榮衛(wèi)靈 ，王 南

1.湖南省東安縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖南東安 425900；2.中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院，湖南長沙 410100

胎膜早破（premature rupture of fetal membranes，PROM）是臨產(chǎn)前胎膜發(fā)生破裂，分為足月前胎膜早破（preterm premature rupture of fetal membranes，PPROM）和足月胎膜早破（term premature rupture of membranes，TPROM）。在所有妊娠中PROM發(fā)生率為2.0%～3.5%，早產(chǎn)合并PROM占30%～40%，但其發(fā)病原因尚不完全明了[1]。宮內(nèi)感染（IAI）是其發(fā)病的最主要原因，占PPROM孕婦的25%～39%[2]。

Galectin-3是半乳糖凝集素家族成員之一，廣泛分布于多種組織，在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、黏附、凋亡方面起重要作用，并參與免疫調(diào)節(jié)[3]。Galectin-3在生殖領(lǐng)域的研究已逐漸被人們重視，但對于Galectin-3在絨毛膜羊膜炎及PROM中所發(fā)揮的作用尚無報道。本研究通過檢測Galectin-3在正常分娩孕婦胎膜及PROM孕婦胎膜中的表達(dá)及其變化，探討Galectin-3在PROM中所發(fā)揮的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

胎膜早破組：選取湖南省東安縣人民醫(yī)院婦產(chǎn)科2009年1月～2010年6月住院分娩的胎膜早破組50例，平均年齡（27.8.±3.1）歲；孕周 31+4～36+6周；其中，足月胎膜早破 26例（足月胎膜早破組），足月前胎膜早破24例（足月前胎膜早破組）。經(jīng)產(chǎn)后病理學(xué)檢測分為絨毛膜羊膜炎組和非絨毛膜羊膜炎組。對照組：選擇同期在湖南省東安縣人民醫(yī)院住院因社會因素剖宮產(chǎn)分娩的非胎膜早破的孕婦30例作為對照組，平均年齡（25.7±2.9）歲，孕 37～41 周。 所有病例均為初產(chǎn)婦，單胎，無內(nèi)外科合并癥及產(chǎn)科并發(fā)癥，近期無外傷和性交等誘因，年齡及孕次差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 胎膜早破診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]主訴陰道流液，pH試紙堿性變色，對可疑病例消毒后放窺陰器檢查見后穹隆有液體或手觸見宮頸口有羊水流出。

1.2.2 組織學(xué)絨毛膜羊膜炎[5]絨毛膜板及羊膜上白細(xì)胞呈彌散性聚集，白細(xì)胞浸潤呈極性分布，中性粒細(xì)胞浸潤每高倍視野5～10個為輕度，11～30個為中度，＞30個為重度。

1.3 標(biāo)本收集及處理

所有產(chǎn)婦在胎盤胎膜娩出后立即直視下剪取距胎膜破口＞2 cm處的全層胎膜組織2塊，大小1 cm×1 cm，生理鹽水清洗表面羊水和血跡，固定于10%福爾馬林中，石蠟包埋，切片備用。

1.4 免疫組化

兔抗人Galectin-3多克隆抗體、免疫組化染色試劑盒SP-9000購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。石蠟切片脫蠟，蒸餾水沖洗3次，3%H2O2覆蓋10 min，滅活內(nèi)源性過氧化物酶，PBS漂洗5 min×3次，用枸櫞酸鈉進(jìn)行抗原修復(fù)20 min，PBS漂洗5 min×3次，滴加10%正常山羊血清孵育30 min，封閉非特異性抗原，滴加兔抗人 Galectin-3抗體（1∶50）37℃孵育2 h，PBS漂洗5 min×3次。滴加羊抗兔二抗37℃孵育15 min，滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素工作液37℃孵育15 min，PBS漂洗5 min×3次，滴加DAB顯色劑顯色，應(yīng)用蘇木素復(fù)染2 min，沖洗，封片。顯微鏡下觀察，照相。

1.5 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

觀察陽性反應(yīng)采用雙盲法，行半定量分析[6]。以光鏡下細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽性。按染色強(qiáng)度評分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；按陽性細(xì)胞所占百分比評分：陰性為0分，陽性細(xì)胞數(shù)≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為 4分。 染色強(qiáng)度與陽性百分比的乘積＞3為免疫反應(yīng)陽性。并按乘積分?jǐn)?shù)分為 4 個等級：-（0，1，2 分）；+（3，4 分）；++（6，8 分）；+++（9，12分），根據(jù)兩位有經(jīng)驗的病理科醫(yī)師雙盲計數(shù)統(tǒng)計，將“-”、“+”判定為陰性，將“++”、“+++”判定為陽性。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

實驗結(jié)果均應(yīng)用統(tǒng)計軟件SPSS 16.0處理，進(jìn)行χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組Galectin-3的表達(dá)情況

Galectin-3蛋白的陽性表達(dá)主要集中在絨毛膜滋養(yǎng)層胞質(zhì)及胞核中，以胞漿為主，呈棕色或黃色，在羊膜層和蛻膜層亦有少量表達(dá)，其在胎膜早破組表達(dá)明顯增強(qiáng)（圖1～2）。

在胎膜早破組與對照組比較，Galectin-3的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；Galectin-3在足月前胎膜早破組與足月胎膜早破組均有表達(dá)，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

2.2 Galectin-3表達(dá)與絨毛膜羊膜炎的關(guān)系

產(chǎn)后對全體孕婦行胎膜病理檢查，其中重度絨毛膜羊膜炎者16例，占20.0%，中度絨毛膜羊膜炎者14例，占17.5%，中重度絨毛膜羊膜炎患者均見于胎膜早破組；輕度絨毛膜羊膜炎者13例，占16.3%，其中胎膜早破組 11例（13.8%），對照組僅有2例（2.5%）。見表2。

與非絨毛膜羊膜炎組比較，Galectin-3在絨毛膜羊膜炎組絨毛膜滋養(yǎng)層、羊膜層和蛻膜層的表達(dá)明顯增加（圖3～4）。同時，隨著絨毛膜羊膜炎的病理分級不同，Galectin-3的表達(dá)的陽性率也不同，且隨著病理炎癥程度的增加，其表達(dá)的陽性率也增加。見表3。

表1 各組Galectin-3的表達(dá)情況

表2 兩組病理檢查結(jié)果比較（例）

3 討論

胎膜早破的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明確，一般認(rèn)為是多因素造成的[7-8]，但在胎膜早破中胎膜局部最基本的病理變化是炎癥和胎膜本身結(jié)構(gòu)改變，炎性反應(yīng)在胎膜早破發(fā)生中的作用越來越受到重視。

Galectin-3是一種β-半乳糖結(jié)合蛋白，主要存在于細(xì)胞質(zhì)中，但也可以在細(xì)胞核、細(xì)胞表面或者細(xì)胞外，其功能具有多樣性[9]?，F(xiàn)已證實Galectin-3參與許多生理和病理過程，包括細(xì)胞生長、細(xì)胞黏附、炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)、腫瘤轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)移及細(xì)胞凋亡。近來的研究表明其在急性炎癥反應(yīng)及固有性免疫的調(diào)節(jié)中作為一種細(xì)胞因子發(fā)揮著重要的作用[10-11]。

表3 Galectin-3的表達(dá)與絨毛膜羊膜炎的關(guān)系

本實驗采用免疫組化的方法檢測胎膜早破組和對照組胎膜中Galectin-3的表達(dá)情況，結(jié)果表明Galectin-3在PROM組胎膜中的表達(dá)明顯高于對照組。且Galectin-3的表達(dá)與絨毛膜羊膜炎有關(guān)，炎癥程度越高，Galectin-3的表達(dá)陽性率越高，表明PROM與絨毛膜羊膜炎密切相關(guān)。

多項研究表明PROM與感染有關(guān)[12]，而Galectin-3正是在免疫調(diào)節(jié)、炎性反應(yīng)中發(fā)揮了重要作用。Galectin-3被認(rèn)為是一種促炎因子，在炎癥的急性期，Galectin-3可能發(fā)揮著減弱細(xì)胞間黏附、促壞死細(xì)胞脫落的作用；而到炎癥晚期，Galectin-3高表達(dá)時，它將促進(jìn)細(xì)胞間細(xì)胞-基質(zhì)間黏附。在炎癥反應(yīng)中，Galectin-3主要在兩個方面扮演了重要的角色：①存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的Galectin-3呈現(xiàn)強(qiáng)大的促炎作用，促進(jìn)炎性細(xì)胞活化，抑制免疫細(xì)胞凋亡，促進(jìn)炎癥反應(yīng)[13]。②在細(xì)胞核高表達(dá)的Galectin-3促進(jìn)細(xì)胞增殖，加速細(xì)胞的損傷修復(fù)[14]。

目前國內(nèi)外尚無有關(guān)Galectin-3表達(dá)與PROM相關(guān)的報道，但筆者通過本實驗證實Galectin-3的陽性表達(dá)與PROM存在一定的相關(guān)性，且Galectin-3的陽性表達(dá)率隨PROM患者絨毛膜羊膜炎炎癥程度的增加而增加。我們推測PROM患者胎膜中Galectin-3表達(dá)增加與白介素、IFN-γ釋放相關(guān)，且Galectin-3表達(dá)的增加促進(jìn)了細(xì)胞間細(xì)胞-基質(zhì)間的黏附，促進(jìn)基質(zhì)金屬蛋白酶的合成，從而降解細(xì)胞外基質(zhì)，使胎膜變薄，導(dǎo)致胎膜破裂的發(fā)生。

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