘的迷走神經(jīng)而制作成神經(jīng)源性高血壓的動(dòng)物模型，該實(shí)驗(yàn)過程僅取頸部切口，只需打開頸動(dòng)脈鞘，操作非常簡便，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出血量少、死亡率低，且術(shù)后并發(fā)癥較少，造模效果亦顯著，可供大量造模研究使用。

本實(shí)驗(yàn)中兩種神經(jīng)源性高血壓造模方法各具優(yōu)缺點(diǎn)，其中經(jīng)頸動(dòng)脈造模由于其低死亡率、簡便易行、適宜大樣本制作更具優(yōu)勢，然而實(shí)驗(yàn)亦存在一定的不足之處，如血管壓迫神經(jīng)結(jié)扎松緊程度、術(shù)者操作熟練程度及對(duì)于頸動(dòng)脈及術(shù)中對(duì)迷走神經(jīng)的損傷都對(duì)高血壓造模效果有不同程度的影響，在實(shí)際工作中應(yīng)根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)條件選擇適宜的操作方法，從而獲得科學(xué)可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

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