劉沁，陳建偉，武露凌，李祥

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南京市 210046；2.江蘇省中藥炮制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京市 210029；3.江蘇省體育科學(xué)研究所，南京市 210014）

斑蝥炮制前后脂肪酸成分的GC-MS分析Δ

劉沁1＊，陳建偉1，2#，武露凌3，李祥1，2

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南京市 210046；2.江蘇省中藥炮制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，南京市 210029；3.江蘇省體育科學(xué)研究所，南京市 210014）

目的：分析斑蝥炮制前后脂肪酸組成。方法：石油醚提取斑蝥脂肪油，甲酯化處理后采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析化合物組成，用峰面積歸一化法確定各成分相對含量。結(jié)果：從炮制前后的斑蝥脂肪油中共分離鑒定出10種脂肪酸成分，脂肪酸組成以油酸、硬脂酸、亞油酸為主。結(jié)論：炮制對斑蝥脂肪酸組成影響不大。本試驗(yàn)可為斑蝥炮制前后的成分研究提供理論依據(jù)。

斑蝥；炮制；脂肪酸；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)

斑蝥（Mylabris）為昆蟲綱鞘翅目芫菁科昆蟲南方大斑蝥Mylabris phalerataPallas或黃黑小斑蝥Mylabris cichoriiLinnaeus的干燥體，為臨床常用中藥[1]。斑蝥具有破血消蝥、攻毒蝕瘡、引赤發(fā)泡的功效，近年來廣泛用于腫瘤病、肝炎及皮膚病的治療。其臨床上內(nèi)服需經(jīng)米炒炮制?，F(xiàn)代研究證明，斑蝥的主要化學(xué)成分為斑蝥素（Cantharidin，C10H12O4），此外尚含脂肪、多種微量元素及蟻酸等。目前，斑蝥化學(xué)成分的研究主要集中在斑蝥素含量測定及其衍生物的合成上，本課題組曾報(bào)道斑蝥的種屬藥用資源、南方大斑蝥化學(xué)成分及其不同產(chǎn)地化學(xué)成分比較[2～4]。本文首次對斑蝥炮制前后脂肪酸成分進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（GC-MS）分析鑒定，觀察炮制前后成分變化情況，以為斑蝥脂肪油資源合理開發(fā)應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

HP6890GC/5973MS氣-質(zhì)聯(lián)用儀、HP 7683自動(dòng)進(jìn)樣器（美國惠普公司）；AY220電子天平（日本島津公司）。

石油醚（30～60℃）、氫氧化鈉、甲醇、三氟化硼-乙醚溶液、甲醇、正己烷、氯化鈉等均為分析純，水為去離子蒸餾水；生斑蝥購自湖北，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院陳建偉教授鑒定為南方大斑蝥M.phalerataPallas的干燥體；炒斑蝥按《中國藥典》斑蝥炮制項(xiàng)下[1]方法自制，經(jīng)含量測定符合標(biāo)準(zhǔn)。生品與米炒品藥材于60℃烘干粉碎，過100目篩，置干燥器中備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 脂肪油的制備

精密稱定生、炒斑蝥粉末各5.0g，置于索氏提取器中，適量石油醚50℃水浴回流提取6h，減壓回收溶劑至干，低溫烘干至恒重，得斑蝥油脂。生、炒品得率分別為18.6%、23.0%。

2.2 脂肪油的甲酯化[5]

取上述2種脂肪油各0.1g，精密稱定。加入0.5mol·L-1氫氧化鈉-甲醇溶液4mL，置60℃水浴皂化至油珠完全消失，加入14%三氟化硼-甲醇5mL，繼續(xù)水浴5min，加入正己烷2mL，冷卻后加入飽和氯化鈉溶液20mL，分液漏斗萃取，取上清液適量離心，過0.45μm濾膜，取續(xù)濾液備用。

2.3 分析條件

2.3.1 GC條件 色譜柱：HP-5（5%PH ME Silloxane，30m×0.25mm×0.25μm）；載氣：高純He（99.99%）；流速：1.0mL·min-1；進(jìn)樣口溫度：270℃；程序升溫：初始溫度100℃，以10℃·min-1升至180℃，保持10min，再以2℃·min-1升至220℃，以10℃·min-1升至260℃；分流比：50∶1，進(jìn)樣量：1μL。2.3.2MS條件 離子源（EI）溫度：230℃；四級桿溫度：150℃；倍增電壓：1424V；電子能量：70eV；接口溫度：290℃；溶劑延遲時(shí)間：2min；掃描范圍：50～550amu。

2.4 結(jié)果

按照上述測定條件，得到生、炒斑蝥脂肪油中脂肪酸的總離子流圖。斑蝥GC-MS總離子流色譜見圖1。

圖1 斑蝥GC-MS總離子流色譜圖A.生斑蝥；B.炒斑蝥Fig1 Total ion chromatogram of Mylabris by GC-MSA.pre-processed Mylabris；B.post-processed Mylabris

各色譜峰相應(yīng)的MS圖經(jīng)人工解析及NIST 02MS庫檢索定性，并根據(jù)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)對色譜峰的峰面積進(jìn)行歸一化處理。斑蝥脂肪酸GC-MS分析結(jié)果見表1。

由表1可知，斑蝥炮制前、后脂肪酸種類與相對含量均未發(fā)生明顯變化，生品和米炒品中共分離鑒定出10種脂肪酸，分別占總提物含量的95.18%、97.87%，其余組分為柱流失。其中飽和脂肪酸7種，分別占脂肪酸總含量的32.75%、32.73%，以棕櫚酸、硬脂酸、花生酸為主；不飽和脂肪酸3種，分別占脂肪酸總含量的67.25%、67.27%，為油酸、亞油酸和棕櫚油酸，其中油酸含量高達(dá)50%左右。

表1 斑蝥脂肪酸GC-MS分析結(jié)果Tab1 GC-MS analysis of the fatty acids from Mylabris

3 討論

脂肪酸的沸點(diǎn)高、極性強(qiáng)，一般需經(jīng)甲酯化衍生后進(jìn)樣。甲酯化方法有多種，本試驗(yàn)所使用的三氟化硼法為2009年國家標(biāo)準(zhǔn)（GB-T17376-2008）方法，此法能利用快速皂化使脂肪酸鹽直接轉(zhuǎn)化為脂肪酸甲酯，減少酸化提取手續(xù)，并且可以防止常規(guī)皂化時(shí)所引起的異構(gòu)化，提高了試驗(yàn)的穩(wěn)定性。試驗(yàn)中還考察了衍生化試劑的量以及衍生化時(shí)間對結(jié)果的影響，最終確定了甲酯化的條件。

本試驗(yàn)斑蝥脂肪油樣品濃度均為10mg·mL-1，從GC-MS分析結(jié)果看出，炮制對斑蝥中脂肪酸組成影響不大；另一方面也表明輔料米在炮制過程中并未起到吸附油脂的作用，與文獻(xiàn)[6]報(bào)道一致。

現(xiàn)代研究表明，不飽和脂肪酸具有降血脂、降血壓、軟化血管、促進(jìn)免疫以及抗炎、抗腫瘤等生理活性[7]。斑蝥中不飽和脂肪酸的含量高達(dá)60%以上，并存在著自然界中較為少見的奇數(shù)碳鏈脂肪酸（C17∶0、C19∶0）。有報(bào)道表明，奇數(shù)碳鏈脂肪酸有較強(qiáng)的抗癌活性[8]。有關(guān)斑蝥中脂肪油是否具有抗癌活性尚待進(jìn)一步研究。

很多昆蟲中脂肪酸比例十分趨近于營養(yǎng)學(xué)推薦比例標(biāo)準(zhǔn)，具有較合理的脂肪酸組成，有很高的營養(yǎng)價(jià)值。斑蝥富含脂肪酸，作為斑蝥藥材提取斑蝥素的副產(chǎn)物可加以開發(fā)利用。

[1] 國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：311.

[2] 張建輝，陳建偉，李 祥.斑蝥及其近緣種屬藥用資源研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2009，34（6）：647.

[3] 張建輝，陳建偉，武露凌，等.南方大斑蝥酸水解-丙酮提取物成分的GC/MS分析[J].中國藥房，2009，20（30）：2363.

[4] 張建輝，陳建偉，許金國，等.不同產(chǎn)地南方大斑蝥水解產(chǎn)物化學(xué)成分的比較分析[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2009，21（3）：449.

[5] GB/T 17376-2008，動(dòng)植物油脂脂肪酸甲酯制備[S].

[6] 王正益，張振凌，田志圣，等.斑蝥烘法新工藝芻探[J].中藥通報(bào)，1986，11（7）：406.

[7] 毛 峰，秦振華.長鏈多不飽和脂肪酸與人體健康[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2006，3（3）：40.

[8] Hou CT，Shaw Jei-Fu.Biocatalysis and Agricultural Biotechnology[M].New York：CRC Press，2009：260.

GC-MS Analysis of Fatty Acids fromMylabrisbefore and after Processing

LIU Qin，CHEN Jian-wei，LI Xiang
（College of Pharmacy，Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Nanjing 210046，China）
CHEN Jian-wei，LI Xiang
（Jiangsu Key Laboratory for Chinese Materia Medica Processing，Nanjing 210029，China）
WU Lu-ling
（Jiangsu Institute of Sports Science Research，Nanjing 210014，China）

OBJECTIVE：To analyze the chemical constituents of the fatty acids fromMylabrisbefore and after processing.METHODS：The fatty oil ofMylabriswas extracted by petroleum ether and analyzed by GC-MS after methyl esterifying.The content of chemical components was determined by peak area normalization method.RESULTS：10kinds of fatty acid were isolated from preprocessedMylabrisfatty oil and processedMylabrisfatty oil.Main chemical constituents of fatty acid were oleic acid，oleic acid and linoleic acid.CONCLUSION：Processing has little effect onMylabrisfatty acid composition.The study provides theoretical basis for chemical constituent study ofMylabrisbefore and after processing.

Mylabris；Processing；Fatty acids；GC-MS

R284.1；R931.74

A

1001-0408（2011）19-1788-02

Δ江蘇省中藥炮制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放式課題（ZYPZ006）；江蘇省高校自然科學(xué)研究計(jì)劃項(xiàng)目（02KJB360004）

＊碩士研究生。研究方向：中藥活性成分與品質(zhì)評價(jià)。E-mail：liuqin_sy@126.com

#通訊作者：教授，博士研究生導(dǎo)師。研究方向：中藥活性成分與品質(zhì)評價(jià)。電話：025-85811695。E-mail：chenjw695@126.com

2010-07-02

2010-09-15）