陳青竹，蔡永青，張 成，戴 青，劉松青

（第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科，重慶市 400038）

平肝顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

陳青竹＊，蔡永青，張 成，戴 青，劉松青

（第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科，重慶市 400038）

目的：建立平肝顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜（TLC）法對(duì)方中半枝蓮進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法對(duì)制劑中野黃芩苷進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：TLC斑點(diǎn)清晰、分離度好、專屬性強(qiáng)，陰性對(duì)照無(wú)干擾；野黃芩苷的進(jìn)樣量在10～40μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系（r＝0.9999），平均回收率為98.16%，RSD＝2.88%（n＝6）。結(jié)論：所建標(biāo)準(zhǔn)能有效控制平肝顆粒的質(zhì)量。

平肝顆粒；半枝蓮；野黃芩苷；薄層色譜法；高效液相色譜法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

平肝顆粒是第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院院內(nèi)制劑，臨床應(yīng)用20余年，系由半枝蓮等3味藥材組成的復(fù)方固體制劑，具有清熱解毒、除濕利膽、活血化瘀的功效，用于治療急、慢性肝炎重癥黃疸者與淤膽型平肝患者。野黃芩苷為半枝蓮的有效成分，故選其作為薄層色譜（TLC）鑒別和含量測(cè)定的指標(biāo)，以控制本制劑的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

聚酰胺薄膜（薄層層析用，浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠）；Agilent Technologics 1200series高效液相色譜（HPLC）儀（美國(guó)Agilent公司）。

平 肝 顆 粒（ 批 號(hào) ：20091223、20091228、20100105、20100108、20100113、20100119，規(guī)格：每袋9g）及缺半枝蓮陰性樣品（批號(hào)：20091229）均由第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院制劑室自制；野黃芩苷對(duì)照品和半枝蓮對(duì)照藥材（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為121293-200402、110842-200605）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 半枝蓮的TLC鑒別

取3批（批號(hào)：20091223、20091228、20100105）平肝顆粒各9g，加甲醇50mL，超聲（60kHz）40min，甲醇補(bǔ)足失重，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，用稀鹽酸調(diào)pH值至2～3，用乙酸乙酯萃取2次，每次10mL，合并乙酸乙酯溶液；用水萃取乙酸乙酯溶液2次，每次20mL，合并水溶液，用稀鹽酸調(diào)pH值至2～3；再用乙酸乙酯萃取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯溶液，將乙酸乙酯溶液蒸干，加2mL甲醇溶解，即得供試品溶液。稱取半枝蓮對(duì)照藥材0.3g，同法制得對(duì)照藥材溶液。取缺半枝蓮藥材的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液。取野黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制得每1mL含0.1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。按TLC法[1]試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各3μ L，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（4∶3∶1∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%三氯化鐵乙醇溶液，日光下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照品、對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無(wú)干擾。半枝蓮的TLC見(jiàn)圖1。

3 野黃芩苷含量測(cè)定

3.1 色譜條件

圖1 半枝蓮的TLC1.陰性對(duì)照；2.半枝蓮對(duì)照藥材；3～5.供試品；6.野黃芩苷對(duì)照品Fig1 TLC of Lobelia chinensis1.negative control；2.Herba Lobeliae Chinensis reference substance；3-5.test samples；6.scutellarin control

色譜柱：DiamonsiL鉆石C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-乙酸-水（15∶5∶80）；流速：1.2mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：335nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

3.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取野黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制得每1mL含0.1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.3 供試品溶液的制備

稱取平肝顆粒0.20g，加入70%甲醇50mL，超聲（60kHz）40min，70%甲醇補(bǔ)足失重，過(guò)濾，取續(xù)濾液1.5mL離心（13000r·min-1）5min，即得。

3.4 陰性對(duì)照溶液的制備

取缺半枝蓮藥材的陰性樣品，按“3.3”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。

3.5 方法專屬性試驗(yàn)

分別吸取“3.2”、“3.3”、“3.4”項(xiàng)下溶液各10μL，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果，供試品色譜中，在與野黃芩苷對(duì)照品色譜相同的保留時(shí)間處有色譜峰出現(xiàn)，與其他組分能達(dá)到基線分離；陰性對(duì)照無(wú)干擾。色譜見(jiàn)圖2。

圖2 高效液相色譜圖A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性對(duì)照；1.野黃芩苷Fig2 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；C.negative control；1.scutellarin

3.6 線性關(guān)系考察

精密稱取野黃芩苷對(duì)照品10.00mg，置于100mL容量瓶中，加入70%甲醇溶液定容，得100μg·mL-1的溶液。精密量取上述溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0mL，置于10mL容量瓶中，70%甲醇定容，搖勻，即得。分別進(jìn)樣10μL，以進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y＝29.816X－3.7763（r＝0.9999）。結(jié)果表明，野黃芩苷進(jìn)樣量在10～40μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批樣品適量，照“3.3”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定。結(jié)果，RSD＝1.80%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

3.8 精密度試驗(yàn)

精密稱取野黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制得每1mL含20μg的溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定6次。結(jié)果，RSD＝0.83%（n＝6），表明儀器精密度良好。

3.9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的平肝顆粒6份，精密稱定，分別精密加入一定量的野黃芩苷對(duì)照品溶液，按“3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab1 Results of recovery tests（n＝6）

3.10 樣品含量測(cè)定結(jié)果

取6批平肝顆粒（批號(hào)：20091223、20091228、20100105、20100108、20100113、20100119）適量，各3份，分別按“3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照上述色譜條件測(cè)定含量。結(jié)果，6批樣品含量分別為1.1728、1.1636、1.1787、1.1326、1.1452、1.1812mg·g-1，平均含量為1.16mg·g-1。按其80%計(jì)算，本品每袋含野黃芩苷不得少于8.37mg。

4 討論

TLC鑒別項(xiàng)下供試品溶液的制備中，比較了液-液萃取[2]、索氏提取[1]、固相萃取等方法。結(jié)果表明，液-液萃取干擾較小、斑點(diǎn)清晰且簡(jiǎn)便、快捷，故采用液-液萃取方法制備供試品溶液。

由于野黃芩苷與黃芩苷結(jié)構(gòu)相似，故在黃芩苷TLC鑒別用的展開(kāi)劑[3]基礎(chǔ)上進(jìn)行調(diào)整，最終得到分離效果較好的展開(kāi)劑乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（4∶3∶1∶17）。

含量測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液的制備過(guò)程中，為了保證樣品中野黃芩苷充分提取，分別對(duì)不同濃度的提取溶劑和不同超聲處理時(shí)間進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明，本品用70%甲醇為溶劑，超聲處理時(shí)間為40min，提取效果好。

流動(dòng)相考察了乙腈-水-乙酸、甲醇-水-乙酸、乙腈-水-磷酸、乙腈-水-磷酸二氫鉀等，發(fā)現(xiàn)乙腈-水-乙酸的保留時(shí)間短、分離度較高、峰形好，故最終選擇流動(dòng)相為乙腈-水-乙酸（15∶80∶5）。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄31、77.

[2] 陳冬利，龍 洪.熱炎寧顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2009，15（2）：723.

[3] 苗明三，李振國(guó).現(xiàn)代實(shí)用中藥質(zhì)量控制技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：872.

Quality Standard of Pinggan Granules

CHEN Qing-zhu，CAI Yong-qing，ZHANG Cheng，DAI Qing，LIU Song-qing
（Dept.of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Third Military Medical University，Chongqing 400038，China）

OBJECTIVE：To establish the quality standard of Pinggan granules.METHODS：TLC was employed to identifyLobelia chinensis，and the content of scutellarin in Pinggan granules was determined by HPLC.RESULTS：TLC spots were clear，well-separated and specific without interference from negative control.The linear range of scutellarin was 10～40μg（r＝0.9999）with an average recovery of 98.16%（RSD＝2.88%，n＝6）.CONCLUSION：Established standard is suitable for the quality control of Pinggan granules.

Pinggan granules；Lobelia chinensis；Scutellarin；TLC；HPLC；Quality standard

R284.2；R283.627

A

1001-0408（2011）19-1802-02

＊藥師。研究方向：新藥研發(fā)。電話：023-68765991。E-mail：chenqingzhu1113@163.com

2010-05-12

2010-08-20）