張 瑜，崔志清

（天津醫(yī)科大學(xué)藥理學(xué)教研室，天津 300070）

黃連合劑主要成分為丹參、黃連、生地等。主治神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂所致的心肌缺血癥。主成份丹參的藥理作用有活血祛瘀，涼血消癰，除煩安神[1-2]，用于胸腹或肢體瘀血疼痛、癥瘕、癰腫瘡毒、心煩失眠、冠心病、高血壓等病癥，生地也是一種具有強(qiáng)心作用的中藥，但對(duì)它們毒理學(xué)方面的報(bào)道較少。為探討黃連合劑長(zhǎng)期服用的安全性，了解其對(duì)主要靶器官的毒性作用和無(wú)毒性反應(yīng)劑量，為臨床研究提供參考，筆者對(duì)其進(jìn)行了長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)研究[3-6]。

1 材料與方法

1.1 藥物 黃連合劑，褐色流浸膏，3.7g生藥/g流浸膏，由天津市現(xiàn)代醫(yī)藥開(kāi)發(fā)研究所提供。實(shí)驗(yàn)前用純化水稀釋成不同濃度的混懸液保存于0～4℃冰箱內(nèi)備用。

1.2 動(dòng)物 Wistar大鼠（SPF級(jí)）[7]，亞屏障環(huán)境，體重100～120g，雌雄各半，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（京）2002—0003。

1.3 試劑 血液生化試劑盒由上海豐匯醫(yī)學(xué)科技有限公司生產(chǎn)。目測(cè)八聯(lián)試紙帶，批號(hào)20050831，由廣州花都高爾寶生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，粵藥管械（準(zhǔn)）字2000第2400020號(hào)（更）。

1.4 儀器 F-820血細(xì)胞記數(shù)儀（日本東亞醫(yī)用電子株式會(huì)社），BECKMAN COULTER CX4PRO型全自動(dòng)生化分析系統(tǒng)（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司），櫻花滑走式切片機(jī)、櫻花PS-52伸展機(jī)、櫻花RH-12EP脫水機(jī)、櫻花DRS-601-A自動(dòng)染色機(jī)（日本大和光機(jī)工業(yè)株式會(huì)社），日本NIKON-OPTIPHOT（X型）照相顯微鏡（日本尼康株式會(huì)社），TS1000單通道凝血分析儀（美德太平洋精密儀器有限公司），血清Na+、K+、Cl-測(cè)定儀（美國(guó)Medica Corporation）。

1.5 方法 健康無(wú)傷大鼠160只，雌雄各半，隨機(jī)分成對(duì)照組及黃連合劑30.0、15.0、7.5g生藥/kg 3個(gè)劑量組，每組40只，分別相當(dāng)于成人用量的50、25、12.5倍。按10mL/kg的給藥體積，每天定時(shí)灌胃給藥1次，每周6d，連續(xù)給藥26周，對(duì)照組給予等體積純化水。各組大鼠于給藥前開(kāi)始每周稱(chēng)體重1次，并觀察進(jìn)食、排便及一般體征。在連續(xù)給藥26周后，各組動(dòng)物于末次給藥后24h，眼眶內(nèi)取血（20μL/只），用血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定紅細(xì)胞、血紅蛋白、血小板、白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)等指標(biāo)。末次給藥24h后，乙醚麻醉后經(jīng)股動(dòng)脈取血5mL，離心，取血清測(cè)定白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）、總膽固醇（CHOL）、肌酐（CREA）、血糖（GLU）、總膽紅素（TBIL）、總蛋白（TP）、堿性磷酶（ALP）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、肌酸激酶（CK）、甘油三酯（TG）、血清Na+、K+、Cl-共15項(xiàng)生化指標(biāo)[8]。同時(shí)剖取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸、附睪、子宮（卵巢）、腦稱(chēng)重，計(jì)算各臟器重量及系數(shù)。并將上述臟器與胃和食道、氣管、胰腺、十二指腸、膀胱、前列腺、甲狀腺、唾液腺、垂體、坐骨神經(jīng)、延髓、脊髓、主動(dòng)脈、腸系膜淋巴結(jié)、乳腺、胸骨等一起用10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，常規(guī)制片，HE染色后進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)檢查。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用生物統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果

2.1 一般狀況及尿常規(guī)檢查 各劑量組大鼠飲水、攝食量、尿量、排便量、體重及尿常規(guī)檢查結(jié)果與對(duì)照組比較無(wú)明顯差異。

2.2 血液學(xué)檢查 各劑量組大鼠血液學(xué)各項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照組比較無(wú)明顯差別。結(jié)果見(jiàn)表1、2。

表1 黃連合劑對(duì)雌性大鼠血液學(xué)的影響（±s）Tab 1 Effects of coptis mixture on the hematology of female rats

表1 黃連合劑對(duì)雌性大鼠血液學(xué)的影響（±s）Tab 1 Effects of coptis mixture on the hematology of female rats

對(duì)照組8.44±1.477.97±0.72150.10±16.14870.00±143.3010.68±0.6517.19±4.3877.00±6.57項(xiàng)目白細(xì)胞(×109/L)紅細(xì)胞(×1012/L)血紅蛋白(g/L)血小板(×109/L)凝血酶原時(shí)間（s）網(wǎng)織紅細(xì)胞(‰)淋巴細(xì)胞(%)給藥組(生藥g/kg) 7.57.71±1.838.16±0.71152.10±22.40933.10±110.1410.20±0.6214.33±3.8876.60±8.3315.07.44±2.058.07±1.04157.10±13.55830.10±114.2210.82±0.4916.92±1.9876.90±6.7230.08.30±1.497.63±0.81151.10±13.62836.20±132.1310.49±0.7214.93±4.4676.80±4.78

表2 黃連合劑對(duì)雄性大鼠血液學(xué)的影響（±s）Tab 2 Effects of coptis mixture on the hematology of male rats

表2 黃連合劑對(duì)雄性大鼠血液學(xué)的影響（±s）Tab 2 Effects of coptis mixture on the hematology of male rats

項(xiàng)目白細(xì)胞(×109/L)紅細(xì)胞(×1012/L)血紅蛋白(g/L)血小板(×109/L)凝血酶原時(shí)間（s）網(wǎng)織紅細(xì)胞(‰)淋巴細(xì)胞(%)對(duì)照組10.20±2.758.69±1.42153.80±19.80940.40±212.7310.64±0.6714.42±3.5076.50±5.74給藥組(生藥g/kg) 7.510.68±1.769.33±1.15162.80±18.981034.30±134.359.86±0.8717.29±7.5278.80±8.3515.010.86±1.099.39±0.98160.50±20.20946.70±107.6610.21±1.3812.96±3.9876.60±7.1530.011.04±1.649.05±1.31162.10±20.67964.00±171.5710.72±0.7716.18±6.3378.20±8.66

2.3 血液生化學(xué)檢查 給藥26周后，雌性大鼠中劑量組肌酐升高，雄性大鼠低劑量組甘油三酯略有升高，其他指標(biāo)各給藥組與對(duì)照組間無(wú)顯著性差別。結(jié)果見(jiàn)表3、4。

表3 黃連合劑對(duì)雌性大鼠血液生化學(xué)的影響（±s）Tab 3 Effects of coptis mixture on the blood biochemistry of female rats

表3 黃連合劑對(duì)雌性大鼠血液生化學(xué)的影響（±s）Tab 3 Effects of coptis mixture on the blood biochemistry of female rats

與對(duì)照組比較 **P<0.01

項(xiàng)目ALB(g/L) BUN(mmol/L) CHOL(mmol/L) CREA(μmol/L) GLU(mmol/L) TBIL(μmol/L) TP(g/L) ALP(IU/L) ALT(IU/L) AST(IU/L)對(duì)照組23.20±2.047.45±1.260.83±0.1961.1±9.024.69±0.546.18±2.1272.50±7.9935.80±7.8440.00±4.81141.90±19.54給藥組(生藥g/kg) 7.524.00±2.408.66±0.980.88±0.1068.70±7.244.94±0.387.76±1.4678.60±5.1732.30±7.7335.80±6.73144.80±11.9815.022.00±2.008.45±0.790.76±0.2071.50±6.24** 4.58±0.616.19±1.5778.00±5.3132.20±8.6134.20±7.38143.10±9.0030.023.80±2.498.11±1.350.86±0.2166.70±6.314.79±0.976.30±1.8379.30±6.1531.20±11.7136.40±4.68129.70±32.42

表4 黃連合劑對(duì)雄性大鼠血液生化學(xué)的影響（±s）Tab 4 Effects of coptis mixture on the blood biochemistry of male rats

表4 黃連合劑對(duì)雄性大鼠血液生化學(xué)的影響（±s）Tab 4 Effects of coptis mixture on the blood biochemistry of male rats

給藥組(生藥g/kg)項(xiàng)目ALB(g/L) BUN(mmol/L) CHOL(mmol/L) CREA(μmol/L) GLU(mmol/L) TBIL(μmol/L) TP(g/L) ALP(IU/L) ALT(IU/L) AST(IU/L)對(duì)照組20.00±1.947.42±1.431.24±0.3362.90±17.655.24±0.946.16±1.9175.70±6.3173.60±37.2258.90±42.05152.90±55.947.518.30±1.577.67±0.911.44±0.4156.30±7.185.38±0.516.12±1.5770.90±4.9874.83±14.0841.60±6.43114.50±12.9315.019.50±2.127.65±1.251.20±0.3360.90±9.675.37±0.606.17±1.1877.20±4.3267.10±19.6637.50±4.20141.30±26.9330.018.80±1.328.32±1.051.15±0.2464.40±6.855.11±0.476.10±1.5273.50±4.8150.50±6.0248.10±9.77151.20±19.79

2.4 病理組織學(xué)觀察 大體觀察各組大鼠主要臟器未見(jiàn)明顯病變。光鏡下檢查各劑量組與對(duì)照組肝、肺間質(zhì)組織均可見(jiàn)輕度炎細(xì)胞浸潤(rùn)，但相比較并無(wú)顯著性差別。見(jiàn)圖1。

圖1 黃連合劑對(duì)大鼠長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)病理組織學(xué)照片F(xiàn)ig 1 The histopathological pictures of the animals in long-term toxicity test

2.5 對(duì)臟器重量及系數(shù)的檢查 各組大鼠的臟器系數(shù)及臟器重量與對(duì)照組比較無(wú)顯著差別。

3 討論

連續(xù)26周大鼠反復(fù)灌胃給予相當(dāng)于人臨床擬用日劑量的50、25和12.5倍的不同濃度同體積的黃連合劑混懸液后，雌、雄動(dòng)物體重、尿量、排便量、飲水量、攝食量及一般體征與對(duì)照組比較均無(wú)明顯差異。血液學(xué)測(cè)定中，給藥26周后各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)與對(duì)照組比較均無(wú)明顯差異。血液生化學(xué)檢查中，給藥26周后，雌性動(dòng)物中劑量組肌酐升高，雄性動(dòng)物低劑量組甘油三酯略有升高，雖有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但因未見(jiàn)劑量相關(guān)性與性別相關(guān)性，故認(rèn)為不具有臨床毒理學(xué)意義。其他指標(biāo)與對(duì)照組比較未見(jiàn)明顯差異。這些指標(biāo)表明該藥對(duì)大鼠的肝臟、腎臟、血糖無(wú)明顯影響。臟器重量及臟器系數(shù)檢查，各劑量組動(dòng)物臟器重量和臟器系數(shù)與對(duì)照組比較無(wú)顯著差別。病理組織形態(tài)學(xué)檢查中，大體觀察各組動(dòng)物主要臟器未見(jiàn)明顯病變。光鏡下檢查各劑量組與對(duì)照組肝、肺間質(zhì)組織均可見(jiàn)輕度炎細(xì)胞浸潤(rùn)，但相比較并無(wú)顯著性差別，所以并不具有毒理學(xué)意義。

綜合以上結(jié)果，在本實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)大鼠黃連合劑26周反復(fù)灌胃給藥后，在其心、肝、脾、肺、腎等主要器官未見(jiàn)明顯毒性反應(yīng)。本品的無(wú)毒性反應(yīng)劑量定為7.5g生藥/kg。

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