● 耿學(xué)斯 肖秋平 葉社房 邱麗娟 尤文質(zhì)

肛痛消軟膏藥效學(xué)及毒性實(shí)驗(yàn)研究※

● 耿學(xué)斯1*肖秋平1葉社房2邱麗娟1尤文質(zhì)1

目的:觀察肛痛消軟膏的鎮(zhèn)痛、消腫、促進(jìn)創(chuàng)面愈合作用及其安全性。方法:通過熱板法觀察肛痛消軟膏的鎮(zhèn)痛作用;采用二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹觀察肛痛消軟膏的消腫作用;通過二度燙傷家兔觀察肛痛消軟膏促進(jìn)創(chuàng)面愈合作用;觀察肛痛消軟膏的皮膚刺激反應(yīng)、皮膚過敏反應(yīng)和急性毒性反應(yīng)。結(jié)果:肛痛消軟膏對熱傳導(dǎo)引起的疼痛反應(yīng)有明顯的拮抗作用;對小鼠耳廓腫脹有明顯的抑制作用;能明顯縮短家兔燙傷創(chuàng)面愈合時間;肛痛消軟膏對豚鼠完整及破損皮膚無刺激性反應(yīng)及過敏反應(yīng)，家兔對肛痛消軟膏未出現(xiàn)任何急性毒性反應(yīng)。結(jié)論:肛痛消軟膏具有良好的鎮(zhèn)痛、消腫、促進(jìn)創(chuàng)面愈合的作用，是一種安全的中藥制劑。

肛痛消軟膏 鎮(zhèn)痛 消腫 促進(jìn)創(chuàng)面愈合 毒性實(shí)驗(yàn)

肛痛消軟膏是我科的協(xié)定處方，由漢防己、延胡索、黃柏、五倍子等中藥及透皮劑氮酮組成。臨床觀察表明［1］，肛痛消軟膏對防治痔術(shù)后創(chuàng)面腫痛，促進(jìn)創(chuàng)面愈合方面具有明顯的療效。實(shí)驗(yàn)研究亦表明肛痛消軟膏具有消腫止痛，促進(jìn)創(chuàng)面愈合的療效及無明顯毒副作用，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動物、儀器及試劑

1.1.1 動物 普通級昆明種小鼠，體重22～26g;雌雄兼用;白色豚鼠，體重280～300g，雌雄各半;家兔，體重2kg左右，雌雄各半。所有實(shí)驗(yàn)動物均購自廈門大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心。

1.1.2 儀器 梅特勒AL－204電子天平，梅特勒－托利多儀器(上海)有限公司;HH－42快速恒溫?cái)?shù)顯水浴箱，常州國華電器有限公司生產(chǎn);XSP3C電腦型生物顯微鏡，上海萬衡精密儀器有限公司生產(chǎn)。

1.1.3 試劑 肛痛消軟膏由廈門市中醫(yī)院制劑室提供;太寧乳膏(復(fù)方角菜酸酯乳膏)由Creapharm Bessay SAS提供，進(jìn)口藥品注冊號:H20050047;硫化鈉(配制成6%濃度，成都化學(xué)試劑廠，批號030115);2，42二硝基氯苯(配制成1%的致敏濃度和0.1的激發(fā))濃度，上海試劑一廠，批號031028;二甲苯，汕頭市達(dá)濠區(qū)精細(xì)化學(xué)品有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 小鼠熱板致痛法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)(熱板法)［2］調(diào)節(jié)恒溫器水溫至55.0±0.2℃，將500mL燒杯放入其中，使燒杯底部接觸水面。每次取雄性小鼠1只，放入燒杯內(nèi)。記錄自放入燒杯至出現(xiàn)舔后足所需時間，作為該鼠的痛閾值。凡30s內(nèi)不出現(xiàn)舔后足者，棄之不用。依次測量各小鼠的痛閾值，取預(yù)選合格的小鼠30只，重新測痛閾1次，將兩次痛閾的平均值作為該鼠給藥前的痛閾。將所選小鼠隨機(jī)分為3組，即生理鹽水對照組，太寧乳膏對照組和肛痛消軟膏實(shí)驗(yàn)組，每組10只，各組將藥物均勻涂抹于小鼠足底部。測定給藥后0.5h、1h、2h各鼠的痛閾值，比較各組用藥后不同時間平均痛閾與基礎(chǔ)痛閾的差異，判斷是否有鎮(zhèn)痛作用。

1.2.2 小鼠耳廓二甲苯所致腫脹法抗炎實(shí)驗(yàn)［3］取小鼠30只，雌雄各半，隨機(jī)均分3組，每組10只，外涂生理鹽水、太寧乳膏、肛痛消軟膏組分別涂于小鼠左右兩耳。0.5h后各組用二甲苯涂于小鼠左耳側(cè)，1h后處死小鼠，剪下左右兩耳，用9mm打孔器將小鼠雙耳同部位等面積取下圓耳片，電子天平稱重，計(jì)算耳廓重量，腫脹度=左耳重量－右耳重量，比較各組小鼠耳廓腫脹度。腫脹抑制率=(生理鹽水組平均腫脹度－給藥組平均腫脹度)/生理鹽水組平均腫脹度×100%。

1.2.3 家兔燙傷法創(chuàng)面愈合實(shí)驗(yàn) 對家兔實(shí)驗(yàn)性皮膚創(chuàng)面愈合的影響 取家兔18只，體重2kg左右，雌雄各半，分為肛痛消軟膏組、太寧乳膏組、生理鹽水組，于實(shí)驗(yàn)前，將家兔背部脫毛，脫毛范圍約40cm2，確認(rèn)家兔皮膚無傷痕。用點(diǎn)狀燙傷器(直徑為1.5cm.溫度為80度)緊貼已脫毛的腹部皮膚，持續(xù)45s造成2度燙傷，燙傷共6處，每側(cè)3點(diǎn)，左右對稱，然后按上述將藥膏均勻的涂于創(chuàng)面上，逐日觀察結(jié)痂時間和創(chuàng)面愈合時間。取愈合創(chuàng)面組織，切片、HE染色后用生物顯微鏡觀察組織愈合后的切片情況。

1.2.4 皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)［4］多次涂藥對豚鼠皮膚刺激性試驗(yàn)，白色豚鼠20只，體重280～300g，雌雄各半。先在背部兩側(cè)皮膚上去毛各4cm×5cm，分別左側(cè)涂布藥膏，右側(cè)涂布白蠟，用玻紙、紗布、膠布固定，連續(xù)7天，每日進(jìn)行觀察。于末次給藥后24小時去除受試物，用棉花擦凈藥膏和白蠟。于1h、24h、48h、72h觀察并記錄涂藥部位紅斑和水腫情況，并進(jìn)行刺激反應(yīng)評分。評分標(biāo)準(zhǔn)如下:(1)皮膚刺激性反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn):①紅斑:無紅斑為0分，輕度紅斑(勉強(qiáng)可見)為1分，中度紅斑(明顯可見)為2分，重度紅斑為3分，紫紅色紅斑到有焦痂形成為4分;②水腫:無水腫為0分，輕度水腫(勉強(qiáng)可見)為1分，中度水腫(明顯可見)為2分，重度水腫(皮膚隆起1mm，輪廓清楚)為3分，嚴(yán)重水腫(皮膚隆起1mm以上，范圍擴(kuò)大)為4分;(2)皮膚刺激強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn):平均積分值0～0.5為無刺激性，平均積分值0.5～2.0為輕度刺激性，平均積分值2.0～6.0為中度刺激性，平均積分值6.0～8.0為強(qiáng)刺激性(注:平均積分值=紅斑形成總分+水腫形成總分/合計(jì)動物數(shù))。

1.2.5 皮膚過敏實(shí)驗(yàn)［4］白色豚鼠30只，體重250～300g，隨機(jī)分為3組，每組10只，雌雄各半，用6%硫化鈉將背部脊柱兩側(cè)毛脫去，充分洗凈脫劑。實(shí)驗(yàn)組予肛痛消軟膏、陰性對照組給予白蠟、陽性對照組給予二硝基氯苯(DNCB)。各組在兩側(cè)脫毛區(qū)分別給予致敏接觸和激發(fā)給藥。(一)致敏接觸:均用玻紙，紗布，膠布固定，保持6h，用溫水洗去殘留物。第7天和第14天再同樣涂藥各1次;(二)激發(fā)試驗(yàn):于末次給藥致敏后14d，在脫毛區(qū)涂上受試藥物，6h后去除涂物，即刻觀察，并于24h、48h、72h再次觀察皮膚過敏反應(yīng)情況:(1)按規(guī)定對每只豚鼠過敏反應(yīng)評分，計(jì)算每組的反應(yīng)平均值，皮膚過敏反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)如下:①紅斑形成:無紅斑為0分，輕度紅斑為1分，中度紅斑為2分，重度紅斑為3分，水腫性紅斑為4分;②水腫形成:無水腫為0分，輕度水腫為1分，中度水腫為2分，重度水腫為3分。(2)藥物致敏反應(yīng)的強(qiáng)度，按出現(xiàn)過敏反應(yīng)的動物數(shù)百分率計(jì)算，致敏率=出現(xiàn)皮膚過敏反應(yīng)陽性的動物例數(shù)÷受試動物總數(shù)，致敏率分類標(biāo)準(zhǔn):0～10%為無致敏性(Ⅰ度)，20% ～30%為輕度致敏性(Ⅱ度)，40% ～60%為中度致敏性(Ⅲ度)，70% ～80%為高度致敏性(Ⅳ度)，90% ～100%為強(qiáng)刺激性(Ⅴ度)。按規(guī)定對每只豚鼠過敏反應(yīng)評分，計(jì)算每組的平均值。

1.2.6 急性毒性實(shí)驗(yàn)［5］

1.2.6.1 完整皮膚急性毒性試驗(yàn) 取健康家兔8只，雌雄各半，體重2.0±0.5kg。用6%硫化鈉將背部脊柱兩側(cè)毛脫去，充分洗凈脫劑。觀察24h無刺激后，隨機(jī)分為2組，即完整皮膚空白對照組(涂白蠟)，完整皮膚軟膏組。涂后用玻紙、紗布、膠布固定，24h后取下包扎物，用棉花擦去軟膏和生理鹽水觀察7d。

1.2.6.2 破損皮膚急性毒性試驗(yàn) 取健康家兔8只，雌雄各半，體重2.1±0.4kg。用6%硫化鈉將背部脊柱兩側(cè)毛脫去，充分洗凈脫劑。觀察24h無刺激后，在去毛皮膚上用手術(shù)刀片劃4條平行的傷口，傷口均以不劃破真皮為準(zhǔn)，隨機(jī)分為2組，即破損皮膚空白對照組(涂白蠟)，破損皮膚軟膏組。涂后用玻紙、紗布、膠布固定，24h后取下包扎物，用棉花擦去軟膏和生理鹽水觀察7d。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 小鼠熱板致痛法鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn) 見表1。

表1 肛痛消軟膏組對熱板法致痛小鼠痛閾的影響(±s)

表1 肛痛消軟膏組對熱板法致痛小鼠痛閾的影響(±s)

注:與基礎(chǔ)痛閾值比較，*P＜0.05;肛痛消軟膏組與生理鹽水組比較，#P＜0.01;與太寧乳膏組比較，▲P＜0.05。

.36太寧乳膏組 10 13.33 ±0.90 17.23 ±0.75* 21.54 ±1.20* 25.07 ±1.05*肛痛消軟膏組 10 13.51±1.02 19.33±0.84*#▲ 25.54±1.83*#▲ 31.51±2.50*#▲30 min 60 min 120 min生理鹽水組 10 12.28 ±0.92 13.51 ±0.96 14.81 ±0.90 16.14 ±1組別 動物數(shù)痛閾值(s)基礎(chǔ)痛閾

2.2 小鼠耳廓二甲苯所致腫脹法抗炎實(shí)驗(yàn) 見表2。

表2 肛痛消軟膏組對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響(±s)

表2 肛痛消軟膏組對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響(±s)

注:與生理鹽水組比較，*P＜0.05。

組 別 動物數(shù) 腫脹度(mg) 腫脹抑制率(%)生理鹽水組30%10 7.13 ±0.22 －太寧乳膏組 10 4.80 ±0.29* 32%肛痛消軟膏組 10 5.03 ±0.19*

2.3家兔燙傷法創(chuàng)面愈合實(shí)驗(yàn) 見表3及圖A、B、C。

表3 肛痛消軟膏組對燙傷創(chuàng)面愈合的影響(±s)

表3 肛痛消軟膏組對燙傷創(chuàng)面愈合的影響(±s)

注:與生理鹽水組比較，*P ＜0.05。

組別 動物數(shù) 結(jié)痂時間(t/d) 創(chuàng)面愈合時間(t/d)7.83 ±0.41 11.17 ±0.75肛痛消軟膏組 6 5.33 ±0.52* 7.33 ±0.82*太寧乳膏組 6 5.16 ±0.41* 6.50 ±0.55生理鹽水組6*

注:生理鹽水組顯示，上皮組織愈合后，皮下組織層內(nèi)仍有較明顯的慢性炎癥細(xì)胞浸潤，部分小血管處于充血狀態(tài)。肛痛消軟膏及太寧乳膏處理后，上皮組織已經(jīng)完全愈合，與生理鹽水組比較，皮下組織層內(nèi)毛細(xì)血管增多，浸潤的慢性炎癥細(xì)胞明顯減少，未見小血管充血。

2.4 皮膚刺激性實(shí)驗(yàn) 見表4。

表4 肛痛消軟膏處理對豚鼠皮膚刺激性的影響

2.5 皮膚過敏實(shí)驗(yàn) 見表5。

表5 肛痛消軟膏處理對豚鼠皮膚過敏情況

2.6 急性毒性實(shí)驗(yàn)

2.6.1 完整皮膚急性毒性試驗(yàn) 觀察期間兩組動物飲食，活動，毛發(fā)，粘膜均正常;肛痛消軟膏組體重增加19.25±0.96g，空白組體重增加19.75±1.26g，兩組間體重增加差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。中樞神經(jīng)系統(tǒng)及消化系統(tǒng)均未見異常反應(yīng)。涂白蠟與涂肛痛消軟膏皮膚局部未見發(fā)紅現(xiàn)象。

2.6.2 破損皮膚急性毒性試驗(yàn) 觀察期間兩組動物涂藥皮膚均未見發(fā)紅;兩組動物體重均增加，肛痛消軟膏組體重增加18.75±1.26g，空白組體重增加18.75±0.76g，兩組間體重增加差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;飲食、活動如常，毛發(fā)和粘膜亦未見異常;兩組皮膚傷口均在1周左右基本愈合。

3 討論

混合痔術(shù)后腫痛，是由于手術(shù)刺激體內(nèi)局部多種血管活性物質(zhì)釋放，血管壁通透性增高，組織間積液增多，同時括約肌收縮使靜脈、淋巴回流障礙導(dǎo)致水腫［6］。同時由于排便和分泌物刺激，使肛門內(nèi)括約肌收縮、痙攣，以及局部炎癥介質(zhì)釋放刺激暴露于切口處的軀體神經(jīng)末梢，引起術(shù)后創(chuàng)面疼痛［7］。

外治法是將藥物直接作用于皮膚或黏膜，使之吸收，從而發(fā)揮治療作用，也是外科所獨(dú)具的治療方法。肛痛消軟膏由漢防己、延胡索、黃柏、五倍子、三七粉、乳香、白蘞、冰片、麻油、薄荷腦等中藥以及透皮劑氮酮組成。方中漢防己、延胡索活血化瘀、消腫止痛，具有明顯的鎮(zhèn)痛和抗炎作用，為方中君藥。三七粉活血化瘀而消腫定痛;乳香、白蘞苦寒清泄，辛散消腫，能夠消腫生肌止痛;黃柏味苦，性寒，能清熱燥濕，除下焦?jié)駸?五倍子收澀消腫斂瘡，可在創(chuàng)口表面形成保護(hù)膜以促愈合，諸藥共助君藥以加強(qiáng)止痛消腫，促進(jìn)創(chuàng)面愈合，共為臣藥。冰片通諸竅、散郁火、清熱止痛;薄荷芳香辟穢，兼能化濕，二藥清熱利濕，消腫止痛，二者所含的揮發(fā)油成分具有解熱鎮(zhèn)痛，抗炎抗菌的作用，麻油能潤膚生肌，且薄荷腦及冰片(龍腦)能夠促進(jìn)藥物有效成分經(jīng)皮膚吸收，共為佐使之藥。諸藥相合，共奏止痛消腫、斂瘡生肌之功。氮酮能通過增加角質(zhì)層類脂流動性溶解皮膚的類脂來增加藥物的透皮吸收［8］。

藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)肛痛消軟膏在不同的時間點(diǎn)對小鼠痛閾值有明顯的提高;能抑制二甲苯所致小鼠耳殼腫脹，具有消腫抗炎作用;對家兔的2度燙傷創(chuàng)面的愈合有顯著的促進(jìn)作用;愈后組織切片觀察可知肛痛消軟膏能使組織層內(nèi)浸潤的慢性炎癥細(xì)胞明顯減少，未見小血管充血。結(jié)合臨床療效觀察［1］，我們認(rèn)為其作用機(jī)理可能如下:①膏藥有效成分滲透至創(chuàng)面表面血管，通過擴(kuò)張血管，減低血管阻力，促進(jìn)氣血運(yùn)行，增加血流量，明顯改善局部組織中的微循環(huán)，減少致痛物質(zhì)的聚集;通過減少致痛物質(zhì)及炎性介質(zhì)，相對提高患者痛覺神經(jīng)對疼痛刺激的耐受能力，由此提高痛閾，緩解了術(shù)后疼痛。②藥物有效成分可直接抑制或減輕局部水腫，抑制炎癥介質(zhì)釋放，減少炎性滲出，起到抗炎的作用。③藥物所含的生物堿與皮膚及黏膜潰瘍面接觸后組織蛋白被凝固，具有很好的延展性和舒適感，可以在創(chuàng)面形成一層保護(hù)膜;通過擴(kuò)張血管，減低血管阻力，減少炎性介質(zhì)釋放，促進(jìn)成纖維細(xì)胞及毛細(xì)血管增生，增強(qiáng)組織修復(fù)能力，促進(jìn)創(chuàng)面愈合。現(xiàn)代中藥藥理學(xué)亦證實(shí)［9］，方中漢防己、延胡索、三七、乳香均含有多種生物堿，具有抗炎消腫、止痛作用;黃柏具有廣譜的抗菌作用，能夠阻斷神經(jīng)節(jié)，對中樞神經(jīng)有抑制的作用;五倍子、白蘞對多種致病菌有抑菌和殺菌作用，減少創(chuàng)面滲出，并在創(chuàng)面形成保護(hù)膜，促進(jìn)創(chuàng)面愈合作用;薄荷腦、冰片局部用藥具有清涼、止癢、止痛、止血等作用，同時具有抗炎解熱的作用。

毒性實(shí)驗(yàn)表明肛痛消軟膏僅早期對豚鼠皮膚有輕度刺激作用，這可能與透皮劑氮酮、冰片的輕微刺激作用有關(guān)，中遠(yuǎn)期無明顯刺激，且可以促進(jìn)創(chuàng)面愈合。肛痛消軟膏在皮膚過敏試驗(yàn)及藥物急性毒性試驗(yàn)中均未見明顯異常。

綜上所述，肛痛消軟膏組方簡潔，藥源豐富，成本低廉，無刺激，無毒性，不失為使用方便、療效好、安全性高的外治藥物。

［1］耿學(xué)斯，肖秋平.肛痛消軟膏防治混合痔外剝內(nèi)扎術(shù)后疼痛的臨床觀察［J］.中國肛腸病雜志，2009，29(6):18.

［2］徐淑云，卞如濂，陳 修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:695.

［3］徐淑云，卞如濂，陳 修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:719.

［4］王北嬰.中藥新藥研制與申報(bào)［M］.北京:中國中醫(yī)藥出版社，1995:260－263.

［5］中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局.中藥新藥研究指南(藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué))［M］.北京:中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局，1994:206－210.

［6］黃 河，陸金根，曹永清.草木犀流浸液片內(nèi)服加中藥熏洗防治混合痔術(shù)后并發(fā)癥［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2008，42(8):42.

［7］徐加成，任維才，姜玉嬋.復(fù)方角菜酸酯乳膏在混合痔外剝內(nèi)扎術(shù)后的應(yīng)用［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2007，13(6):539.

［8］邱麗娟，耿學(xué)斯，肖秋平，等.肛痛消軟膏在混合痔術(shù)后的應(yīng)用［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2010，16(8):532－534.

［9］沈丕安.中藥藥理與臨床運(yùn)用［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006:296－829.

廈門市科技局指導(dǎo)性項(xiàng)目(No:3502Z20089032)

耿學(xué)斯，男，主任醫(yī)師、教授，碩士研究生導(dǎo)師。主要從事肛腸疾病臨床及科研研究。

1.福建中醫(yī)藥大學(xué)附屬廈門市中醫(yī)院(361009);2.廈門大學(xué)材料學(xué)院(361005)