王東明，應(yīng)俊輝，傅 兵

(麗水職業(yè)技術(shù)學(xué)院 環(huán)境工程分院，浙江 麗水 323000)

細(xì)菌性穿孔病是由核果單胞桿菌［Xanthomonas pruni(Smith)Down］引起的一個重要病害，該病害在全國各地普遍發(fā)生，除危害桃、李、杏、梅、油桃和櫻［1］，引起葉片穿孔脫落、新梢枯死、果實(shí)發(fā)病，從而嚴(yán)重削弱樹勢，降低果品產(chǎn)量及質(zhì)量［2］。八角茴香 (Illicium verumHook．f．)屬木蘭常綠喬木，近年來的研究表明，八角茴香精油可使蛋白質(zhì)脫水，變性，損害細(xì)胞膜而具殺菌能力［3］。但并未見八角茴香抗細(xì)菌性穿孔病的相關(guān)報道。使用八角茴香提取物抗細(xì)菌性穿孔病，不會造成果品污染，有一定應(yīng)用價值。

1 材料與方法

1.1 材料

八角茴香從麗水市百姓大藥房購買，核果單胞桿菌菌種由上海市南匯種植業(yè)技術(shù)推廣中心趙杰老師提供。

1.2 方法

抗菌活性鑒定。

稱取八角茴香5 g，碾碎后放入錐形瓶中，加入乙醇 30 mL，浸泡 24 h，過濾后，濃縮至浸膏狀。

吸取200 μL菌懸液于牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基平板上，用三角涂棒涂勻。將無菌濾紙片 (直徑1 cm)蘸取茴香提取液濃縮浸膏平鋪在含菌平板中，每個平板放置3塊濾紙片。

系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)鑒別八角茴香活性成分:制備八角茴香的水浸漬液、乙醇提取液及石油醚提取液，硅鎢酸、碘化鉍鉀試劑鑒別生物堿，α-萘酚試驗(yàn)、斐林試劑鑒別糖，三氯化鐵鑒別酚類化合物，鹽酸鎂粉反應(yīng)、三氯化鋁試劑鑒別黃酮類化合物，異羥肟酸鐵反應(yīng)鑒別香豆素類化合物，堿液試驗(yàn)鑒別蒽醌類化合物，溴酚藍(lán)、pH試驗(yàn)測定有機(jī)酸［4］。

系統(tǒng)提取法分離抗菌物質(zhì):稱取八角茴香50 g，碾碎后，采用水蒸汽蒸餾，分離出揮發(fā)油;殘?jiān)?0℃烘干后石油醚100 mL浸漬1 d，取濾液，共計浸漬3次，合并濾液;再依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇各浸漬3次;取出濾液濃縮至浸膏狀，采用貼濾紙片法驗(yàn)證系統(tǒng)提取物抗菌效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 八角茴香的抗菌活性及成分

八角茴香提取液濃縮浸膏抑菌圈平均直徑為1.9 cm，抗核果單胞桿菌效果明顯。已證實(shí)八角茴香化學(xué)成分含有揮發(fā)性化合物、倍半萜內(nèi)酯及其衍生物、黃酮類成分等成分［5］。系統(tǒng)鑒定結(jié)果顯示八角茴香含有揮發(fā)油、糖或糖苷、酚類化合物、有機(jī)酸等，八角茴香含有多種活性成分，為產(chǎn)生抗菌性提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。

2.2 系統(tǒng)提取物抗菌效果

八角茴香揮發(fā)油及正丁醇提取物沒有抑菌效果，石油醚、氯仿、乙酸乙酯提取物具有一定抗菌效果抑菌圈直徑分別為1.1，1.3和1.5 cm，說明八角茴香抗菌活性為極性小與中等極性成分，以中等極性成分抗菌活性最強(qiáng)。

目前認(rèn)為八角茴香抗菌成分是揮發(fā)油，陳奇等研究發(fā)現(xiàn)八角茴香揮發(fā)油對根霉、酵母菌、大腸桿菌都具有一定抗性［3］;劉志希等明確了反式茴香醚是八角茴香精油中的主要抗菌成分，對棉花枯萎病菌菌絲生長抑制作用［6］。本試驗(yàn)證實(shí)八角茴香抗細(xì)菌性穿孔病的成分為揮發(fā)油以外的成分，與八角茴香不同活性成分的抗菌譜范圍有關(guān)。八角茴香中所含的黃酮為槲皮素等，以槲皮素做抗菌試驗(yàn)證實(shí)槲皮素沒有抗菌效果。楊金從八角茴香正丁醇浸膏中分離得到8個化合物，分別為木樨草素、木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、 (+)-兒茶素、gallocatechin、香草酸、3，4-二甲氧基苯甲酸、4-羥基苯甲酸和β-谷甾醇、胡蘿卜苷［7］，則上述成分也沒有抗細(xì)菌性穿孔病的活性。從以上結(jié)果推測八角茴香中的抗細(xì)菌性穿孔病成分是揮發(fā)油以外的極性較小和中等極性的萜類成分。

3 小結(jié)

八角茴香藥食兼用，含有多種活性成分，推測抗細(xì)菌性穿孔病的成分是揮發(fā)油以外的萜類成分，可利用提取揮發(fā)油后的八角茴香殘?jiān)痔岷笾苯蛹庸こ煽衫玫闹苿?也可根據(jù)八角茴香乙酸乙酯提取物結(jié)構(gòu)，挖掘先導(dǎo)化合物，進(jìn)而人工合成抗性藥物。本研究為開發(fā)抗細(xì)菌性穿孔藥物提供有益參考。

［1］趙杰，黃奕怡．桃細(xì)菌性穿孔病的室內(nèi)藥劑篩選 ［J］．上海農(nóng)業(yè)科技，2007(3):133．

［2］吳秀剛，吳康云．桃樹3種葉片穿孔病的比較鑒別與防治［J］．農(nóng)技服務(wù)，2007，24(12):41，92．

［3］陳奇，張根生，邢楠楠，等．八角茴香精油的抗菌活性及在肉類保鮮中的應(yīng)用研究 ［J］．中國調(diào)味品，2007(4):49-51．

［4］董小萍．中藥品種與化學(xué)成分實(shí)驗(yàn) ［M］．上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，2003．

［5］王琴，蔣林，溫其標(biāo)．八角茴香研究進(jìn)展 ［J］．糧食與油脂，2005(5):43-44．

［6］劉志希，李鋒，張臘梅．八角茴香精油及其主成分對棉花枯萎病菌的拮抗作用 ［J］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38(32):18193-18194．

［7］楊金，閔勇，劉衛(wèi)，等．八角茴香的化學(xué)成分研究 ［J］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38(23):12453-12454．