王 洪，劉雙環(huán)，王淑菁，岳秉飛

（中國藥品生物制品檢定院，北京 100050）

遺傳生化標記檢測法是一種簡便、迅速、準確地保證近交系小鼠遺傳質(zhì)量的方法。選擇一些在品系間具有多態(tài)性的同工酶和異構(gòu)蛋白作為生化標記，將動物臟器組織勻漿上清液、血液中的酶、蛋白質(zhì)等進行電泳后，以特異的生物化學方法進行染色來識別待測的性狀。國家標準 GB/T 14927.1—2008中顯示小鼠遺傳生化標記檢測的14個位點里有5個生化位點存在雜和形式，并且其相應的雜合圖譜在最新版本的國家標準中可以找到。雜合圖譜為近交系小鼠的遺傳質(zhì)量控制提供了判斷依據(jù)。過氧化氫酶-2是近交系小鼠生物化學標記基因檢測法的14個生化位點之一，在現(xiàn)行的國家標準里并沒有過氧化氫酶-2的雜合型圖譜的描述。過氧化氫酶-2是取小鼠的腎勻漿，進行醋纖膜電泳，根據(jù)電泳條帶的快慢來判斷該位點的基因型。該位點的染色方法簡便迅速，但是條帶很寬，對于雜合型的判斷很難，也未見相關(guān)報道?；诖耍疚膶π∈筮z傳生化標記位點過氧化氫酶-2的雜合型圖譜進行探討［1，2］。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

8周齡近交系小鼠，CBA/Ca，雄，4只，SPF級，來自上海斯萊克實驗動物有限責任公司［SCXK （滬）2007-0005］；

8周齡近交系小鼠，BALB/c，雌，4只，SPF級，來自國家嚙齒類實驗動物種子中心［SCXK（京） 2005-0004］；

8周齡近交系小鼠，C57BL/6，雌，4只，SPF級，來自國家嚙齒類實驗動物種子中心［SCXK（京） 2005-0004］。

1.2 實驗材料、儀器及試劑

Tris和檸檬酸，均為分析純，北京化學試劑公司提供。

Ce-2標準樣品試劑盒及染色用試劑盒，中國藥品生物制品檢定所提供。

醋酸纖維素膜（滌綸基），浙江臺州路橋四甲生化塑料廠提供。

電泳槽，北京市六一儀器廠產(chǎn)品。

電泳儀，BIO-RAD Model 3000Xi，美國。

毛細管離心機，IEC MB CENTRIFUGE，美國。低溫高速離心機，HITACHI 20PR-52D，日本。酸度計，sartorious PB-10，德國。

1.3 實驗方法

F1代的培育：

將1只雄性 CBA/Ca與2只雌性 BALB/c同居，21 d之后，7只雜交F1代動物CCBF1出生。

將1只雄性 CBA/Ca與2只雌性 C57BL/6同居，21 d之后，5只雜交F1代動物B6CBF1出生。

F2代的培育：

A組，將1只雄性CBA與2只雌性B6CBF1同居，20 d之后，5只F2代動物出生。

B組，將1只雄性 CBA與2只雌性 CCBF1同居，26 d之后，7只F2代動物出生。

C組，將1只雄性B6CBF1與2只雌性C57BL/ 6同居，42 d之后，6只F2代動物出生。

D組，將1只雄性CCBF1與2只雌性CCBF1同居，22 d之后，9只F2代動物出生。

E組，將1只雄性CCBF1與2只雌性 BALB/c同居，30 d之后，6只F2代動物出生。

F組，將1只雄性B6CBF1與1只雌性B6CBF1同居，30 d之后，7只F2代動物出生。

取六組實驗的父母本和所有F2代，共52只動物，按照GB/T 14927.1—2008對52只小鼠進行Ce-2遺傳生化標記檢測［3，4］。

2 結(jié)果

六組52只F2代小鼠過氧化氫酶-2生化標記位點的基因型和表現(xiàn)型，見表 1和圖1、2、3、4、5和6。

表1 F2代小鼠 過氧化氫酶-2生化標記位點的基因型Tab.1 The genotypes of F2 mice for Ce-2 biochemical marker

3 討論

圖1 A組動物過氧化氫酶-2結(jié)果Fig.1 The rusult of Ce-2 of A mice

圖2 B組動物過氧化氫酶-2結(jié)果Fig.2 The rusult of Ce-2 of B mice

圖4 D組動物過氧化氫酶-2結(jié)果Fig.4 The rusult of Ce-2 of D mice

圖5 E組動物過氧化氫酶-2結(jié)果Fig.5 The rusult of Ce-2 of E mice

圖6 F組動物過氧化氫酶-2結(jié)果Fig.6 The rusult of Ce-2 of F mice

3.1 父本 CBA表現(xiàn)型為 a型，母本 B6CBF1表現(xiàn)型為a型，如果雙方基因型均為純和的話，F(xiàn)2代動物不應該出現(xiàn)b型。已知父本CBA為純合a型，母本B6CBF1為已知純合的CBA（b型）和已知純合的C57BL/6（a型）交配得到的雜交 F1代。雖然該F1代表現(xiàn)為a型，但是其理論基因型應為ab型，F(xiàn)2代中純和的b型動物出現(xiàn)的幾率為50％，這就是F2代5只動物中有1只出現(xiàn) b型的原因，也說明 a型和b型基因不是共顯性的，a型為完全顯性。

3.2 父本CBA表現(xiàn)型為a型，母本CCBF1表現(xiàn)型為a型，如果雙方均為純合型的話，F(xiàn)2代動物不能夠出現(xiàn) b型。已知父本 CBA為純合 a型，母本CCBF1為已知純合的 CBA（b型）和已知純合的BALB/c（a型）交配得到的雜交 F1代。雖然該 F1代表現(xiàn)為a型，其理論基因型應為ab型，F(xiàn)2代中純合的b型動物出現(xiàn)的幾率為50％，這就是 F2代7只動物中有3只出現(xiàn)b型的原因，也說明a型和b型基因不是共顯性的，a型為完全顯性。

3.3 父本B6CBF1為a型，母本C57BL/6為a型。父本B6CBF1為已知純合的CBA（b型）和已知純合的C57BL/6（a型）交配得到的雜交F1代。雖然該F1代表現(xiàn)為a型，其理論基因型應為 ab型，可是母本C57BL/6為純合a型，即使F2代出現(xiàn)ab雜合基因型，因為a型基因的完全顯性，F(xiàn)2代中也不應該出現(xiàn)b型表現(xiàn)型。這與實際檢測結(jié)果一致，F(xiàn)2代的6只動物均表現(xiàn)為a型。

3.4 父本和母本都是CCBF1，為a型，CCBF1為已知純合的CBA（b型）和已知純合的BALB/c（a型）交配得到的雜交F1代。雖然該F1代表現(xiàn)為a型，其理論基因型應為ab型。F2代動物有可能出現(xiàn)純合b型的幾率為25％。在實際檢測中，9只F2代動物均表現(xiàn)為a型。即使有雜合ab型動物存在，由于a型基因的完全顯性，表現(xiàn)型也只能是a型。

3.5 父本CCBF1為a型，母本BALB/c為a型，父本CCBF1為已知純合的CBA（b型）和已知純合的BALB/c（a型）交配得到的雜交 F1代。雖然該 F1代表現(xiàn)為a型，其理論基因型應為ab型，可是母本BALB/c為純合 a型，即使 F2代出現(xiàn)雜合基因型，因為a型基因的完全顯性，F(xiàn)2代中也不應該出現(xiàn)b型表現(xiàn)型。這與實際檢測結(jié)果一致，F(xiàn)2代的6只動物均表現(xiàn)為a型。

3.6 父本和母本都是B6CBF1，為a型，B6CBF1為已知純合的 CBA（b型）和已知純合的C57BL/6（a型）交配得到的雜交F1代。雖然該F1代表現(xiàn)為 a型，其理論基因型應為ab型。F2代動物有可能出現(xiàn)純合的 b型，幾率為25％。在實際檢測中，7只F2代動物中有1只表現(xiàn)為b型。

3.7 六組實驗的結(jié)果充分說明，過氧化氫酶-2的等位基因不是共顯性的，其基因型 a為完全顯性。國家標準GB/T 14927.1—2008規(guī)定小鼠遺傳生化標記位點是14個，除過氧化氫酶-2以外，其它13個位點的等位基因都是共顯性的。嚴格地說，過氧化氫酶-2作為遺傳生化標記位點是不合適的。該位點的表現(xiàn)型只能看到純合的b型和a型，而無法見到雜合型，因為完全顯性的a型將b型掩蓋了。因此在檢測小鼠的過程中，可能會出現(xiàn)將雜合型誤判為純合 a型的可能［5-7］。

［1］孫靖 .實驗動物學基礎［M］.北京：北京科學技術(shù)出版社，2005.

［2］中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.《實驗動物近交系小鼠、大鼠生化標記檢測法》（GB/T 14927.1—2008）［E］.2008.

［3］Margaret C. Green. Genetic Variants and Strains of the Laboratory Mouse［M］.New York：International Committee on Standardized Genetic Nomenclature formice，1981.

［4］Tatsuji N，Kozaburo E，Takeshi T.ICLAS Manual for Genetic Monitoring of Inbred Mice［M］.Tokyo：University of Tokyo Press，1984.

［5］Milan F，Jan S，Jirina H.Gene polymorphisms of superoxide dismutases and catalase in diabetes mellitus［J］.BMC Med Genet.2008，9：30.

［6］Xia Y，Won S，Du X.Bulk Segregation Mapping of Mutations in Closely Related Strains of Mice［J］.Genetics.2010.

［7］Ahn J，Nowell S，McCann SE.Associations between catalase phenotype and genotype：modification by epidemiologic factors［J］.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2006，15（6）：1217 -22.