張新勇,劉麗芳,徐中南,張來芳,王宇新,霍立茹

(1.南京長(zhǎng)澳醫(yī)藥科技有限公司,江蘇南京 210038;2.中國(guó)藥科大學(xué);3.連云港正大天晴制藥有限公司)

復(fù)方止咳清肺膠囊處方源自我國(guó)明代醫(yī)學(xué)典籍《韓氏醫(yī)通》經(jīng)典方“三子養(yǎng)親湯”三子養(yǎng)親湯組方簡(jiǎn)潔而嚴(yán)謹(jǐn),方中白芥子溫肺理氣,利膈消痰;萊菔子降氣行痰,消食導(dǎo)滯;紫蘇子降氣祛痰,止咳平喘。三藥皆有行氣消痰之功,相互配合,相得益彰。為了更好地發(fā)揮其止咳清肺、化寒祛痰的治療效果,我課題組按照現(xiàn)行中藥六類新藥的要求對(duì)其工藝和質(zhì)量進(jìn)行了深入研究,將其制成劑量小、藥效高、易于服用、攜帶方便的現(xiàn)代新制劑—膠囊劑,已經(jīng)申報(bào)并獲得了國(guó)家藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的新藥證書?，F(xiàn)將其制劑中的主要有效成分的含量測(cè)定方法研究報(bào)道如下。

在本品中白芥子和萊菔子的原植物來源分別為十字花科的 Sinapis a lba L.,Raphanus sa tivus L.,這兩種藥材中均含有芥子堿硫氰酸鹽[1-3],而且含量較高,該成分據(jù)報(bào)道有降壓、抗炎、抗腹瀉活性[1,4]。所以選擇測(cè)定本品芥子堿硫氰酸鹽的含量以控制本品的內(nèi)在質(zhì)量。研究?jī)?nèi)容如下。

1 儀器與藥品

儀器:日本島津 LC-6A高效液相色譜儀惠普HP3395A記錄儀

對(duì)照品的來源及純度:芥子堿硫氰酸鹽自行制備和純化,純度大于 98%(HPLC圖譜見下圖)。

藥品:磷酸二氫鉀、甲醇均為分析純,乙腈為色譜純 (進(jìn)口)。

2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

用 Alltech pheayl柱,乙腈 -0.08 mol/L磷酸二氫鉀溶液 (15∶85)為流動(dòng)相。檢測(cè)波長(zhǎng) 326 nm。理論塔板數(shù)按芥子堿峰計(jì)算為 3 747,芥子堿峰半峰寬:0.496,雜質(zhì)峰半峰寬:0.363,得分離度為 2.8。

3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密稱取芥子堿硫氰酸鹽對(duì)照品 (五氧化二磷干燥器中減壓干燥 48 h)2.14 m g,用 0.08 mol/L磷酸二氫鉀溶液定容至 10 mL,精密吸取 2μL、4μL、5 μL、6μL、10μL,注入液相色譜儀,用上述色譜條件測(cè)定。以進(jìn)樣量 (μg)為橫坐標(biāo),測(cè)得的對(duì)照品吸收度積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 (見圖1),并計(jì)算得過原點(diǎn)的線性回歸方程:A=19275276.8C-392085.39,r=0.999 7。表明在質(zhì)量 0.428～2.140 μg之間有良好的線性關(guān)系。

圖1 復(fù)方止咳清肺膠囊有效成分含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

4 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液 (0.075 m g/mL)20μL注入液相色譜儀,同上法測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 精密度試驗(yàn)

5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取前項(xiàng)試液的對(duì)照品溶液,分別在 0,1,2,3,5,7、8小時(shí)后測(cè)定,進(jìn)樣 20μL。結(jié)果見表2。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)

結(jié)果表明其積分值在 8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

6 提取方法考察

(1)考察了超聲提取與用索氏提取器回流提取兩種方法,結(jié)果表明,超聲提取 2 h,可以將被測(cè)成分提取完全,而索氏提取器回流提取則要 6 h以上。故以超聲提取 2 h為佳。

(2)考察了同一樣品用甲醇超聲提取 1,2,3,4次 (200V,250W)的比較,結(jié)果表明用 50 mL甲醇超聲提取 3次可以將待測(cè)成分提取完全。

表3 提取方法考察

7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品 5份,按樣品測(cè)定項(xiàng)下的方法制備樣品液,進(jìn)樣 20μL,計(jì)算含量。結(jié)果見表4。

表4 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

8 樣品測(cè)定

取本品內(nèi)容物適量,干燥至恒重,研細(xì)后過 60目篩,取約 0.2 g,精密稱定,置 100 mL三角瓶中,加甲醇 50 m L超聲提取 2 h后過濾,并用少量甲醇洗滌濾器,洗液并入濾液中,蒸干甲醇,殘?jiān)?0.08 mo l/L磷酸二氫鉀溶液溶解并定容至 50 mL量瓶中,搖勻,用微孔濾膜 (0.45μm)濾過,取續(xù)濾液,進(jìn)樣 20μL,依法測(cè)定,計(jì)算結(jié)果見表5。

表5 成藥中芥子堿的含量

中試樣品中所采用的白芥子藥材購(gòu)于連云港,芥子堿硫氰酸鹽含量為 0.2%;萊菔子藥材購(gòu)于連云港,芥子堿含量為 0.1%。

9 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取樣品 (含量為 1.352%)0.1 g加入精密稱定的芥子堿硫氰酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品 1 m g,置 100 mL三角瓶中,同法制備供試品溶液,進(jìn)樣 20μL,同法測(cè)定計(jì)算,結(jié)果見表6。

表6 回收率實(shí)驗(yàn)

10 關(guān)于成藥中芥子堿的含量限度

根據(jù)我們測(cè)定的幾批白芥子、萊菔子藥材的含量,再結(jié)合所測(cè)定成藥中芥子堿硫氰酸鹽的含量情況,故暫定復(fù)方止咳清肺膠囊每粒含芥子堿以芥子堿硫氰酸鹽 (C16H24NO5·SCN)計(jì)算,不得少于2.4 m g。

[1] 李 書,暢行若.白芥子化學(xué)成分的研究[J].陜西新醫(yī)藥,1983,12(9):57-58.

[2] 王維蘭,朱 進(jìn),李鐘大,等.萊菔子降壓活性成分的研究[J].中草藥,1987,18(8):5-7.

[3] 徐國(guó)鈞,徐珞珊,金蓉鸞,等.中國(guó)藥材學(xué):下冊(cè) [M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,1996:1224-1226.

[4] 張明發(fā),沈雅琴.芥子堿的抗炎和抗腹瀉作用[J].中藥藥理與臨床,1996(1):29-31.