周曉明，姚敏娜，曹金一，丁愉，趙美，湯海峰#

（1.第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥劑科，西安市 710032；2.解放軍第 94162部隊(duì)，西安市 710614）

RP-HPLC法測(cè)定復(fù)方酪薩維口腔速崩片中酪薩維和紅景天苷的含量Δ

周曉明1，2＊，姚敏娜1，曹金一1，丁愉1，趙美1，湯海峰1#

（1.第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥劑科，西安市 710032；2.解放軍第 94162部隊(duì)，西安市 710614）

目的：建立測(cè)定復(fù)方酪薩維口腔速崩片中酪薩維和紅景天苷含量的方法。方法：采用反相高效液相色譜法。色譜柱為Agilent TC-C18（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相分別為0.2%磷酸溶液-乙腈＝86∶14（酪薩維）、甲醇-水＝15∶85（紅景天苷），柱溫為35℃，流速為1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)分別為254nm（酪薩維）、275nm（紅景天苷）。結(jié)果：酪薩維和紅景天苷進(jìn)樣量的線性范圍分別為0.08～1.60μg（r＝0.9998）、0.80～8.00μg（r＝0.9993）；平均加樣回收率分別為100.22%（RSD＝1.58%，n＝6）、99.37%（RSD＝1.35%，n＝6）。結(jié)論：本方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好，可用于復(fù)方酪薩維口腔速崩片的質(zhì)量控制。

復(fù)方酪薩維口腔速崩片；酪薩維；紅景天苷；反相高效液相色譜法；含量測(cè)定

景天科紅景天屬（Rhodiola）為多年生草本或亞灌木植物，全世界共有90多種，其中我國(guó)約70余種[1]。國(guó)內(nèi)、外研究表明，紅景天具有抗缺氧、抗疲勞、抗輻射、抗衰老及增強(qiáng)腦力、體力機(jī)能等方面的特殊功效[2，3]，其抗缺氧、抗疲勞作用已通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)和臨床驗(yàn)證。其主要有效成分是苯乙基苷類的紅景天苷（Salidroside）及其苷元酪醇，因此目前紅景天藥材及其制劑均將紅景天苷作為質(zhì)控指標(biāo)，并以它的含量來(lái)區(qū)分藥材優(yōu)劣。但本屬的薔薇紅景天不僅具有優(yōu)于其他紅景天品種的抗疲勞和抗缺氧作用，還具有獨(dú)特的雙向調(diào)節(jié)功效。酪薩維（Rosavin）為薔薇紅景天中的特有成分，因此推斷其顯著的藥效和獨(dú)特的雙向調(diào)節(jié)功效可能與酪薩維有關(guān)[4]。目前開(kāi)發(fā)的紅景天制劑多為膠囊劑、片劑、口服液等口服劑型，均具有起效慢、攜帶不便等缺點(diǎn)，不能適應(yīng)突發(fā)應(yīng)急的需要。筆者經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)，最終以薔薇紅景天提取物為主藥，配以冰片、低取代羥丙基纖維素等輔料，采用粉末直接壓片技術(shù)，研制了復(fù)方酪薩維口腔速崩片，這種技術(shù)在紅景天制劑中首次應(yīng)用。筆者以酪薩維和紅景天苷為指標(biāo)，采用反相高效液相色譜（RP-HPLC）法測(cè)定復(fù)方酪薩維口腔速崩片中這2種成分的含量，以為進(jìn)一步制定該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

LC10A型HPLC儀、SPD10A型紫外檢測(cè)器（日本島津公司）；BS110S型電子分析天平（北京賽多利斯天平有限公司）；DL-360A超聲波清洗器（上海之信儀器有限公司，功率：200W，頻率：40kHz）。

酪薩維（批號(hào)：200412）、紅景天苷（批號(hào)：200404）對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；復(fù)方酪薩維口腔速崩片（第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥劑科自制，批號(hào)：091101、091102、091103）；乙腈為色譜純，水為純凈水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent TC-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流速：1.0mL·min-1；柱溫：35℃；測(cè)定酪薩維的流動(dòng)相為0.2%磷酸溶液-乙腈（86∶14），檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；測(cè)定紅景天苷的流動(dòng)相為甲醇-水（15∶85），檢測(cè)波長(zhǎng)為275nm。酪薩維和紅景天苷的HPLC分別見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 酪薩維的HPLC圖A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性對(duì)照；a.酪薩維Fig1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；C.negative control；a.rosavin

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取酪薩維對(duì)照品4mg，用甲醇定容于50mL容量瓶中，加入甲醇超聲溶解，放冷至室溫，定容，制成0.08mg·mL-1的酪薩維對(duì)照品溶液。另精密稱取紅景天苷對(duì)照品4mg，置10mL容量瓶中，加入甲醇超聲溶解，放冷至室溫，定容，制成0.4mg·mL-1的紅景天苷對(duì)照品溶液。

圖2 紅景天苷的HPLC圖A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性對(duì)照；a.紅景天苷Fig2 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；C.negative control；a.rosavin

2.2.2 供試品溶液 取本品5片（片重為0.6g），精密稱定，研細(xì)，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，搖勻，稱重，超聲處理45min，放冷至室溫，稱重，用甲醇補(bǔ)足失重，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得酪薩維的供試品溶液。另取本品10片（片重為0.6g），精密稱定，研細(xì)，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL，密塞，搖勻，稱重，超聲處理30min，放冷至室溫，稱重，用甲醇補(bǔ)足失重，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得紅景天苷的供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液 取不含薔薇紅景天提取物處方同法制備的陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 精密稱取酪薩維對(duì)照品8mg，用甲醇定容于50mL容量瓶中，分別精密移取該溶液0.5、2、4、6、8、10mL，置于10mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得濃度分別為8、32、64、96、128、160μg·mL-1的對(duì)照品溶液。按上述色譜條件分別進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積。以進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得酪薩維的回歸方程為Y＝574697X+9680.8（r＝0.9998，n＝6）。結(jié)果表明，酪薩維進(jìn)樣量在0.08～1.60μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。另精密稱取紅景天苷對(duì)照品20mg，用甲醇定容于25mL容量瓶中，分別精密移取該溶液0.5、1、2、3、4、5mL，置于5mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，分別進(jìn)樣10μL，計(jì)算峰面積。以進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得紅景天苷的回歸方程為Y＝468863X+17546（r＝0.9993，n＝6）。結(jié)果表明，紅景天苷進(jìn)樣量在0.80～8.00μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.3.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取酪薩維和紅景天苷對(duì)照品溶液各10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，二者的RSD分別為0.83%和0.64%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別于制備完成后0、2、4、8、12、24h按上述色譜條件進(jìn)樣10μL，記錄酪薩維和紅景天苷的峰面積。結(jié)果，二者的RSD分別為1.26%和1.65%（n＝6），表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取復(fù)方酪薩維口腔速崩片（批號(hào)：091102）適量，共6份，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣10μL，測(cè)定酪薩維和紅景天苷的含量。結(jié)果，二者的RSD分別為1.10%和1.47%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批復(fù)方酪薩維口腔速崩片（批號(hào)：091102）適量，共6份，精密稱定，分別加入一定量的酪薩維和紅景天苷對(duì)照品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述方法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果分別見(jiàn)表1、表2。

表1 酪薩維的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab1 Results of recovery test of rosavin（n＝6）

表2 紅景天苷的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab2 Results of recovery test of salidroside（n＝6）

2.4 樣品含量測(cè)定

取3個(gè)批號(hào)的樣品，分別按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下分別進(jìn)樣10μL，測(cè)定樣品中酪薩維和紅景天苷的含量，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 樣品中酪薩維和紅景天苷的含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab3 Content determination of rosavin and salidroside in samples（n＝3）

從表3中結(jié)果可看出，復(fù)方酪薩維口腔速崩片平均每片含酪薩維0.823mg（0.140%），含紅景天苷0.390mg（0.065%）。

3 討論

為了達(dá)到口腔速崩制劑所規(guī)定的崩解時(shí)限與口感要求，筆者在研制復(fù)方酪薩維口腔速崩片的過(guò)程中加入了多種藥用輔料，但在含量測(cè)定中，該制劑經(jīng)過(guò)超聲法提取后在HPLC圖中未出現(xiàn)過(guò)多雜質(zhì)峰，尤其是在檢測(cè)成分峰周圍未見(jiàn)有雜質(zhì)峰影響，說(shuō)明這種超聲提取的方法適用于此種制劑。

紅景天苷為紅景天屬植物的活性成分，且2010年版《中國(guó)藥典》[5]規(guī)定以紅景天苷的含量作為紅景天藥材的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，紅景天制劑[6，7]也多采用紅景天苷作為含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。但本制劑中主要原料藥為薔薇紅景天提取物，而酪薩維又是其特有的成分，如果僅選用紅景天苷的含量作為其質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)就略顯不足，所以筆者將酪薩維和紅景天苷的含量測(cè)定共同作為復(fù)方酪薩維口腔速崩片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

試驗(yàn)過(guò)程中，筆者一直致力于尋找一種更適合的方法可以同時(shí)測(cè)定紅景天苷和酪薩維2種成分的含量，但由于酪薩維的化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有更長(zhǎng)的共軛結(jié)構(gòu)，紫外吸收有明顯的紅移，二者沒(méi)有共同的最大吸收波長(zhǎng)，若測(cè)定過(guò)程中以一種成分的最大吸收波長(zhǎng)為檢測(cè)波長(zhǎng)，則另一種成分的吸收峰會(huì)很低，不利于測(cè)定值的準(zhǔn)確；若兼顧二者，采取折中的吸收波長(zhǎng)，則會(huì)使二者測(cè)定值均有所降低；而且2種成分的極性比較大，如果側(cè)重于測(cè)定紅景天苷的含量，采用其洗脫比例，則酪薩維在此條件下的出峰時(shí)間會(huì)大大延長(zhǎng)，甚至達(dá)3h以上，使試驗(yàn)效率降低。雖然梯度洗脫可以解決這一問(wèn)題，但很多基層單位使用的是單泵液相色譜儀，儀器達(dá)不到要求，不利于制劑的常規(guī)檢驗(yàn)。綜合考慮，本試驗(yàn)采用了2種制備方法和液相色譜條件分別測(cè)定復(fù)方酪薩維口腔速崩片中酪薩維和紅景天苷的含量。此種方法操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、重復(fù)性好、適用性強(qiáng)，可用于復(fù)方酪薩維口腔速崩片的質(zhì)量控制。

[1] 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志[M].第1版.北京：科學(xué)出版社，1984：161.

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[5] 國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：144.

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Content Determination of Rosavin and Salidroside in Compound Rosavin Rapidly Disintegrating Oral Tablets by RP-HPLC

ZHOU Xiao-ming，YAO Min-na，CAO Jin-yi，DING Yu，ZHAO Mei，TANG Hai-feng
（Dept.of Pharmacy，Xijing Hospital of Fourth Military Medical University，Xi’an 710032，China）
ZHOU Xiao-ming
（No.94162of Chinese People’s Liberation Army，Xi’an 710614，China）

OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of rosavin and salidroside in Compound rosavin rapidly disintegrating oral tablets.METHODS：RP-HPLC method was adopted.The determination was performed on Agilent TC-C18（250mm×4.6mm，5μm）column with mobile phases consisted of 0.2%phosphoric acid-acetonitrile（86∶14）for rosavin and methanol-water（15∶85）for salidroside at flow rate of 1.0mL·min-1.The detection wavelength was set at 254nm and 275nm，and the column temperature was 35℃.RESULTS：The linear ranges of rosavin and salidroside were 0.08～1.60μg（r＝0.9998）and 0.80～8.00μg（r＝0.9993）.The average recoveries were 100.22%（RSD＝1.58%，n＝6）and 99.37%（RSD＝1.35%，n＝6），respectively.CONCLUSION：The method is simple，accurate specific and reproducible，and it is applicable for the quality control of Compound rosavin rapidly disintegrating oral tablets.

Compound rosavin rapidly disintegrating oral tablets；Rosavin；Salidroside；RP-HPLC；Content determination

#通訊作者：教授，博士。研究方向：天然藥化和新藥研發(fā)。電話：029-84775471。E-mail：natprod@163.com

R283.64；R927.2

A

1001-0408（2011）19-1780-03

Δ國(guó)家重大新藥創(chuàng)制基金專項(xiàng)課題（2009ZXJ09004-082）

＊碩士研究生。研究方向：天然藥化和新藥研發(fā)。電話：029-84775471-8036。E-mail：zhouming820405@gmail.com

2010-11-22

2011-03-14）