王建東

（江蘇省常熟市虞山動物防疫站，常熟 215500）

蛋雞非典型新城疫的診治

王建東

（江蘇省常熟市虞山動物防疫站，常熟 215500）

1 發(fā)病情況

江蘇省常熟市某蛋雞場從2009年3月從無錫馬山雞場購進10 000羽伊莎蛋雞苗。免疫程序為：7日齡用“新城疫-傳染性支氣管炎H120二聯活疫苗”2羽份/羽點眼，25日齡用“新城疫-傳染性支氣管炎H52二聯活疫苗”2羽份/羽飲水免疫，60日齡用新城疫I系苗肌肉注射，110日齡用新城疫-減蛋下降綜合征二聯滅活疫苗肌肉注射。2009年10月10日起這批處于產蛋高峰期的雞陸續(xù)發(fā)病，產蛋量急劇下降。

2 臨床癥狀

部分雞只表現為零星掉頭，采食時做“甩頭”動作，鳴叫聲減弱，后來有喘鳴聲，精神沉郁，呆立不動，雞冠顏色由鮮紅色逐漸變成淺紅甚至蒼白色，產畸形蛋，沙殼蛋，破碎蛋增多，蛋形變小，死亡數由開始每天10多羽逐漸發(fā)展到每天30多羽，產蛋量由每天520公斤降到 400 公斤。

3 病理變化

剖解病死和臨死雞20羽，病理變化表現為：肝脾腎不同程度腫大，心包積液，心冠脂肪有點狀出血，心肌色淡，嗉囊食少充滿酸臭液體，腺胃乳頭水腫，泄殖腔粘膜輕微出血，胸腔積液，腹水增多。

4 實驗室診斷

4.1 病料采集與處理

無菌采集剖檢雞腦、肝、脾、肺等組織，放于滅菌平皿中剪碎，用含抗生素的PBS（含2 000U/ml青霉素、2mg/ml鏈霉素、50μg/ml慶大霉素和1 000U/ml制霉菌素，用10mol/ L NaOH，調pH值至7.0～7.4）按1∶5比例對組織樣品進行勻漿，轉移至滅菌指形管中，5 000 rpm離心10 min，將上清轉入新的滅菌指形管中準備進行病毒分離接種[9]。

4.2 病毒分離

取上述處理后的上清液以尿囊腔途徑接種5只10日齡SPF雞胚，接種量為0.2ml/胚，置孵化器中37℃繼續(xù)培養(yǎng)，在接種后的18～24 h左右開始照胚，若雞胚在24 h內死亡則棄去不用，以后每隔12 h照胚1次，死亡雞胚置4℃冰箱冷藏4～6 h以收縮血管，無菌收集雞胚尿囊液。接種的5只雞胚中，有3只于接種后48 h死亡，2只于接種后60 h死亡。在收獲尿囊液的過程中觀察發(fā)現所有接種胚均表現為胚胎全身出血，尤以頭部、足趾和翅出血明顯，符合NDV接種雞胚后產生的典型病變特征。

4.3 病毒鑒定

按文獻介紹的方法通過血凝和血凝抑制試驗進行分離病毒鑒定。

4.3.1 血凝試驗（HA） 在 96 孔“V”型微量反應板中，每孔加入25μL生理鹽水；每排第1孔加入25μL 雞胚尿囊液，依次作倍比稀釋至第 11 孔，棄去。每排各孔加入 25μL 生理鹽水；每排各孔加入 25μL 濃度為1%雞紅細胞；將微量反應板在振蕩器上稍微振蕩，充分混勻，室溫或 4℃靜置，從底部觀察。在第12孔（對照孔）的紅細胞完全沉積呈現“紅太陽”狀時進行結果判定，將反應板傾斜，觀察每排沉積的紅細胞與對照孔呈相同的流淌現象，則說明沒有凝集，若沒有此現象則說明紅細胞凝集，以完全凝集的最高稀釋倍數為血凝效價，用此尿囊原液制作四單位抗原，用 HA試驗進行檢測并調整。HA實驗結果顯示5只接種胚收獲的尿囊液血凝價分別為25、25、26、25、25。

4.3.2 血凝抑制試驗（HI） 在96孔“V”型微量反應板中，每孔加入25 μL生理鹽水；每排第一孔分別加入 25 μL新城疫或H5亞型禽流感標準診斷血清，依次作倍比稀釋至第10 孔，棄去；在每反應孔中加入25 μL的4單位抗原，將微量反應板在振蕩器上充分混勻，室溫靜置 30～40min；每孔加入 25 μL 1%雞紅細胞，在振蕩器上充分混勻后，室溫或4℃靜置，在第 12 孔（對照孔）的紅細胞完全沉積呈現“紅太陽”狀時進行結果判定，此時第11 孔（陰性對照孔）紅細胞則完全凝集，沒有此現象。將反應板傾斜，完全抑制四單位抗原的凝集紅細胞的作用則表現為紅細胞沉積于孔底，和生理鹽水對照孔26（第12孔）流淌現象相同。分別用新城疫陽性血清和H5、H9亞型禽流感陽性血清進行的血凝試驗結果顯示，收獲尿囊液的血凝作用可以被新城疫陽性血清所抑制，而不能被H5、H9亞型禽流感陽性血清抑制，因此可以判定分離到的病毒為NDV。

根據臨床癥狀，流行特點，剖解病理變化及實驗室檢測結果將該雞群所發(fā)疾病診斷為非典型性新城疫。

5 防制措施

疫情確診后，我們調整飼料配方，多添加電解多維，對發(fā)病雞舍加強消毒，多通風換氣，淘汰病雞，并做好無害化處理。對尚未發(fā)病的雞應用2羽份/羽新城疫IV系弱毒活疫苗進行緊急免疫接種，飲水中加入氟苯尼考，強力霉素防止繼發(fā)感染。10 d后，雞群不再有死亡現象發(fā)生，產蛋率逐漸上升。

6 發(fā)生原因分析及改進方法

根據流行病學調查，該雞場針對新城疫采取了一定的免疫措施，但是疫苗使用后雞群仍然發(fā)生了非典型性的新城疫，屬于典型的免疫失敗，原因可能是多方面的：

6.1 雛雞母源抗體的影響

新城疫免疫失敗的原因，多數是由母源抗體的干擾所致。由于雞群的個體免疫應答差異以及同批次雛雞群不一定來自同一雞群等原因，造成雛雞群中母源抗體的水平參差不齊，群與群之間有差異，即使同群個體間也存在差異。如果所有雛雞固定同一日齡進行接種，若母源抗體含量比較高時接種的疫苗會被母源抗體中和，導致機體不能正常地產生免疫力，使雛雞首免失敗。

6.2 疾病的影響

雛雞的免疫力主要靠法氏囊產生，凡是能損害法氏囊的疾病，如馬立克氏病病毒（MDV）、傳染性法氏囊病病毒（IBDV）、傳染性貧血病病毒（CAV）、淋巴性白血病病毒（ALV）、球蟲等都可使新城疫的免疫效果降低。另外，某些藥物如氯霉素、磺胺類藥、皮質激素以及飼喂霉變飼料能導致機體免疫功能下降，對疫苗應答能力減弱，對疾病易感性增加。

6.3 疫苗的影響

新城疫疫苗種類滅活苗和活苗。滅活苗又分單純滅活苗和油佐劑滅活苗，應用較廣的是油佐劑滅活苗，此苗對雞應用安全，免疫效果好。但接種油佐劑滅活苗，必須先接種弱毒活苗。新城疫污染區(qū)可用油佐劑滅活苗與弱毒苗同時接種效果佳。如不采取油苗或Ⅰ系，單憑用弱毒苗，新城疫病的流行很難控制?；蠲绶种械榷玖腿醵久鐑煞N。即Ⅰ系屬中發(fā)型毒株的強毒苗，一般用于2個月齡以上的雛雞；Ⅱ系（B1系）、Ⅲ系（F 系）、IV 系（Lasota 系）和克隆-30 等疫苗屬緩發(fā)型毒株的弱毒苗，可用于雛雞。在實際應用中對雛雞免疫力較好的是克隆-30，其次是IV 系、Ⅱ系和Ⅲ系。

6.4 疫苗使用方法和接種途徑的影響

一般情況每種疫苗都有特定的接種途徑，如Ⅰ系苗采用肌肉注射、Ⅱ系苗和Ⅳ系苗采用滴鼻、點眼或飲水免疫。當采用滴鼻、點眼免疫時，未滴入鼻孔、眼睛，飲水免疫時，免疫前未限水或飲水器內加水量太多，使配制的疫苗未能在規(guī)定時間內飲完而影響劑量以及使用不潔凈河水、井水，含氯氣的自來水、熱水等。此外，Ⅰ系苗肌肉注射時，若稀釋倍數太大。這些都不能產生較好的免疫效果，甚至會導致免疫效果失敗。

6.5 先后順序和間隔時間的影響

雛雞階段要用多種疫苗，其先后順序和間隔時間會對免疫力的產生有一定的影響，如傳染性支氣管炎、新城疫。如果是單苗，它們之間間隔時間必須在7d以上，否則免疫效果將受到影響，如果是聯苗不受影響。

6.6 疫苗質量問題及保管、運輸不當

部分單位生產疫苗質量不過關，毒力不穩(wěn)定，接種后不能產生相應免疫力等；在疫苗運輸過程中由于運輸時間長，中途周轉次數多，使疫苗的效價下降；在疫苗保管時，疫苗存放過久或超過有效期，疫苗受陽光曝曬或稀釋后長時期未用，疫苗反復凍融，保存溫度忽高忽低。這些因素都可造成疫苗失效。

6.7 應激因素

雞營養(yǎng)不良，衛(wèi)生條件差以及高溫、寒冷、缺水、饑餓、噪音等各種應激因素，都將影響雞體免疫應答能力，降低新城疫的免疫效果。

針對上述這些可能導致免疫失敗的問題，在生產中都應該制定出相應的對策，如：

（1）防止疫苗之間的干擾。多種疫苗同時免疫，一些疫苗之間會相互產生干擾現象。如新城疫疫苗和傳染性支氣管炎疫苗同時免疫時，傳染性支氣管炎病毒會干擾機體對新城疫疫苗的免疫應答，故兩者接種時間應間隔10 d以上。

（2）要按規(guī)定妥善保存好疫苗。各種疫苗在貯存、使用前及使用過程中，一定要按說明書上規(guī)定的條件保存，絕不能違反操作規(guī)程。

（3）防止劑量不足和疫苗稀釋后放置時間過長：在新城疫IV系苗防疫過程中，在飲水免疫前，應根據外界氣溫情況停止供水2～4 h。疫苗現配現用，稀釋后的疫苗要盡可能在0.5～2 h 內飲完。

（4）免疫前后合理使用消毒藥、抗病毒藥物是帶雞消毒的關鍵。

（5）免疫程序要合理：①雛雞首免日齡應視其來源而定。若來源于大型種雞場，因防疫相對規(guī)范，母源抗體滴定相對較高，首免日齡宜推遲。新城疫一般7～10日齡首免，若苗雞來源于收購的散養(yǎng)戶的雞蛋，則首免日齡宜提前3～5日齡。當然，如果有條件的話，最好還是根據抗體監(jiān)測的結果合理確定首免時間。②2免的時間應避開抗體高峰期進行，在該苗保護期后期進行或在第1次免疫后間隔7～15d進行2免。

（6）抓好飼養(yǎng)管理工作：調整好雞群飼養(yǎng)密度，對雛雞要適時開飲與開食，并做好保溫工作，減少由于應激因素而造成雞體對疫苗接種免疫應答水平的下降。

[1] 陳溥言. 獸醫(yī)傳染病學（第五版）[M]. 北京：中國農業(yè)出版社出版，2007

[2] 徐桂英，許桂香，王海燕 等. 雞非典型新城疫的診斷[J].中國動物檢疫 2008，25（5）：42～43

[3] 李文鵬.新城疫免疫中存在的問題以及解決方案[J].養(yǎng)禽與禽病防治 2008（6）：16

[4] 徐業(yè)芬，牛家強，曾群輝，等. 雞非典型新城疫的防制[J].中國獸醫(yī)雜志 2007；43（2）：67

[5] 王澤霖.正確認識新城疫 加強免疫防制[J].中國家禽 2007；29（9）：1～4

[6] 楊鈞偉，潘茹芳.大型雞場新城疫免疫程序的確定[J].中國家禽2001，23（3）：25

[7] 劉福元.商品蛋雞免疫程序的制訂[J].養(yǎng)禽與禽病防治，1999（6）：40～41

[8] 李承業(yè)，趙雪梅.雞新城疫防制中存在的問題及最佳免疫程序的探討[J].養(yǎng)禽與禽病防治 1998（2）：28～29