張愛(ài)武 鞠貴春 薛 軍 鄭 雪

甘露寡糖對(duì)肉鶉腸長(zhǎng)度及腸道菌群的影響

張愛(ài)武 鞠貴春 薛 軍 鄭 雪

選取240只1日齡肉鶉隨機(jī)分成4組，每組設(shè)4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15只肉鶉。其中第1組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧，第2～4組為試驗(yàn)組，在基礎(chǔ)日糧中分別添加0.5%、1.0%、2.0%的甘露寡糖（MOS）。進(jìn)行為期50日齡的飼養(yǎng)，分別于35日齡和50日齡采樣。試驗(yàn)結(jié)果表明，1.0%和2.0%MOS可顯著增加35日齡肉鶉小腸長(zhǎng)度和十二指腸長(zhǎng)度（P＜0.05）。1.0%和2.0%MOS組35日齡肉鶉空腸長(zhǎng)度和回腸長(zhǎng)度顯著長(zhǎng)于對(duì)照組和0.5%MOS組（P＜0.05）。各處理組35 d肉鶉空回比均高于對(duì)照組，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異水平（P＞0.05）。日糧中添加MOS對(duì)50日齡肉鶉腸長(zhǎng)度的影響無(wú)明顯規(guī)律，各處理組之間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。日糧添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可顯著降低35日齡和50日齡肉鶉回腸內(nèi)大腸桿菌的數(shù)量（P＜0.05），隨著日糧MOS添加量的增加，回腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量逐漸下降，且1.0%和2.0%MOS添加組回腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量顯著低于0.5%MOS添加組（P＜0.05）。日糧添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可顯著提高35日齡和50日齡肉鶉回腸內(nèi)乳酸桿菌的數(shù)量（P＜0.05），隨著日糧MOS添加量的增加，回腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量逐漸升高，且2.0%MOS添加組35日齡肉鶉回腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量顯著高于0.5%MOS 添加組（P＜0.05）。

甘露寡糖；肉鶉；腸長(zhǎng)度；腸道菌群

在畜禽日糧中通過(guò)添加抗生素改善動(dòng)物的健康狀態(tài)和提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能已經(jīng)非常普遍，然而長(zhǎng)期使用抗生素會(huì)造成細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，使畜禽免疫力下降，并在動(dòng)物產(chǎn)品及環(huán)境中殘留（鄧敦，2003）。因此，世界上許多國(guó)家已經(jīng)禁止抗生素在日糧中的添加和使用，越來(lái)越多的國(guó)內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行深入研究，期望尋找一些無(wú)污染、無(wú)殘留、促生長(zhǎng)、多功能的綠色飼料添加劑來(lái)代替抗生素的使用（杜冰，2006）。大量研究表明，甘露寡糖（MOS）作為一種新型飼料添加劑可提高家禽及幼齡動(dòng)物日增重及飼料轉(zhuǎn)化率、降低死亡率、增強(qiáng)動(dòng)物免疫力等，并能在較大程度上取代抗生素（孔濤，2006）。MOS是由幾個(gè)甘露寡糖分子或甘露寡糖與葡萄糖通過(guò)糖苷鍵連接組成，20世紀(jì)80年代中后期，隨著微生態(tài)學(xué)理論的發(fā)展，人們對(duì)腸道的功能日趨重視，同時(shí)發(fā)現(xiàn)MOS能選擇性刺激腸道有益菌的生長(zhǎng)繁殖，而不被大部分有害菌利用。受此啟發(fā)，日本首先把這種糖類物質(zhì)開(kāi)發(fā)成飼料添加劑產(chǎn)品，然而由于其價(jià)格昂貴而未受到重視。但是由于MOS具有無(wú)污染、無(wú)殘留、功能奇異而逐步成為人們所期望抗生素替代品的焦點(diǎn)（石寶明，2000）。MOS不像抗生素會(huì)產(chǎn)生藥物殘留，或使動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生耐藥性或引發(fā)二重感染，而是通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性的抑制動(dòng)物體內(nèi)有害菌的增殖，促進(jìn)有益菌的大量繁殖來(lái)達(dá)到促進(jìn)動(dòng)物個(gè)體生長(zhǎng)的目的（盧建軍，1999；韓蘇，1997）。目前所使用的產(chǎn)品是通過(guò)發(fā)酵法從富含MOS的酵母細(xì)胞壁中提取的葡甘露聚糖蛋白復(fù)合物（Dvorak，1998），約含30%的葡萄糖和30%的甘露糖。本試驗(yàn)通過(guò)在日糧中添加MOS來(lái)研究MOS對(duì)肉鶉腸長(zhǎng)度和腸道菌群的影響，以便用來(lái)指導(dǎo)肉鶉生產(chǎn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

甘露寡糖購(gòu)自上海正正科技有限公司。

麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、乳酸菌瓊脂培養(yǎng)基購(gòu)自北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

健康1日齡肉鶉（雌雄各半）240只作為試驗(yàn)動(dòng)物。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)采用單因子隨機(jī)化設(shè)計(jì)，將240只1日齡肉鶉隨機(jī)分成4組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15只肉鶉，其中第一組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧，基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。第2～4組為試驗(yàn)組，在基礎(chǔ)日糧中分別添加0.5%、1%、2%的甘露寡糖，進(jìn)行為期50日齡的飼養(yǎng)試驗(yàn)，分別于35日齡和50日齡采樣。

1.4 飼養(yǎng)管理

在飼養(yǎng)前把動(dòng)物飼養(yǎng)室及其籠具、飲水器、料槽進(jìn)行熏蒸消毒。自由采食、自由飲水，自然光和日光燈相結(jié)合，在肉鶉10日齡后逐漸減少日光燈光照時(shí)間，最后完全停止；保持室內(nèi)溫度在33℃以上，在1周齡后逐漸降低溫度，每3 d降低1℃，最后減至室溫，每日清掃糞便。

1.5 樣品采集及測(cè)定

于35日齡和50日齡時(shí)進(jìn)行屠宰試驗(yàn)，取肉鶉的空腸、回腸、十二指腸進(jìn)行長(zhǎng)度測(cè)量，并計(jì)算空回比。取肉鶉的回腸放在-20℃的冰柜中進(jìn)行冷凍保存，用于微生物測(cè)定。

微生物測(cè)定參照李玲（2003）的測(cè)定方法。將水浴加熱溶解后的培養(yǎng)基分裝到干燥的厭氧管中，每支管裝4.5 ml，趁熱充氮至有氣泡冒出，迅速加塞、加蓋。準(zhǔn)確移取9 ml生理鹽水至厭氧管中，充氮大約 30 s，迅速加塞、加蓋。0.1 MP 滅菌 15～20 min。將樣品流水解凍，準(zhǔn)確、快速稱取1.0 g左右腸內(nèi)容物樣品置于錐形瓶（含9 ml生理鹽水，充氮?dú)猓靹?。?zhǔn)確移取1 ml注入裝有生理鹽水的厭氧管中進(jìn)行稀釋，制成10-2稀釋液。按此操作方法依次進(jìn)行稀釋至10-9，制成不同濃度的樣品稀釋液。各取1 ml的稀釋液，注入平皿中。向大腸桿菌的培養(yǎng)皿中倒入15 ml麥康凱培養(yǎng)基（50℃左右），向乳酸桿菌的培養(yǎng)皿中倒入15 ml乳酸菌瓊脂培養(yǎng)基（50℃左右），搖勻，冷卻。大腸桿菌采用麥康凱培養(yǎng)基37℃有氧培養(yǎng)24 h進(jìn)行大腸桿菌菌落計(jì)數(shù)；乳酸桿菌采用乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基37℃厭氧培養(yǎng)48 h進(jìn)行乳酸桿菌菌落計(jì)數(shù)。根據(jù)菌落形態(tài)、顏色和革蘭氏染色鏡檢結(jié)果進(jìn)行鑒別，用每克腸道內(nèi)容物中細(xì)菌個(gè)數(shù)的對(duì)數(shù)（Log cfu/g）來(lái)表示。

厭氧菌活菌數(shù)量（cfu/g）=計(jì)數(shù)的實(shí)際平均值×稀釋倍數(shù)/取樣量。

1.6 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），并進(jìn)行Duncan's法多重比較，取P＜0.05作為差異顯著性的臨界值，試驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示（Mean±SE）。

2 結(jié)果

2.1 甘露寡糖對(duì)35日齡肉鶉腸長(zhǎng)度的影響（見(jiàn)表2）

由表2可以看出，在日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS對(duì)35日齡肉鶉腸長(zhǎng)度有一定影響，1.0%和2.0%MOS組小腸長(zhǎng)度顯著長(zhǎng)于對(duì)照組（P＜0.05），而0.5%組和對(duì)照組之間小腸長(zhǎng)度沒(méi)有顯著差異（P＞0.05）。十二指腸長(zhǎng)度的變化與小腸長(zhǎng)度變化一致，1.0%和2.0%MOS組十二指腸長(zhǎng)度顯著長(zhǎng)于對(duì)照組（P＜0.05），而0.5%組和對(duì)照組之間十二指腸長(zhǎng)度沒(méi)有顯著差異（P＞0.05）。1.0%和2.0%MOS組空腸長(zhǎng)度和回腸長(zhǎng)度顯著長(zhǎng)于對(duì)照組和0.5%MOS組（P＜0.05）。各處理組空回比均高于對(duì)照組，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異水平（P＞0.05）。

表2 甘露寡糖對(duì)35日齡肉鶉腸長(zhǎng)度及空回比的影響

2.2 甘露寡糖對(duì)50日齡肉鶉腸長(zhǎng)度的影響（見(jiàn)表3）

表3 甘露寡糖對(duì)50日齡肉鶉腸長(zhǎng)度及空回比的影響

由表3可以看出，在日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS對(duì)50日齡肉鶉腸長(zhǎng)度的影響無(wú)明顯規(guī)律，各處理組之間無(wú)顯著差異（P＞0.05），有增加空腸長(zhǎng)度和回腸長(zhǎng)度的趨勢(shì)，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著水平（P＞0.05）。小腸長(zhǎng)度和十二指腸長(zhǎng)度隨著日糧中MOS添加水平的增加而呈現(xiàn)先增高后降低然后又升高的趨勢(shì)，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著水平（P＞0.05）。日糧添加0.5%、1.0%、2.0%MOS對(duì)50日齡肉鶉空回比有升高的趨勢(shì)，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著水平（P＞0.05）。

2.3 甘露寡糖對(duì)35日齡肉鶉腸道菌群數(shù)量的影響（見(jiàn)表4）

表4 甘露寡糖對(duì)35日齡肉鶉回腸中大腸桿菌、乳酸桿菌數(shù)量的影響（Log cfu/g）

從表4中可以看出，在日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可以使35日齡肉鶉回腸中大腸桿菌數(shù)量減少，乳酸桿菌數(shù)量增加。日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可顯著降低回腸內(nèi)大腸桿菌的數(shù)量（P＜0.05），隨著日糧中MOS添加量的增加，回腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量逐漸下降，且1.0%和2.0%MOS添加組回腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量顯著低于0.5%MOS添加組（P＜0.05）。日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可顯著升高回腸內(nèi)乳酸桿菌的數(shù)量（P＜0.05），隨著日糧MOS添加量的增加，回腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量逐漸升高，且2.0%MOS添加組回腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量顯著高于0.5%MOS添加組（P＜0.05）。

2.4 甘露寡糖對(duì)50日齡肉鶉腸道菌群數(shù)量的影響（見(jiàn)表5）

表5 甘露寡糖對(duì)50日齡肉鶉回腸中大腸桿菌、乳酸桿菌數(shù)量的影響（Log cfu/g）

從表5中可以看出，在日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可以使50日齡肉鶉回腸中大腸桿菌數(shù)量減少，乳酸桿菌數(shù)量增加。日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可顯著降低回腸內(nèi)大腸桿菌的數(shù)量（P＜0.05），隨著日糧MOS添加量的增加回腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量逐漸下降，且1.0%和2.0%MOS添加組回腸內(nèi)大腸桿菌數(shù)量顯著低于0.5%MOS添加組（P＜0.05）。日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可顯著升高回腸內(nèi)乳酸桿菌的數(shù)量（P＜0.05），隨著日糧MOS添加量的增加回腸內(nèi)乳酸桿菌數(shù)量逐漸升高。

3 討論

空腸、回腸的主要功能是消化和吸收食物?？漳c與回腸相比，空腸是消化吸收食物的主要場(chǎng)所，所以空回比值越大，消化吸收能力越強(qiáng)，生長(zhǎng)性能越好。本試驗(yàn)結(jié)果表明，不同水平MOS對(duì)不同日齡肉鶉腸道長(zhǎng)度都有一定的影響，1.0%和2.0%MOS可顯著增長(zhǎng)35日齡肉鶉各段腸長(zhǎng)度。日糧中添加MOS有升高50日齡肉鶉空腸長(zhǎng)度和回腸長(zhǎng)度的趨勢(shì)，50日齡肉鶉小腸長(zhǎng)度和十二指腸長(zhǎng)度隨著日糧中MOS添加水平的增加而呈現(xiàn)先增高后降低然后又升高的趨勢(shì)。日糧添加MOS對(duì)35、50日齡肉鶉空回比均有升高的趨勢(shì)，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著水平。MOS多添加于單胃幼齡畜禽日糧中，幼齡動(dòng)物添加MOS的效果較成年動(dòng)物明顯（農(nóng)業(yè)大詞典編輯委員會(huì)，1998），這與本試驗(yàn)結(jié)果一致，本試驗(yàn)日糧中添加MOS對(duì)35日齡肉鶉腸各段長(zhǎng)度有影響，而對(duì)50日齡肉鶉未見(jiàn)顯著影響。這也印證了動(dòng)物對(duì)寡糖具有一定的適應(yīng)性（王鏡巖，2002）。許多試驗(yàn)結(jié)果表明，補(bǔ)飼MOS可提高禽類育雛期和生長(zhǎng)期的生長(zhǎng)性能（毛勝勇，2000；杜晉平，2004），由本試驗(yàn)結(jié)果得出，MOS對(duì)禽類生長(zhǎng)的促進(jìn)作用不是通過(guò)增加小腸的長(zhǎng)度從而增加小腸吸收的總面積來(lái)實(shí)現(xiàn)促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育的目的，主要應(yīng)該是通過(guò)調(diào)節(jié)腸道內(nèi)菌群的結(jié)構(gòu)來(lái)起作用的。隨著微生態(tài)學(xué)理論的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)，動(dòng)物腸道中的正常菌群是動(dòng)物機(jī)體重要的非特異性防御屏障，正常菌群彼此之間保持著一種動(dòng)態(tài)平衡，與宿主拮抗、免疫、營(yíng)養(yǎng)、腫瘤、急性和慢性感染等都有非常密切的聯(lián)系（史彬林，2005；石寶明，2000）。因此，動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)家已考慮通過(guò)調(diào)節(jié)動(dòng)物腸道微生物區(qū)系來(lái)改善動(dòng)物機(jī)體的健康狀況、增強(qiáng)機(jī)體潛在的抵抗疾病的能力。在動(dòng)物消化道內(nèi)大約有100種以上不同的細(xì)菌，根據(jù)對(duì)動(dòng)物的影響，可將之分為有益菌（如雙歧桿菌屬、乳酸桿菌屬等）、有害菌（如大腸桿菌屬、葡萄球菌屬等）及介于兩者之間的兼性細(xì)菌（如擬桿菌屬、鏈球菌屬）（戴德淵，2005）。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在日糧中添加0.5%、1.0%、2.0%MOS可以使35日齡和50日齡肉鶉回腸中大腸桿菌數(shù)量減少，乳酸桿菌數(shù)量增加。表明MOS能調(diào)控動(dòng)物胃腸道微生態(tài)環(huán)境，MOS進(jìn)入腸道內(nèi)可作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被動(dòng)物腸道內(nèi)固定的有益菌消化利用，起到促進(jìn)有益菌的生長(zhǎng)和繁殖，抑制有害菌對(duì)腸壁的粘附和定植，維持正常的消化道環(huán)境的作用。MOS能促進(jìn)雙歧桿菌、干枯乳桿菌、嗜酸乳桿菌、德?tīng)柌紖慰巳闂U菌等有益菌的生長(zhǎng)，而對(duì)于沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、肉毒梭狀芽孢桿菌、生腐梭狀芽孢桿菌等病原菌卻能起到很好的抑制作用（Peter等，1998）。石寶明（2000）報(bào)道，在日糧中添加MOS能通過(guò)改善腸道內(nèi)環(huán)境，顯著降低大腸桿菌數(shù)，促進(jìn)有益的乳酸菌的生長(zhǎng)。這與本試驗(yàn)結(jié)果相一致。

4 結(jié)論

1.0%和2.0%MOS可顯著增長(zhǎng)35日齡肉鶉各段腸長(zhǎng)度，而對(duì)50日齡肉鶉各腸段長(zhǎng)度沒(méi)有影響。

MOS可促進(jìn)肉鶉腸道有益菌生長(zhǎng)，隨日糧MOS添加量的增加，乳酸桿菌數(shù)量升高；MOS可抑制腸道有害菌生長(zhǎng)，隨日糧MOS添加量的增加大腸桿菌數(shù)量降低。

日糧中添加1.0%和2.0%MOS效果最好，鑒于添加2.0%MOS成本高的問(wèn)題，建議在肉鶉日糧中添加1.0%MOS，即可達(dá)到添加效果。

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Effect of mannan-oligosaccharides on intestinal length and ileum flora in quail

Zhang Aiwu,Ju Guichun,Xue Jun,Zheng Xue

Two hundred and forty newly hatched 1 day-old quails were randomly divided into 4 groups,each group with four replications,and each replication contained 15 quails.The first group was used as control and fed with basal diet.The rest of the groups were experimental groups,0.5%,1.0%,2.0%of mannan oligosaccharides（MOS）were added to groups 2,3 and 4 respectively for 50 days.Results indicated that addition of 1.0%and 2.0%MOS into the control diet significantly increased small intestinal length and duodenum length（P＜0.05）in 35 d quails.Jejunum length and ileum length of 35 d quails fed 1.0%and 2.0%MOS were significantly longer than those of quails fed 0.0%and 0.5%MOS（P＜0.05）.There were no significant difference in jejunum/ileum ratio of 35 d quails （P＞0.05）.No difference was observed in intestinal length of 50 d quails（P＞0.05）.Addition of MOS into the control diet significantly decreased the colibacillus content（P＜0.05）and increased the lactobacillus content（P＜0.05）of 35 d and 50 d quails.

mannan-oligosaccharide；quail；intestinal length；intestinal flora

S816.7

A

1001-991X（2011）10-0025-04

張愛(ài)武，吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材學(xué)院，博士，副教授，130118，吉林省長(zhǎng)春市新城大街2888號(hào)。

鞠貴春、鄭雪，單位及通訊地址同第一作者。

薛軍，中國(guó)藥材集團(tuán)公司。

2011-01-24

（編輯：高 雁，snowyan78@163.com）