王曉飛，葛海生，于玲，柴江平

（1.中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)藥品儀器檢驗(yàn)所，北京市 102613；2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京市 100053）

柴辛鼻敏康顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王曉飛1＊，葛海生1，于玲1，柴江平2

（1.中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)藥品儀器檢驗(yàn)所，北京市 102613；2.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門醫(yī)院，北京市 100053）

目的：建立柴辛鼻敏康顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜（TLC）法對(duì)方中柴胡、細(xì)辛進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法對(duì)芍藥苷進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：TLC斑點(diǎn)清晰、易于識(shí)別、重復(fù)性好；芍藥苷進(jìn)樣量在0.512～15.360μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系（r＝0.9998），平均回收率為99.87%，RSD＝0.97%（n＝6）。結(jié)論：該質(zhì)量控制方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度高、專屬性強(qiáng)，可有效控制柴辛鼻敏康顆粒的質(zhì)量。

柴辛鼻敏康顆粒；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；高效液相色譜法；芍藥苷

柴辛鼻敏顆粒是由細(xì)辛、枳殼、川芎、赤芍等多味中藥加工而成的中藥顆粒制劑，臨床用于治療過(guò)敏性鼻炎，療效顯著。為保證和控制該制劑的質(zhì)量，本試驗(yàn)建立了方中柴胡、細(xì)辛的薄層色譜（TLC）定性鑒別方法，采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定制劑中芍藥苷的含量，方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度高、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

HP1050HPLC儀及其色譜工作站（美國(guó)惠普公司）；TLC半自動(dòng)點(diǎn)樣儀（瑞士Camag公司）。

柴胡皂苷a、芍藥苷對(duì)照品和柴胡、細(xì)辛對(duì)照藥材（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)分別為110777-200507、110736-200703、120992-200504、121204-200803）；硅膠G薄層板（青島海洋化工廠，批號(hào)：20100108）；柴辛鼻敏康顆粒（批號(hào)：20100513、20100711、20100609）及其相應(yīng)陰性樣品均由中國(guó)人民武裝警察部隊(duì)藥品儀器檢驗(yàn)所自制；乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純；。

2 定性鑒別[1]

2.1 柴胡的TLC鑒別

取本品約5g，加乙醇30mL，超聲處理20min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20mL，合并提取液，用氨試液洗滌2次，每次20mL，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液；另取柴胡對(duì)照藥材1.5g，加水30mL，加熱回流1h，放冷，濾過(guò)，自“用水飽和正丁醇”起，照上述方法制成對(duì)照藥材溶液；另取柴胡皂苷a對(duì)照品適量，加甲醇制成濃度為1mg·mL-1的柴胡皂苷a對(duì)照品溶液；取不含柴胡藥材的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。吸取上述4種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（65∶35∶10）10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈（365nm）下檢視。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無(wú)干擾。柴胡的TLC見(jiàn)圖1。

2.2 細(xì)辛的TLC鑒別

取本品10g，加甲醇50mL，超聲處理30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液；另取細(xì)辛對(duì)照藥材0.5g，加甲醇10mL，同法制成對(duì)照藥材溶液；取不含細(xì)辛藥材的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照溶液。吸取上述3種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（3∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。結(jié)果，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；陰性對(duì)照無(wú)干擾。細(xì)辛的TLC見(jiàn)圖2。

圖1 柴胡的TLC1.陰性對(duì)照；2.柴胡皂苷a對(duì)照品；3.柴胡對(duì)照藥材；4~6.供試品Fig1 TLC of Bupleuri Radix1.negative control；2.saikosaponin A control；3.Bupleuri Radix reference substance；4-6.samples

圖2 細(xì)辛的TLC1.陰性對(duì)照；2.細(xì)辛對(duì)照藥材；3～5.供試品Fig2 TLC of Asari Radix Et Rhizoma1.negative control；2.Radix Et Rhizoma Asarireference substance；3-5.test samples

3 芍藥苷含量測(cè)定

3.1 色譜條件

色譜柱：SHISEIDO ODS C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸溶液（20∶80）；檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm；流速：1.0mL·min-1；柱溫：30℃。

3.2 溶液的制備

3.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取60℃減壓干燥5h的芍藥苷對(duì)照品約12.5mg，置于25mL棕色量瓶中，加甲醇適量，超聲使溶解，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，得濃度約為0.5mg·mL-1的對(duì)照品溶液。

3.2.2 供試品溶液 精密稱取本品約2g，置于50mL錐形瓶中，精密加甲醇25mL，稱重，80℃加熱回流1h，放冷，稱重，用甲醇補(bǔ)足失重，濾過(guò)，續(xù)濾液再用濾膜（0.45μm）濾過(guò)，即得。

3.2.3 陰性對(duì)照溶液 取不含赤芍的陰性樣品，按“3.2.2”項(xiàng)下方法操作，即得。

3.3 專屬性考察

精密吸取陰性對(duì)照溶液、對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL，注入HPLC儀，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，供試品在與芍藥苷對(duì)照品色譜相同保留時(shí)間處有相同的色譜峰，保留時(shí)間分別為16.26、16.38min；陰性對(duì)照溶液在相應(yīng)位置處無(wú)干擾峰，方法專屬性良好。色譜見(jiàn)圖3。

3.4 線性關(guān)系考察

精密量取對(duì)照品溶液（0.512mg·mL-1）1、5、10、15、20、25、30μL，注入HPLC儀，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄芍藥苷峰面積。以峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，芍藥苷的進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y＝1132.5X+611.21（r＝0.9998）。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量在0.512～15.360μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

3.5 精密度試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品溶液（0.512mg·mL-1）適量，按“3.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量為10μL，記錄芍藥苷峰面積。結(jié)果，RSD＝0.61%（n＝6），表明儀器精密度良好。

3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批（批號(hào)：20100711）樣品適量，共6份，分別按“3.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，精密量取10μL，注入HPLC儀，照“3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，按芍藥苷含量計(jì)算。結(jié)果，RSD＝1.17%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取同一批（批號(hào)：20100711）樣品適量，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，于室溫放置0、2、4、6、8、10、12h 后分別進(jìn)樣10μL，照“3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以芍藥苷峰面積積分值計(jì)算。結(jié)果，RSD＝0.57%（n＝7），表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

3.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品（批號(hào)：20100711，含量：9.66mg·g-1）約1g，共6份，精密稱定，分別置于50mL錐形瓶中，精密加入芍藥苷對(duì)照品溶液（6.22mg·mL-1）各1mL，再精密加入甲醇25mL，按“3.2.2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液。分別吸取該供試品溶液10μL，注入HPLC儀，測(cè)定芍藥苷含量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab1 Results of recovery tests（n＝6）

3.9 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，分別按“3.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照“3.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算芍藥苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab2 Contents determination results of samples（n＝3）

4 討論

本試驗(yàn)對(duì)方中主要成分細(xì)辛、柴胡采用TLC法進(jìn)行定性鑒別，色譜斑點(diǎn)明顯、豐富，分離效果較好，專屬性強(qiáng)，可用于該制劑的定性鑒別。

試驗(yàn)中，取相同批號(hào)的樣品，分別用甲醇、乙醇、70%甲醇、70%乙醇為溶劑考察了加熱回流1h、超聲處理1h等提取方法。結(jié)果，由于樣品含糖量較高，用70%甲醇、70%乙醇為提取溶劑時(shí)，樣品難以過(guò)濾，故不作選擇。以測(cè)得芍藥苷的含量為指標(biāo)比較，采用以甲醇加熱回流1h的方法，提取充分，效果最佳。

在色譜條件的選擇中，對(duì)不同流動(dòng)相[2～5]和2005年版《中國(guó)藥典》收載的“赤芍”[1]項(xiàng)下芍藥苷含量測(cè)定流動(dòng)相，以及不同的柱溫條件進(jìn)行了篩選，結(jié)果以流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液（20∶80）、柱溫為30℃時(shí)，芍藥苷與雜質(zhì)峰的分離效果較理想，理論板數(shù)以芍藥苷峰計(jì)算不低于3000，且方法簡(jiǎn)單、易操作，可有效控制柴辛鼻敏康顆粒的質(zhì)量。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].2005年版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄31、109.

[2] 岳 敏，毛彥杰，谷學(xué)新.高效液相色譜法測(cè)定千金止帶丸中芍藥苷的含量[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2005，21（2）：167.

[3] 毛曉敏，張小波，陳小清，等.HPLC同時(shí)測(cè)定十二烏雞白鳳丸中芍藥苷、阿魏酸和丹皮酚含量[J].中成藥，2008，30（5）：678.

[4] 李福如，繆 婧，顧海琳，等.清腦寧顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)藥業(yè)，2010，19（9）：27.

[5] 朱 偉，王學(xué)美.黃芪劑量對(duì)補(bǔ)陽(yáng)還五湯中芍藥苷、阿魏酸含量的影響.[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2006，12（3）：11.

Quality Standard of Chaixin Biminkang Granules

WANG Xiao-fei，GE Hai-sheng，YU Ling
（Institute for Drug Control，Chinese People’s Armed Police Forces，Beijing 102613，China）
CHAI Jiang-ping
（Guang’anmen Hospital，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100053，China）

OBJECTIVE：To establish the quality standards of Chaixin biminkang granules.METHODS：TLC was adopted to identify Bupleuri Radix and Radix Et Rhizoma.HPLC method was used to test the content of paeoniflorin.RESULTS：TLC spots were clear，distinguished and reproducible.The linear range of paeoniflorin was 0.512～15.360μg（r＝0.9998）with an average recovery of 99.87%（RSD＝0.97%，n＝6）.CONCLUSION：The method is simple，precise and specific and has good effect on quality control of Chaixin biminkang granules.

Chaixin biminkang granule；Quality standard；TLC；HPLC；Paeoniflorin

R284.2；R283.627

A

1001-0408（2011）19-1800-03

＊主管藥師，碩士。研究方向：藥物分析。電話：010-61226666-78412。E-mail：wangxiaofei1317@163.com

book=1802,ebook=435

2010-09-03

2010-11-12）